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家蠶微粒子病防控技術(shù) 版權(quán)信息
- ISBN：9787030741790
- 條形碼：9787030741790 ; 978-7-03-074179-0
- 裝幀：一般膠版紙
- 冊(cè)數(shù)：暫無(wú)
- 重量：暫無(wú)
- 所屬分類(lèi)：>
家蠶微粒子病防控技術(shù) 內(nèi)容簡(jiǎn)介
本書(shū)包括上篇（家蠶微粒子蟲(chóng)的來(lái)源及控制技術(shù)）、中篇（家蠶微孢子蟲(chóng)在個(gè)體中擴(kuò)散及控制技術(shù)）、下篇（家蠶微孢子蟲(chóng)在飼養(yǎng)群體中擴(kuò)散及控制技術(shù)）和實(shí)驗(yàn)方法篇，共計(jì)十三章，以及參考文獻(xiàn)和附錄等。從家蠶微粒子蟲(chóng)是哪里來(lái)、如何進(jìn)入家蠶個(gè)體、如何在家蠶飼養(yǎng)群體中擴(kuò)散的3個(gè)維度，在理論研究基礎(chǔ)上，開(kāi)展技術(shù)研發(fā)的進(jìn)展等進(jìn)行了闡述和思考，并提出了家蠶微粒子蟲(chóng)變異機(jī)制、胚胎感染的蠶座內(nèi)連續(xù)感染擴(kuò)散模式，以及病害檢疫中基于風(fēng)險(xiǎn)閾值的管理模式等學(xué)術(shù)觀點(diǎn)，期望為后繼者的學(xué)術(shù)研究和產(chǎn)業(yè)發(fā)展提供有益參考。
家蠶微粒子病防控技術(shù) 目錄
目錄
前言
緒論 1
**篇 家蠶微粒子蟲(chóng)來(lái)源及防控技術(shù)
第1章 感染家蠶的微孢子蟲(chóng) 11
1.1 家蠶微粒子蟲(chóng) 11
1.1.1 家蠶微粒子蟲(chóng)的分類(lèi)簡(jiǎn)史 11
1.1.2 家蠶微粒子蟲(chóng)的分類(lèi)學(xué)地位 12
1.1.3 家蠶微粒子蟲(chóng)的分類(lèi)學(xué)特征 12
1.2 其他家蠶微孢子蟲(chóng) 14
1.2.1 具褶孢蟲(chóng)屬（Pleistophora）的分類(lèi)學(xué)特征和地位 15
1.2.2 泰羅漢孢蟲(chóng)屬（Thelohania）的分類(lèi)學(xué)特征和地位 16
1.2.3 變形孢蟲(chóng)屬（Vairimorpha）的分類(lèi)學(xué)特征和地位 17
1.2.4 內(nèi)網(wǎng)蟲(chóng)屬（Endoreticulatus）的分類(lèi)學(xué)特征和地位 19
1.3 養(yǎng)蠶相關(guān)昆蟲(chóng)來(lái)源微孢子蟲(chóng) 20
1.3.1 野外昆蟲(chóng)來(lái)源微孢子蟲(chóng) 20
1.3.2 野外昆蟲(chóng)來(lái)源微孢子蟲(chóng)的分類(lèi)學(xué)研究 21
1.3.3 野外昆蟲(chóng)來(lái)源微孢子蟲(chóng)對(duì)家蠶的感染性 21
1.4 家蠶微粒子蟲(chóng)的生物進(jìn)化分析 22
1.4.1 基于分子生物學(xué)的分類(lèi)與進(jìn)化分析 22
1.4.2 家蠶微粒子蟲(chóng)α-和β-微管蛋白部分基因的克隆及系統(tǒng)發(fā)育分析 25
1.5 家蠶來(lái)源內(nèi)網(wǎng)蟲(chóng)屬樣微孢子蟲(chóng) 32
1.5.1 內(nèi)網(wǎng)蟲(chóng)屬樣微孢子蟲(chóng)的形態(tài)學(xué)和感染性觀察 33
1.5.2 內(nèi)網(wǎng)蟲(chóng)屬樣微孢子蟲(chóng)嵊州株rRNA基因序列的研究 36
第2章 家蠶微孢子蟲(chóng)的變異 42
2.1 昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)的寄主域 42
2.1.1 微孢子蟲(chóng)的寄主專(zhuān)一性 42
2.1.2 溫度和光照等環(huán)境因子對(duì)微孢子蟲(chóng)感染性的影響 44
2.1.3 家蠶微粒子蟲(chóng)對(duì)其他昆蟲(chóng)的感染性及感染后的孢子形態(tài)變化 45
2.2 家蠶微粒子蟲(chóng)感染桑尺蠖后孢子表面蛋白的變化 50
2.2.1 家蠶微粒子蟲(chóng)與24Nb-H孢子表面蛋白的聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）比較 51
2.2.2 家蠶微粒子蟲(chóng)與24Nb-H孢子表面蛋白的2-DE比較 51
2.2.3 家蠶微粒子蟲(chóng)與24Nb-H孢子總蛋白的SDS-PAGE比較 53
2.2.4 家蠶微粒子蟲(chóng)與24Nb-H孢子總蛋白的固相2-DE比較 54
2.2.5 孢子表面蛋白與總蛋白的2-DE圖譜比較 56
2.3 家蠶來(lái)源內(nèi)網(wǎng)蟲(chóng)屬樣微孢子蟲(chóng)嵊州株與Nb孢子表面蛋白的比較 58
2.3.1 內(nèi)網(wǎng)蟲(chóng)屬樣微孢子蟲(chóng)嵊州株與Nb孢子表面蛋白的SDS-Urea PAGE比較 59
2.3.2 內(nèi)網(wǎng)蟲(chóng)屬樣微孢子蟲(chóng)嵊州株與Nb孢子表面蛋白的固相2-DE比較 59
第3章 養(yǎng)蠶環(huán)境中微孢子蟲(chóng)的分布與家蠶微粒子病檢測(cè)技術(shù) 65
3.1 養(yǎng)蠶環(huán)境病原微生物的分布 65
3.1.1 取樣和檢測(cè)方法 67
3.1.2 蠶室環(huán)境樣本的檢測(cè) 68
3.1.3 不同養(yǎng)蠶技術(shù)水平農(nóng)戶(hù)不同蠶室環(huán)境樣本的檢出率比較 70
3.1.4 不同養(yǎng)蠶階段蠶室環(huán)境樣本的檢出率比較 71
3.2 家蠶微粒子病的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù) 73
3.2.1 免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的特點(diǎn) 74
3.2.2 液氮處理Nb孢子和未處理Nb孢子包被效果的對(duì)比 75
3.2.3 純化Nb孢子的ELISA檢測(cè)及模擬感染家蠶微粒子病蠶卵的檢測(cè) 75
3.3 家蠶微粒子病的分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù) 79
3.3.1 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子的破碎與核酸獲取 79
3.3.2 常規(guī)PCR檢測(cè) 87
3.3.3 熒光定量PCR檢測(cè) 92
3.3.4 蠶種（卵）的家蠶微粒子病檢測(cè) 96
