緒論一、發酵工程實驗的特點(一)發酵工程實驗的目的和要求(二)實驗室的一般要求二、發酵工程實驗室的特點與要求(一)發酵工程實驗的特點(二)發酵工程實驗的要求(三)發酵工程實驗室的安排三、發酵工程實驗設計(方案)的基本步驟(一)實驗設計(方案)的內容及要求(二)實驗設計(方案)的擬定步驟(三)數據回歸分析四、發酵工程實驗常用的設備(一)搖瓶(二)搖床(三)發酵罐**部分 基本技能實驗**章 菌種改造**節 菌種分離純化和自然選育第二節 微生物的誘變育種(一)誘變育種步驟(二)物理誘變與化學誘變第三節 富集培養技術在育種中的應用(一)抗性突變株的富集(二)營養缺陷型的富集第四節 原生質體育種(一)標記菌株的篩選(二)原生質體的制備(三)原生質體的再生(四)原生質體的融合(五)融合子的選擇實驗一 菌種的分離純化實驗二 紫外誘變實驗三 微波誘變實驗四 亞硝基胍誘變實驗五 噬菌體的分離和測定實驗六 抗噬菌體菌種選育實驗七 氨基酸抗反饋調節突變株的選育實驗八 大腸桿菌營養缺陷型的篩選實驗九 原生質體制備及再生實驗十 原生質體融合第五節 基因組改組技術第六節 微生物基因工程技術及其在微生物種中的應用(一)目的基因的獲取(二)克隆載體的選擇與構建(三)外源基因與載體的連接(四)重組DNA導人受體細胞(五)重組體的篩選(六)克隆基因的表達(七)PCR技術擴增目的基因實驗十一 基因組改組技術篩選蛋白酶高產菌株實驗十二 基因組DNA的提取實驗十三 煮沸法快速提取質粒DNA實驗十四 堿裂解法抽提質粒DNA與鑒定實驗十五 DNA的限制性內切酶消化實驗十六 瓊脂糖電泳檢測DNA實驗十七 PCR技術擴增枯草桿菌deoD基因實驗十八 重組T質粒的構建實驗十九 感受態的制備和轉化實驗二十 重組質粒的鑒定——菌落PCR第二章 培養基配制與滅菌**節 培養基的配制(一)微生物的營養需求及對物質的吸收(二)培養基(三)培養基的配制第二節 高壓蒸汽滅菌(一)滅菌與消毒的基本概念(二)高壓蒸汽滅菌的原理(三)高壓滅菌設備實驗二十一 培養基的配制實驗二十二 高壓滅菌鍋的使用第三章 搖瓶發酵**節 發酵原理(一)營養(二)溫度(三)pH(四)溶氧第二節 搖瓶發酵實驗實驗二十三 接種工具的認識與滅菌實驗二十四 接種和移種實驗二十五 枯草芽孢桿菌生產腺苷實驗二十六 重組大腸桿菌羧肽酶的表達實驗二十七 洛伐他汀發酵實驗二十八 林可霉素發酵實驗二十九 四環素類抗生素定向發酵實驗三十 半乳糖苷酶生成的調節實驗三十一 芽孢桿菌發酵產堿性蛋白酶第四章 發酵生化參數的測定**節 生化參數測定原理第二節 生化參數分析方法實驗三十二 比濁法測定發酵液中大腸桿菌濃度實驗三十三 測定菌體干重實驗三十四 紫外分光光度法定量測定細胞總核酸實驗三十五 紅霉素效價的化學法測定一實驗三十六 紅霉素效價的化學法測定二實驗三十七 紅霉素生物效價的測定實驗三十八 二劑量法測定林可霉素生物效價實驗三十九 利福霉素化學效價的測定實驗四十 檸檬酸含量測定一實驗四十一 檸檬酸含量測定二實驗四十二 衣康酸含量測定實驗四十三 丙酮酸含量測定實驗四十四 用SBA-40C型生物傳感分析儀測定谷氨酸和谷氨酰胺實驗四十五 華勃氏呼吸儀測定谷氨酸的量實驗四十六 雙縮脲法測定蛋白質含量實驗四十七 Folin-酚法測定蛋白質濃度實驗四十八 考馬斯亮藍法測定蛋白質濃度實驗四十九 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)檢測蛋白表達和測定蛋白質相對分子質量實驗五十 發酵液中糖含量的測定實驗五十一 DNS法測定還原糖濃度實驗五十二 酶試劑盒法測定葡萄糖含量實驗五十三 SBA-40型谷氨酸(乳酸)-葡萄糖雙功能分析儀測定葡萄糖含量實驗五十四 發酵液氮含量的測定實驗五十五 靛酚藍法測定銨離子實驗五十六 鉬酸銨法測定無機磷實驗五十七 還原法測定無機磷實驗五十八 鉬釩法測定無機磷實驗五十九 無細胞抽提液的制備實驗六十 葡萄糖激酶的酶活測定實驗六十一 磷酸果糖激酶的測定實驗六十二 異檸檬酸脫氫酶活力測定實驗六十三 6-磷酸葡萄糖脫氫酶的測定實驗六十四 丙酮酸激酶活力測定實驗六十五 檸檬酸合成酶活力測定實驗六十六 堿性磷酸酶(AKP)酶活測定實驗六十七 脂肪酶活力測定實驗六十八 堿性蛋白酶活力測定實驗六十九 酰基激酶活力的測定實驗七十 酰基CoA合成酶活力的測定第五章 色譜分析在發酵工程中的應用**節 色譜分析概述(一)氣相色譜法的特點(二)氣相色譜分離條件的選擇(三)液相色譜法的特點(四)高效液相色譜分析方法的建立第二節 色譜法在發酵工程中的應用(一)反相HPLC雙檢測器法同時測定發酵液中的有機酸與葡萄糖(二)AQC柱前衍生高效液相色譜法測定發酵液中21種氨基酸(三)利用反相高效液相色譜法測定發酵液中的生物素含量(四)利用乙腈作為內標氣相色譜法快速測定發酵液中的乳酸第六章 過程工程參數測定**節 微生物反應器的混合原理第二節 微生物反應器的氧傳遞過程原理實驗七十一 亞硫酸鈉氧化法測定氧傳遞系數K1a實驗七十二 用溶氧電極法的動態法測定氧傳遞系數K1a實驗七十三 混合時間測定第二部分 綜合實驗第七章 微生物培養實驗一 聚賴氨酸生產菌株的選育與發酵工藝的研究實驗二 D-核糖發酵實驗三 重組大腸桿菌發酵人銅鋅超氧化物歧化酶的高密度、高表達實驗四 黑曲霉產纖維素酶液體發酵實驗五 擬干酪乳桿菌發酵生產乳酸實驗六 嘌呤核苷磷酸化酶在大腸桿菌中表達和酶學性質測定實驗七 酶催化蔗糖轉化反應實驗八 酵母培養中的基質代謝、呼吸和生長的參數檢測與參數相關分析實驗九 酵母菌厭氧乙醇發酵實驗十 重組畢赤酵母高密度發酵表達植酸酶及其分離純化第八章 動物細胞培養實驗十一 造血細胞分離、集落培養及表型分析實驗十二 動物細胞的培養和計數實驗十三 細胞的冷凍和復蘇參考文獻