3.3.5 蠶卵組織對(duì)熒光定量PCR檢測(cè)的影響 102
第二篇 家蠶微粒子蟲(chóng)在個(gè)體中擴(kuò)散及防控技術(shù)
第4章 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子發(fā)芽和入侵細(xì)胞 111
4.1 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子的發(fā)芽 111
4.1.1 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子的發(fā)芽過(guò)程 111
4.1.2 微孢子蟲(chóng)孢子發(fā)芽前-后孢內(nèi)糖的變化 112
4.1.3 環(huán)境理化因子對(duì)微孢子蟲(chóng)孢子發(fā)芽的影響 113
4.2 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子發(fā)芽相關(guān)孢壁蛋白的研究 115
4.2.1 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子孢壁蛋白單克隆抗體特異性鑒定 116
4.2.2 單克隆抗體對(duì)家蠶微粒子蟲(chóng)孢子體外發(fā)芽的影響 117
4.2.3 單抗3C2對(duì)家蠶微粒子蟲(chóng)孢子感染BmN細(xì)胞的影響 118
4.2.4 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子表面蛋白SP84的分離純化及定位 122
4.2.5 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子表面蛋白SP84的免疫共沉淀和質(zhì)譜鑒定 125
4.3 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子發(fā)芽前-后轉(zhuǎn)錄組的差異分析 130
4.3.1 轉(zhuǎn)錄組序列拼接和分析 130
4.3.2 基因注釋和差異基因表達(dá)分析 131
4.3.3 差異表達(dá)基因聚類(lèi)分析和功能富集性分析 135
4.3.4 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子發(fā)芽相關(guān)候選基因的預(yù)測(cè) 137
4.4 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子發(fā)芽前-后的Label-free蛋白質(zhì)組學(xué)定量分析 139
4.4.1 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子發(fā)芽前-后蛋白質(zhì)的Label-free定量色譜分析 139
4.4.2 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子發(fā)芽前-后鑒定蛋白的GO分析 145
4.4.3 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子發(fā)芽前-后鑒定蛋白的KEGG分析 148
第5章 家蠶微粒子蟲(chóng)入侵家蠶細(xì)胞及繁殖 155
5.1 家蠶微粒子蟲(chóng)與粉紋夜蛾培養(yǎng)細(xì)胞的相互作用 156
5.1.1 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子接種Tn培養(yǎng)細(xì)胞的透射電鏡觀察 156
5.1.2 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子接種Tn培養(yǎng)細(xì)胞的激光共聚焦顯微鏡觀察 157
5.1.3 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子接種Tn培養(yǎng)細(xì)胞的孢子計(jì)數(shù)和大小測(cè)定 159
5.1.4 Tn培養(yǎng)細(xì)胞總蛋白和Nb孢壁蛋白的SDS-PAGE分析 160
5.2 家蠶微粒子蟲(chóng)感染家蠶幼蟲(chóng)對(duì)部分生理生化指標(biāo)的影響 162
5.2.1 家蠶微粒子蟲(chóng)感染家蠶幼蟲(chóng)對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育、中腸和血液蛋白酶活性的影響 163
5.2.2 家蠶微粒子蟲(chóng)感染家蠶幼蟲(chóng)對(duì)血液和中腸蛋白的影響 166
5.2.3 家蠶微粒子蟲(chóng)感染家蠶幼蟲(chóng)對(duì)海藻糖酶活性的影響 167
5.3 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子母細(xì)胞和成熟孢子蛋白差異的比較 168
5.3.1 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子生殖階段細(xì)胞的分離 169
5.3.2 孢子母細(xì)胞和成熟孢子蛋白的2-DE分析 171
5.3.3 MALDI-TOF/TOF MS分析及數(shù)據(jù)庫(kù)搜索 171
5.4 家蠶微粒子蟲(chóng)感染家蠶培養(yǎng)細(xì)胞的蛋白質(zhì)組分析 173
5.4.1 家蠶微粒子蟲(chóng)在BmN培養(yǎng)細(xì)胞中的增殖 173
5.4.2 接種Nb孢子BmN細(xì)胞培養(yǎng)物的2-DE分析 173
5.4.3 接種Nb孢子BmN細(xì)胞培養(yǎng)物差異蛋白點(diǎn)的質(zhì)譜鑒定 175
5.4.4 接種Nb孢子細(xì)胞培養(yǎng)物差異蛋白的生物信息學(xué)分析與功能驗(yàn)證 176
5.5 家蠶微粒子蟲(chóng)對(duì)寄主BmN細(xì)胞凋亡的抑制作用 186
5.5.1 微粒子蟲(chóng)感染與家蠶細(xì)胞凋亡 187
5.5.2 放線(xiàn)菌素D處理BmN培養(yǎng)細(xì)胞的DNA片段化 190
第6章 家蠶微粒子蟲(chóng)感染家蠶相關(guān)基因及功能 198
6.1 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子SWP5蛋白基因及功能 198
6.1.1 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子蛋白基因的克隆、表達(dá)及定位 198
6.1.2 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子NbSWP5蛋白在感染過(guò)程中的作用 202
6.2 家蠶微粒子蟲(chóng)孢壁蛋白SWP12基因的克隆、表達(dá)分析及功能研究 209
6.2.1 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子HSWP12蛋白基因的克隆和抗體制備 210
6.2.2 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子孢壁蛋白SWP12在細(xì)胞中的表達(dá)與定位 213
6.2.3 多克隆抗體對(duì)家蠶微粒子蟲(chóng)孢子黏附及感染的抑制效果 214
6.3 家蠶微粒子蟲(chóng)蓖麻毒素B凝集素在感染過(guò)程中的功能 215
6.3.1 家蠶微粒子蟲(chóng)蓖麻毒素B凝集素基因的序列分析、表達(dá)差異分析和克隆 216
6.3.2 家蠶微粒子蟲(chóng)蓖麻毒素B凝集素對(duì)Nb孢子黏附BmN細(xì)胞的影響 220
6.3.3 家蠶微粒子蟲(chóng)蓖麻毒素B凝集素對(duì)Nb侵染BmN細(xì)胞的影響 221
6.4 家蠶微粒子蟲(chóng)Akirin蛋白基因的鑒定與序列分析 223
6.4.1 家蠶微粒子蟲(chóng)感染BmN細(xì)胞的基因差異表達(dá) 226
6.4.2 家蠶微粒子蟲(chóng)Akirin蛋白基因的克隆和測(cè)序分析 231
第7章 家蠶消化道的細(xì)菌微生態(tài) 237
7.1 基于16S rDNA測(cè)序的家蠶消化道細(xì)菌微生態(tài) 238
7.1.1 小蠶期家蠶消化道細(xì)菌微生態(tài) 238
7.1.2 5齡期家蠶消化道細(xì)菌微生態(tài) 241
7.1.3 家蠶消化道細(xì)菌微生態(tài)的主要特征 248
7.2 健康家蠶消化道腸球菌及多樣性 255
7.2.1 腸球菌分離菌株表型特征的多樣性 256
7.2.2 腸球菌的數(shù)值鑒定和多樣性分析 260
7.2.3 基于RAPD技術(shù)的家蠶腸球菌多樣性 263
7.2.4 基于染色體雜交技術(shù)的家蠶腸球菌菌種鑒定 264
7.2.5 基于16S rDNA測(cè)序的家蠶腸球菌菌種鑒定 268
7.2.6 基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜鑒定技術(shù) 271
7.3 家蠶消化液抗腸球菌蛋白 272
7.3.1 家蠶5齡幼蟲(chóng)消化液抗腸球菌蛋白的分離純化與抑菌活性檢測(cè) 272
7.3.2 不同家蠶品種的抗腸球菌蛋白 274
7.3.3 抗腸球菌蛋白的部分特征 275
7.4 家蠶微粒子蟲(chóng)感染對(duì)家蠶中腸腸球菌結(jié)構(gòu)的影響 276
7.4.1 腸球菌總數(shù)的變化及主要菌屬 277
7.4.2 家蠶微粒子蟲(chóng)感染對(duì)腸球菌分布的影響 280
第8章 家蠶個(gè)體水平防控技術(shù)的研究 284
8.1 基于物理因子的蠶種高溫浸酸和熱空氣處理 284
8.2 基于化學(xué)因子的家蠶微粒子病防控藥物實(shí)驗(yàn) 285
8.2.1 幾種化學(xué)藥物對(duì)家蠶微粒子病的濃度效應(yīng) 286
8.2.2 化學(xué)藥物不同添食方式的治療效果 287
8.2.3 化學(xué)藥物對(duì)不同劑量微粒子蟲(chóng)孢子感染的治療效果 288
8.3 微生物因子對(duì)家蠶微粒子病發(fā)生的影響 289
8.3.1 家蠶消化道來(lái)源腸球菌對(duì)家蠶微粒子蟲(chóng)孢子發(fā)芽的抑制作用 289
8.3.2 腸球菌體外抑制家蠶微粒子蟲(chóng)孢子發(fā)芽的動(dòng)力學(xué)研究 292
8.3.3 腸球菌培養(yǎng)物的活性物純化與活性測(cè)定 296
第三篇 家蠶微粒子蟲(chóng)在飼養(yǎng)群體中擴(kuò)散及防控技術(shù)
第9章 環(huán)境來(lái)源家蠶微粒子蟲(chóng)的傳播規(guī)律及防控技術(shù) 307
9.1 家蠶微粒子病的流行規(guī)律分析 310
9.1.1 蠶種生產(chǎn)量對(duì)家蠶微粒子病發(fā)生的影響 312
9.1.2 前-后季養(yǎng)蠶對(duì)家蠶微粒子病發(fā)生的影響 313
9.1.3 不同生產(chǎn)季節(jié)對(duì)家蠶微粒子病發(fā)生的影響 314
9.1.4 不同生產(chǎn)方式對(duì)家蠶微粒子病發(fā)生的影響 315
9.1.5 其他客觀因素對(duì)家蠶微粒子病發(fā)生的影響 316
9.2 消毒和生產(chǎn)過(guò)程家蠶微粒子病檢測(cè)等技術(shù)措施對(duì)其發(fā)生的影響 317
9.2.1 家蠶微粒子蟲(chóng)對(duì)物理和化學(xué)因子的抵抗性 318
9.2.2 化學(xué)藥物對(duì)家蠶微粒子蟲(chóng)的殺滅作用 318
9.2.3 預(yù)知檢查和補(bǔ)正檢查 324
9.3 母蛾檢測(cè)批的規(guī)模類(lèi)型對(duì)家蠶微粒子病流行的影響 328
9.3.1 不同母蛾檢測(cè)批的規(guī)模類(lèi)型數(shù)據(jù)樣本與數(shù)據(jù)處理 329
9.3.2 母蛾檢測(cè)批的規(guī)模類(lèi)型變化 329
9.3.3 母蛾檢測(cè)中未檢出和檢出合格蠶種的分布規(guī)律 332
9.3.4 母蛾檢測(cè)中淘汰蠶種的分布規(guī)律 334
第10章 家蠶微粒子蟲(chóng)胚胎感染的傳播規(guī)律及防控技術(shù) 338
10.1 家蠶幼蟲(chóng)期感染與母蛾感染率、感染程度及胚胎感染率的關(guān)系 339
10.1.1 家蠶5齡幼蟲(chóng)后期不同濃度家蠶微粒子蟲(chóng)添食感染的母蛾感染率及感染程度 339
10.1.2 家蠶5齡期不同階段經(jīng)不同劑量家蠶微粒子蟲(chóng)口腔注射感染的母蛾感染率 340
10.1.3 感染母蛾的胚胎感染率 343
10.2 原種母蛾檢測(cè)與一代雜交蠶種農(nóng)村飼養(yǎng)家蠶微粒子病傳染擴(kuò)散 346
10.2.1 不同家蠶品種的原種母蛾檢測(cè) 347
10.2.2 不同母蛾檢測(cè)結(jié)果類(lèi)型一代雜交蠶種的農(nóng)村飼養(yǎng) 350
10.3 家蠶微粒子蟲(chóng)胚胎感染的傳播規(guī)律 358
10.3.1 家蠶飼養(yǎng)及胚胎感染母蛾個(gè)體樣本制作和檢測(cè) 360
10.3.2 不同家蠶微粒子蟲(chóng)感染程度母蛾所產(chǎn)蠶卵的混育實(shí)驗(yàn) 361
10.3.3 個(gè)體育實(shí)驗(yàn)家蠶微粒子病的檢出時(shí)相 365
10.4 成品卵的家蠶微粒子病檢測(cè) 368
10.4.1 成品卵均勻性的調(diào)
前言
緒論 1
**篇 家蠶微粒子蟲(chóng)來(lái)源及防控技術(shù)
第1章 感染家蠶的微孢子蟲(chóng) 11
1.1 家蠶微粒子蟲(chóng) 11
1.1.1 家蠶微粒子蟲(chóng)的分類(lèi)簡(jiǎn)史 11
1.1.2 家蠶微粒子蟲(chóng)的分類(lèi)學(xué)地位 12
1.1.3 家蠶微粒子蟲(chóng)的分類(lèi)學(xué)特征 12
1.2 其他家蠶微孢子蟲(chóng) 14
1.2.1 具褶孢蟲(chóng)屬（Pleistophora）的分類(lèi)學(xué)特征和地位 15
1.2.2 泰羅漢孢蟲(chóng)屬（Thelohania）的分類(lèi)學(xué)特征和地位 16
1.2.3 變形孢蟲(chóng)屬（Vairimorpha）的分類(lèi)學(xué)特征和地位 17
1.2.4 內(nèi)網(wǎng)蟲(chóng)屬（Endoreticulatus）的分類(lèi)學(xué)特征和地位 19
1.3 養(yǎng)蠶相關(guān)昆蟲(chóng)來(lái)源微孢子蟲(chóng) 20
1.3.1 野外昆蟲(chóng)來(lái)源微孢子蟲(chóng) 20
1.3.2 野外昆蟲(chóng)來(lái)源微孢子蟲(chóng)的分類(lèi)學(xué)研究 21
1.3.3 野外昆蟲(chóng)來(lái)源微孢子蟲(chóng)對(duì)家蠶的感染性 21
1.4 家蠶微粒子蟲(chóng)的生物進(jìn)化分析 22
1.4.1 基于分子生物學(xué)的分類(lèi)與進(jìn)化分析 22
1.4.2 家蠶微粒子蟲(chóng)α-和β-微管蛋白部分基因的克隆及系統(tǒng)發(fā)育分析 25
1.5 家蠶來(lái)源內(nèi)網(wǎng)蟲(chóng)屬樣微孢子蟲(chóng) 32
1.5.1 內(nèi)網(wǎng)蟲(chóng)屬樣微孢子蟲(chóng)的形態(tài)學(xué)和感染性觀察 33
1.5.2 內(nèi)網(wǎng)蟲(chóng)屬樣微孢子蟲(chóng)嵊州株rRNA基因序列的研究 36
第2章 家蠶微孢子蟲(chóng)的變異 42
2.1 昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)的寄主域 42
2.1.1 微孢子蟲(chóng)的寄主專(zhuān)一性 42
2.1.2 溫度和光照等環(huán)境因子對(duì)微孢子蟲(chóng)感染性的影響 44
2.1.3 家蠶微粒子蟲(chóng)對(duì)其他昆蟲(chóng)的感染性及感染后的孢子形態(tài)變化 45
2.2 家蠶微粒子蟲(chóng)感染桑尺蠖后孢子表面蛋白的變化 50
2.2.1 家蠶微粒子蟲(chóng)與24Nb-H孢子表面蛋白的聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）比較 51
2.2.2 家蠶微粒子蟲(chóng)與24Nb-H孢子表面蛋白的2-DE比較 51
2.2.3 家蠶微粒子蟲(chóng)與24Nb-H孢子總蛋白的SDS-PAGE比較 53
2.2.4 家蠶微粒子蟲(chóng)與24Nb-H孢子總蛋白的固相2-DE比較 54
2.2.5 孢子表面蛋白與總蛋白的2-DE圖譜比較 56
2.3 家蠶來(lái)源內(nèi)網(wǎng)蟲(chóng)屬樣微孢子蟲(chóng)嵊州株與Nb孢子表面蛋白的比較 58
2.3.1 內(nèi)網(wǎng)蟲(chóng)屬樣微孢子蟲(chóng)嵊州株與Nb孢子表面蛋白的SDS-Urea PAGE比較 59
2.3.2 內(nèi)網(wǎng)蟲(chóng)屬樣微孢子蟲(chóng)嵊州株與Nb孢子表面蛋白的固相2-DE比較 59
第3章 養(yǎng)蠶環(huán)境中微孢子蟲(chóng)的分布與家蠶微粒子病檢測(cè)技術(shù) 65
3.1 養(yǎng)蠶環(huán)境病原微生物的分布 65
3.1.1 取樣和檢測(cè)方法 67
3.1.2 蠶室環(huán)境樣本的檢測(cè) 68
3.1.3 不同養(yǎng)蠶技術(shù)水平農(nóng)戶(hù)不同蠶室環(huán)境樣本的檢出率比較 70
3.1.4 不同養(yǎng)蠶階段蠶室環(huán)境樣本的檢出率比較 71
3.2 家蠶微粒子病的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù) 73
3.2.1 免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的特點(diǎn) 74
3.2.2 液氮處理Nb孢子和未處理Nb孢子包被效果的對(duì)比 75
3.2.3 純化Nb孢子的ELISA檢測(cè)及模擬感染家蠶微粒子病蠶卵的檢測(cè) 75
3.3 家蠶微粒子病的分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù) 79
3.3.1 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子的破碎與核酸獲取 79
3.3.2 常規(guī)PCR檢測(cè) 87
3.3.3 熒光定量PCR檢測(cè) 92
3.3.4 蠶種（卵）的家蠶微粒子病檢測(cè) 96
3.3.5 蠶卵組織對(duì)熒光定量PCR檢測(cè)的影響 102
第二篇 家蠶微粒子蟲(chóng)在個(gè)體中擴(kuò)散及防控技術(shù)
第4章 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子發(fā)芽和入侵細(xì)胞 111
4.1 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子的發(fā)芽 111
4.1.1 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子的發(fā)芽過(guò)程 111
4.1.2 微孢子蟲(chóng)孢子發(fā)芽前-后孢內(nèi)糖的變化 112
4.1.3 環(huán)境理化因子對(duì)微孢子蟲(chóng)孢子發(fā)芽的影響 113
4.2 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子發(fā)芽相關(guān)孢壁蛋白的研究 115
4.2.1 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子孢壁蛋白單克隆抗體特異性鑒定 116
4.2.2 單克隆抗體對(duì)家蠶微粒子蟲(chóng)孢子體外發(fā)芽的影響 117
4.2.3 單抗3C2對(duì)家蠶微粒子蟲(chóng)孢子感染BmN細(xì)胞的影響 118
4.2.4 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子表面蛋白SP84的分離純化及定位 122
4.2.5 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子表面蛋白SP84的免疫共沉淀和質(zhì)譜鑒定 125
4.3 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子發(fā)芽前-后轉(zhuǎn)錄組的差異分析 130
4.3.1 轉(zhuǎn)錄組序列拼接和分析 130
4.3.2 基因注釋和差異基因表達(dá)分析 131
4.3.3 差異表達(dá)基因聚類(lèi)分析和功能富集性分析 135
4.3.4 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子發(fā)芽相關(guān)候選基因的預(yù)測(cè) 137
4.4 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子發(fā)芽前-后的Label-free蛋白質(zhì)組學(xué)定量分析 139
4.4.1 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子發(fā)芽前-后蛋白質(zhì)的Label-free定量色譜分析 139
4.4.2 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子發(fā)芽前-后鑒定蛋白的GO分析 145
4.4.3 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子發(fā)芽前-后鑒定蛋白的KEGG分析 148
第5章 家蠶微粒子蟲(chóng)入侵家蠶細(xì)胞及繁殖 155
5.1 家蠶微粒子蟲(chóng)與粉紋夜蛾培養(yǎng)細(xì)胞的相互作用 156
5.1.1 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子接種Tn培養(yǎng)細(xì)胞的透射電鏡觀察 156
5.1.2 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子接種Tn培養(yǎng)細(xì)胞的激光共聚焦顯微鏡觀察 157
5.1.3 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子接種Tn培養(yǎng)細(xì)胞的孢子計(jì)數(shù)和大小測(cè)定 159
5.1.4 Tn培養(yǎng)細(xì)胞總蛋白和Nb孢壁蛋白的SDS-PAGE分析 160
5.2 家蠶微粒子蟲(chóng)感染家蠶幼蟲(chóng)對(duì)部分生理生化指標(biāo)的影響 162
5.2.1 家蠶微粒子蟲(chóng)感染家蠶幼蟲(chóng)對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育、中腸和血液蛋白酶活性的影響 163
5.2.2 家蠶微粒子蟲(chóng)感染家蠶幼蟲(chóng)對(duì)血液和中腸蛋白的影響 166
5.2.3 家蠶微粒子蟲(chóng)感染家蠶幼蟲(chóng)對(duì)海藻糖酶活性的影響 167
5.3 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子母細(xì)胞和成熟孢子蛋白差異的比較 168
5.3.1 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子生殖階段細(xì)胞的分離 169
5.3.2 孢子母細(xì)胞和成熟孢子蛋白的2-DE分析 171
5.3.3 MALDI-TOF/TOF MS分析及數(shù)據(jù)庫(kù)搜索 171
5.4 家蠶微粒子蟲(chóng)感染家蠶培養(yǎng)細(xì)胞的蛋白質(zhì)組分析 173
5.4.1 家蠶微粒子蟲(chóng)在BmN培養(yǎng)細(xì)胞中的增殖 173
5.4.2 接種Nb孢子BmN細(xì)胞培養(yǎng)物的2-DE分析 173
5.4.3 接種Nb孢子BmN細(xì)胞培養(yǎng)物差異蛋白點(diǎn)的質(zhì)譜鑒定 175
5.4.4 接種Nb孢子細(xì)胞培養(yǎng)物差異蛋白的生物信息學(xué)分析與功能驗(yàn)證 176
5.5 家蠶微粒子蟲(chóng)對(duì)寄主BmN細(xì)胞凋亡的抑制作用 186
5.5.1 微粒子蟲(chóng)感染與家蠶細(xì)胞凋亡 187
5.5.2 放線(xiàn)菌素D處理BmN培養(yǎng)細(xì)胞的DNA片段化 190
第6章 家蠶微粒子蟲(chóng)感染家蠶相關(guān)基因及功能 198
6.1 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子SWP5蛋白基因及功能 198
6.1.1 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子蛋白基因的克隆、表達(dá)及定位 198
6.1.2 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子NbSWP5蛋白在感染過(guò)程中的作用 202
6.2 家蠶微粒子蟲(chóng)孢壁蛋白SWP12基因的克隆、表達(dá)分析及功能研究 209
6.2.1 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子HSWP12蛋白基因的克隆和抗體制備 210
6.2.2 家蠶微粒子蟲(chóng)孢子孢壁蛋白SWP12在細(xì)胞中的表達(dá)與定位 213
6.2.3 多克隆抗體對(duì)家蠶微粒子蟲(chóng)孢子黏附及感染的抑制效果 214
6.3 家蠶微粒子蟲(chóng)蓖麻毒素B凝集素在感染過(guò)程中的功能 215
6.3.1 家蠶微粒子蟲(chóng)蓖麻毒素B凝集素基因的序列分析、表達(dá)差異分析和克隆 216
6.3.2 家蠶微粒子蟲(chóng)蓖麻毒素B凝集素對(duì)Nb孢子黏附BmN細(xì)胞的影響 220
6.3.3 家蠶微粒子蟲(chóng)蓖麻毒素B凝集素對(duì)Nb侵染BmN細(xì)胞的影響 221
6.4 家蠶微粒子蟲(chóng)Akirin蛋白基因的鑒定與序列分析 223
6.4.1 家蠶微粒子蟲(chóng)感染BmN細(xì)胞的基因差異表達(dá) 226
6.4.2 家蠶微粒子蟲(chóng)Akirin蛋白基因的克隆和測(cè)序分析 231
第7章 家蠶消化道的細(xì)菌微生態(tài) 237
7.1 基于16S rDNA測(cè)序的家蠶消化道細(xì)菌微生態(tài) 238
7.1.1 小蠶期家蠶消化道細(xì)菌微生態(tài) 238
7.1.2 5齡期家蠶消化道細(xì)菌微生態(tài) 241
7.1.3 家蠶消化道細(xì)菌微生態(tài)的主要特征 248
7.2 健康家蠶消化道腸球菌及多樣性 255
7.2.1 腸球菌分離菌株表型特征的多樣性 256
7.2.2 腸球菌的數(shù)值鑒定和多樣性分析 260
7.2.3 基于RAPD技術(shù)的家蠶腸球菌多樣性 263
7.2.4 基于染色體雜交技術(shù)的家蠶腸球菌菌種鑒定 264
7.2.5 基于16S rDNA測(cè)序的家蠶腸球菌菌種鑒定 268
7.2.6 基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜鑒定技術(shù) 271
7.3 家蠶消化液抗腸球菌蛋白 272
7.3.1 家蠶5齡幼蟲(chóng)消化液抗腸球菌蛋白的分離純化與抑菌活性檢測(cè) 272
7.3.2 不同家蠶品種的抗腸球菌蛋白 274
7.3.3 抗腸球菌蛋白的部分特征 275
7.4 家蠶微粒子蟲(chóng)感染對(duì)家蠶中腸腸球菌結(jié)構(gòu)的影響 276
7.4.1 腸球菌總數(shù)的變化及主要菌屬 277
7.4.2 家蠶微粒子蟲(chóng)感染對(duì)腸球菌分布的影響 280
第8章 家蠶個(gè)體水平防控技術(shù)的研究 284
8.1 基于物理因子的蠶種高溫浸酸和熱空氣處理 284
8.2 基于化學(xué)因子的家蠶微粒子病防控藥物實(shí)驗(yàn) 285
8.2.1 幾種化學(xué)藥物對(duì)家蠶微粒子病的濃度效應(yīng) 286
8.2.2 化學(xué)藥物不同添食方式的治療效果 287
8.2.3 化學(xué)藥物對(duì)不同劑量微粒子蟲(chóng)孢子感染的治療效果 288
8.3 微生物因子對(duì)家蠶微粒子病發(fā)生的影響 289
8.3.1 家蠶消化道來(lái)源腸球菌對(duì)家蠶微粒子蟲(chóng)孢子發(fā)芽的抑制作用 289
8.3.2 腸球菌體外抑制家蠶微粒子蟲(chóng)孢子發(fā)芽的動(dòng)力學(xué)研究 292
8.3.3 腸球菌培養(yǎng)物的活性物純化與活性測(cè)定 296
第三篇 家蠶微粒子蟲(chóng)在飼養(yǎng)群體中擴(kuò)散及防控技術(shù)
第9章 環(huán)境來(lái)源家蠶微粒子蟲(chóng)的傳播規(guī)律及防控技術(shù) 307
9.1 家蠶微粒子病的流行規(guī)律分析 310
9.1.1 蠶種生產(chǎn)量對(duì)家蠶微粒子病發(fā)生的影響 312
9.1.2 前-后季養(yǎng)蠶對(duì)家蠶微粒子病發(fā)生的影響 313
9.1.3 不同生產(chǎn)季節(jié)對(duì)家蠶微粒子病發(fā)生的影響 314
9.1.4 不同生產(chǎn)方式對(duì)家蠶微粒子病發(fā)生的影響 315
9.1.5 其他客觀因素對(duì)家蠶微粒子病發(fā)生的影響 316
9.2 消毒和生產(chǎn)過(guò)程家蠶微粒子病檢測(cè)等技術(shù)措施對(duì)其發(fā)生的影響 317
9.2.1 家蠶微粒子蟲(chóng)對(duì)物理和化學(xué)因子的抵抗性 318
9.2.2 化學(xué)藥物對(duì)家蠶微粒子蟲(chóng)的殺滅作用 318
9.2.3 預(yù)知檢查和補(bǔ)正檢查 324
9.3 母蛾檢測(cè)批的規(guī)模類(lèi)型對(duì)家蠶微粒子病流行的影響 328
9.3.1 不同母蛾檢測(cè)批的規(guī)模類(lèi)型數(shù)據(jù)樣本與數(shù)據(jù)處理 329
9.3.2 母蛾檢測(cè)批的規(guī)模類(lèi)型變化 329
9.3.3 母蛾檢測(cè)中未檢出和檢出合格蠶種的分布規(guī)律 332
9.3.4 母蛾檢測(cè)中淘汰蠶種的分布規(guī)律 334
第10章 家蠶微粒子蟲(chóng)胚胎感染的傳播規(guī)律及防控技術(shù) 338
10.1 家蠶幼蟲(chóng)期感染與母蛾感染率、感染程度及胚胎感染率的關(guān)系 339
10.1.1 家蠶5齡幼蟲(chóng)后期不同濃度家蠶微粒子蟲(chóng)添食感染的母蛾感染率及感染程度 339
10.1.2 家蠶5齡期不同階段經(jīng)不同劑量家蠶微粒子蟲(chóng)口腔注射感染的母蛾感染率 340
10.1.3 感染母蛾的胚胎感染率 343
10.2 原種母蛾檢測(cè)與一代雜交蠶種農(nóng)村飼養(yǎng)家蠶微粒子病傳染擴(kuò)散 346
10.2.1 不同家蠶品種的原種母蛾檢測(cè) 347
10.2.2 不同母蛾檢測(cè)結(jié)果類(lèi)型一代雜交蠶種的農(nóng)村飼養(yǎng) 350
10.3 家蠶微粒子蟲(chóng)胚胎感染的傳播規(guī)律 358
10.3.1 家蠶飼養(yǎng)及胚胎感染母蛾個(gè)體樣本制作和檢測(cè) 360
10.3.2 不同家蠶微粒子蟲(chóng)感染程度母蛾所產(chǎn)蠶卵的混育實(shí)驗(yàn) 361
10.3.3 個(gè)體育實(shí)驗(yàn)家蠶微粒子病的檢出時(shí)相 365
10.4 成品卵的家蠶微粒子病檢測(cè) 368
10.4.1 成品卵均勻性的調(diào)
展開(kāi)全部
家蠶微粒子病防控技術(shù) 節(jié)選
緒論 家蠶微粒子病（pebrine）是養(yǎng)蠶業(yè)的毀滅性病害，在養(yǎng)蠶國(guó)家或區(qū)域具有很高的認(rèn)知度，由此決定了對(duì)其持續(xù)的研究與養(yǎng)蠶業(yè)發(fā)展同步前進(jìn)。在產(chǎn)業(yè)中，如何有效控制或消除該病害對(duì)養(yǎng)蠶業(yè)和人類(lèi)經(jīng)濟(jì)生活的不良影響？能像防控曾被歷史學(xué)家認(rèn)為甚于槍炮或戰(zhàn)爭(zhēng)對(duì)人類(lèi)種族大屠殺的疾病一天花（small pox）—樣，使之消失①，始終是人類(lèi)的一種美好愿望。 在今天，傳染性病害是病原微生物與宿主相互作用的結(jié)果的認(rèn)知，已經(jīng)十分簡(jiǎn)明易解。但在這種認(rèn)知的獲取中，人類(lèi)經(jīng)歷了漫長(zhǎng)的探索與實(shí)踐過(guò)程。今天，在人類(lèi)對(duì)自身以及動(dòng)物和植物病害得到有效治療或控制的期盼中，不斷進(jìn)行著各種技術(shù)研究和開(kāi)發(fā)的同時(shí)，宿主和病原微生物的起源與進(jìn)化依然是一個(gè)永恒的課題。“未知生，焉知死”不僅是人類(lèi)自身的命題，也是包括家蠶微粒子病在內(nèi)所有病害研究的基本命題。 在理論上，家蠶微粒子病的出現(xiàn)源于家蠶和微孢子蟲(chóng)兩種生物起源后共同存在，人類(lèi)開(kāi)始飼養(yǎng)或利用家蠶后不久，應(yīng)該就會(huì)發(fā)現(xiàn)該病的存在，家蠶、微孢子蟲(chóng)和兩者相遇而發(fā)生蠶病的歷史即成為探究的問(wèn)題。 （1）家蠶的起源和養(yǎng)蠶的歷史 有關(guān)家蠶（Sow知r OTor/）和養(yǎng)蠶（sericulture）的起源，已有太多的文獻(xiàn)和專(zhuān)業(yè)書(shū)籍對(duì)其進(jìn)行了描述，簡(jiǎn)而言之包括三個(gè)層面的論述。其一是傳說(shuō)或后期的文字記載，主要有“伏羲化蠶”、“嫘祖始蠶”和“馬頭娘佑蠶”，即養(yǎng)蠶始于中華文化的人文初祖。其二是考古學(xué)的發(fā)現(xiàn)，1926年山西夏縣西夏村新石器時(shí)代遺址發(fā)掘，發(fā)現(xiàn)半顆被割裂的蠶繭，這半顆距今6950～4950年的蠶繭，形態(tài)大小介于現(xiàn)在的家蠶繭和野蠶繭之間；1928年河南省安陽(yáng)縣開(kāi)始殷墟考古，在挖掘出的甲骨上發(fā)現(xiàn)有“桑”、“蠶”、“絲”和“帛”等與家蠶及養(yǎng)蠶有關(guān)的文字（甲骨文，公元前1400年～公元前1100年）；1958年在浙江省吳興縣錢(qián)山漾發(fā)現(xiàn)的絹片、絲帶和絲線(xiàn)等，被考證為公元前2715年±100年的遺物。由此可見(jiàn)，我國(guó)人民發(fā)現(xiàn)和利用家蠶已有數(shù)千年的歷史（蔣猷龍，1982；嵇發(fā)根，1994；吳一舟，2005）。其三是包括形態(tài)和習(xí)性、染色體數(shù)目、遺傳距離和核酸多態(tài)性、線(xiàn)粒體脫氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）序列變化速率，以及血清學(xué)、數(shù)量性狀、生理生化指標(biāo)和繭色等在內(nèi)的生物學(xué)研究表明，家蠶是不同于野桑蠶（Bombyx mandarina）而獨(dú)立起源的昆蟲(chóng)。 在公元前10世紀(jì)，我國(guó)已開(kāi)始與東西方國(guó)家進(jìn)行蠶種或絲綢交流，蠶種交流到不同國(guó)家和區(qū)域后，在當(dāng)?shù)亻_(kāi)展了不同方式的馴化，在不同的國(guó)家和我國(guó)不同的地區(qū)也發(fā)現(xiàn)了大量生物學(xué)性狀不同的家蠶。因此，目前較為公認(rèn)的家蠶起源是“多中心馴化”（蔣猷龍，1982）。我國(guó)自秦代以后，已有大量文獻(xiàn)記載了栽桑養(yǎng)蠶的生產(chǎn)過(guò)程（《詩(shī)經(jīng) 豳風(fēng)》）和相關(guān)技術(shù)（《氾勝之書(shū)》），其中也包括了一些與防病有關(guān)的記載（如“ 使蠶不疾病者，皆置之黃金一斤 ”《管子 山權(quán)數(shù)》）。1877年德國(guó)地質(zhì)地理學(xué)家李希霍芬（Richthofen）在其著作《中國(guó)》一書(shū)中，把從公元前114年至公元127年，中國(guó)與中亞、中國(guó)與印度間，以絲綢貿(mào)易為媒介的這條西域交通道路命名為“絲綢之路”，“絲綢之路”也是我國(guó)養(yǎng)蠶業(yè)在世界范圍內(nèi)產(chǎn)生影響的重要事件（浙江大學(xué)，2001；吳一舟，2005；蔣猷龍，2007；呂鴻聲，2015）。 （2）家蠶微粒子病的發(fā)現(xiàn) 家蠶的起源和養(yǎng)蠶業(yè)的發(fā)展具有悠久的歷史，與之相較，有關(guān)家蠶微粒子病的發(fā)現(xiàn)記載則要遲得多。人類(lèi)以文字方式記載該病害的*早文獻(xiàn)，可能是中國(guó)金朝（1115～1234年）末期《務(wù)本新書(shū)》中“拳翅無(wú)目、焦腳焦尾、無(wú)毛禿紋、黑身黑頭、先出而后生”對(duì)家蠶微粒子病病癥的描述。現(xiàn)存*早的文字記載，可能是清朝永瑢等編纂的《四庫(kù)全書(shū)》（1773年～）中轉(zhuǎn)載記錄的上述描述。其后，魯明善（1271～1368年）的《農(nóng)桑衣食撮要》中“ 若有拳翅、禿眉、焦尾、赤肚、無(wú)毛等蛾，撿去不用 ”（魯明善，1962）、沈煉（1507～1557年）的《廣蠶桑說(shuō)輯補(bǔ)》中“蛾出時(shí)，撿去拳翅、禿眉、焦尾、赤肚諸病蛾，而取其無(wú)病者 ”（沈煉，1960）、宋應(yīng)星的《天工開(kāi)物》（1637年）中“ 粒粒勻鋪，天然無(wú)一堆積 ”（宋應(yīng)星，1936）等文獻(xiàn)，相繼記載了有關(guān)微粒子病病蛾的癥狀，以及剔除病蛾或病蛾所產(chǎn)蠶卵的技術(shù)措施，可防止其在次代養(yǎng)蠶群體中產(chǎn)生危害。這些經(jīng)驗(yàn)科學(xué)的積累和普及，也是我國(guó)養(yǎng)蠶產(chǎn)業(yè)持續(xù)輝煌的重要基礎(chǔ)之一。 在亨利四世（法國(guó)國(guó)王，波旁王朝的創(chuàng)建者，1553～1610年）時(shí)期，歐洲各國(guó)開(kāi)始大規(guī)模發(fā)展養(yǎng)蠶，并在較早時(shí)期發(fā)現(xiàn)了家蠶微粒子病。德國(guó)、法國(guó)和意大利等國(guó)分別將家蠶的微粒子病稱(chēng)為K6rperchen Krankheit、Maladie corpusculeuse和Malattia dei corpuscoli。在日本和印度等養(yǎng)蠶國(guó)家，對(duì)該病也有不同的稱(chēng)謂和記載，如灰頭病、黑疲病、gattine（蠶疫）和cota等。1845年在法國(guó)東南部的沃克呂茲（Vaucluse）省發(fā)生該病，次年波及鄰近3個(gè)省份的蠶區(qū)，1851年蔓延全法國(guó)并波及德國(guó)、意大利和西班牙等歐洲其他養(yǎng)蠶國(guó)家。法國(guó)的蠶繭產(chǎn)量從1853年的26000t驟降到1865年的4000t，當(dāng)年蠶繭減產(chǎn)導(dǎo)致了1億法郎的經(jīng)濟(jì)損失。通過(guò)對(duì)不同蠶區(qū)輸入蠶種飼養(yǎng)結(jié)果的比較，發(fā)現(xiàn)該病的發(fā)生與蠶種密切相關(guān)，或認(rèn)為該病的病因在于蠶種。1867年巴黎拿破侖高等學(xué)校自然歷史學(xué)者國(guó)利伐（Quatrefages）教授，對(duì)表面覆蓋黑色斑點(diǎn)的病蠶研究后，將其稱(chēng)為“pebrme”（法國(guó)南部方言，意為“胡椒病”）（石川金太郎，1936；呂鴻聲，2008）。 （3）家蠶微粒子蟲(chóng)的發(fā)現(xiàn) 家蠶微粒子病病原發(fā)現(xiàn)的社會(huì)背景，是歐洲科技（工業(yè)）革命和人文主義的興起。在經(jīng)歷了文藝復(fù)興、宗教改革和啟蒙運(yùn)動(dòng)的歐洲，蒸汽機(jī)的發(fā)明和改良、質(zhì)量守恒定律等在紡織工業(yè)領(lǐng)域的應(yīng)用，大大促進(jìn)了歐洲紡織工業(yè)的發(fā)展。集哲學(xué)家、科學(xué)家、工匠于一身的人才大量涌現(xiàn)，使科學(xué)和技術(shù)高速發(fā)展，呈現(xiàn)出一片繁榮的景象。 光學(xué)顯微鏡的發(fā)明和技術(shù)進(jìn)步（詹森、利珀希、伽利略和列文虎克等），為微生物的發(fā)現(xiàn)和微生物學(xué)專(zhuān)業(yè)領(lǐng)域的發(fā)展提供了有效的技術(shù)基礎(chǔ)。意大利昆蟲(chóng)學(xué)家巴西（BassO經(jīng)過(guò)25年研究，在1835年發(fā)現(xiàn)家蠶白僵病（真菌病或硬化病）的病因是病原微生物，即球孢白僵菌（Beauveria bassiana）的入侵，由此確立了微生物病原學(xué)說(shuō)。1849年，法國(guó)學(xué)者介朗（Gu6rin，1799～1874年）用顯微鏡發(fā)現(xiàn)患病家蠶血液中存在著不同于家蠶血細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)性微小顆粒，并將該病原體稱(chēng)為“Hematozoides”。1853～1855年，英國(guó)學(xué)者萊貝特（Lebert）和弗雷耶（Freye）研究認(rèn)為，寄生于病蠶中的微小粒子是一種酵母，將其稱(chēng)為“Panhistophyton ovatum”或“Corpuscolo del Cornalia”，并提出該微小粒子可通過(guò)蠶卵傳染。1854年，法國(guó)學(xué)者奧西莫（Osimo）發(fā)現(xiàn)患病家蠶中的橢圓形小體，不僅附著于蠶卵表面，還存在于蠶卵內(nèi)，并提出通過(guò)檢查蛹和卵來(lái)進(jìn)行該病的預(yù)防（Franzen，2008）。1857年，瑞士植物學(xué)家內(nèi)格里（Nageli）從患病家蠶中發(fā)現(xiàn)了家蠶微粒子蟲(chóng)，認(rèn)為其是一種真菌的孢子，并命名為Nosema bombycis，該命名被其后的分類(lèi)學(xué)家巴爾比亞尼（Balbiani，“Microsporidia Balbiani1882”）、斯普拉格（Sprague）和貝克雷爾（Becnel）（1998年）的分類(lèi)系統(tǒng)所確定，即Nosena bombycis Nageli1857，并一直沿用至今。 意大利真菌學(xué)家維塔蒂尼（Vitadrni）1859年在意大利的帕維亞大學(xué)研究家蠶微粒子病時(shí)，發(fā)現(xiàn)蠶卵和蟻蠶中存在微孢子蟲(chóng)，以及在蟻蠶孵化前微孢子蟲(chóng)數(shù)量大幅增加的現(xiàn)象，并提出通過(guò)促進(jìn)催青、檢測(cè)蟻蠶防止該病害的方法。同期的英國(guó)學(xué)者科妮莉亞（Cornelia）也提出了通過(guò)檢測(cè)蠶卵預(yù)防該病的方法（Franzen，2008）。 家蠶微粒子蟲(chóng)的發(fā)現(xiàn)和病害防控技術(shù)研究中，*為知名的當(dāng)屬法國(guó)微生物學(xué)家、化學(xué)家、近代微生物學(xué)的奠基人巴斯德及其團(tuán)隊(duì)。他們從1865年開(kāi)始，對(duì)該病害進(jìn)行了5年系統(tǒng)的調(diào)查和研究，在1870年發(fā)表《蠶病研究》（Etudes sur la maladie des vers a soie）專(zhuān)著。文中研究認(rèn)為：①引起家蠶微粒子病的病原微生物是Nosema bombycis，在病變組織中發(fā)現(xiàn)游走體（planont）或雙核孢原質(zhì)（binucleate sporoplasm）及裂殖體（schizont，Sc）的存在；②該病原可通過(guò)食下感染（oral infection，病蠶蠶糞污染桑葉喂詞健康家蠶后重演癥狀）和胚胎感染（embryonic infection，可通過(guò)感染母蛾傳遞給子代）兩種途徑在飼養(yǎng)群體中傳播；③采用隔離制種法可有效防控該病害流行，即建立了顯微鏡檢查母蛾法（病原在卵期難以發(fā)現(xiàn)，但在蛹和蛾期極易發(fā)現(xiàn)），淘汰有病母蛾所產(chǎn)蠶卵。巴斯德及其團(tuán)隊(duì)的系統(tǒng)性研究成果，不僅在當(dāng)時(shí)歐洲養(yǎng)蠶病害流行的控制中發(fā)揮了重要的作用，也奠定了家蠶微粒子病研究的理論認(rèn)識(shí)和防控技術(shù)基礎(chǔ)。 在從蒸汽機(jī)到發(fā)電機(jī)發(fā)明與應(yīng)用的兩次科技革命期間（1830～1870年），科學(xué)研究繁花似錦，科技成果碩果累累。達(dá)爾文在拉馬克（Larmarck，1744～1829年）和馬爾薩斯（Halthus，1766～1834年）等科學(xué)家提出的進(jìn)化論觀點(diǎn)上，1859年與華萊士（Wallace）聯(lián)名發(fā)表了自然選擇的進(jìn)化論，同年11月發(fā)表《物種起源》這部光輝巨作。同時(shí)代的巴斯德，則在介朗和內(nèi)格里等學(xué)者發(fā)現(xiàn)病蠶體內(nèi)存在家蠶微粒子蟲(chóng)，以及萊貝特、弗雷耶和奧西莫等學(xué)者發(fā)現(xiàn)家蠶微粒子蟲(chóng)在家蠶卵內(nèi)存在，并可導(dǎo)致后代家蠶發(fā)病的研究基礎(chǔ)上，經(jīng)過(guò)系統(tǒng)研究后發(fā)表了《蠶病研究》這部關(guān)于家蠶病害防控的專(zhuān)著。 巴斯德不僅在家蠶微粒子病的防控領(lǐng)域做出貢獻(xiàn)并成為經(jīng)典科技成果，他在微生物學(xué)、消毒學(xué)和免疫學(xué)等領(lǐng)域的成就，為抵抗人類(lèi)和動(dòng)物疾病做出了更為巨大的貢獻(xiàn)。 （4）家蠶微粒子病研究的發(fā)展 巴斯德有關(guān)家蠶微粒子病系統(tǒng)性研究成果發(fā)表后的150多年，有關(guān)家蠶微粒子病及其防控技術(shù)的研究取得了大量的進(jìn)展，這些進(jìn)展和成果也成為我國(guó)與其他養(yǎng)蠶國(guó)家產(chǎn)業(yè)重要科學(xué)發(fā)展和技術(shù)進(jìn)步的基礎(chǔ)。 在病原學(xué)研究方面，除內(nèi)格里和巴斯德等學(xué)者對(duì)家蠶微粒子病的病原開(kāi)展了大量的研究外，也有學(xué)者從其他一些生物中發(fā)現(xiàn)了類(lèi)似于家蠶微粒子蟲(chóng)QNosema bombycis）的微生物。例如，1838年格里格（Glugea）在魚(yú)上發(fā)現(xiàn)了后被命名為刺鯧格留蟲(chóng)（.Glugea anomala）的微生物，克雷帕林（Creplin）和穆勒（Mtiller）分別在1841年和1842年觀察到類(lèi)似的微生物。巴爾比亞尼（1882年）在經(jīng)過(guò)系統(tǒng)研究后，首次提出應(yīng)該將家蠶微粒子蟲(chóng)（N.bowbvc/s）建立為單獨(dú)的分類(lèi)學(xué)階元-微孢子蟲(chóng)。泰羅漢（Th6lohan，1892～1895年）提出并建立微孢子蟲(chóng)（Microsporidia）的分類(lèi)系統(tǒng)。其后，拉韋（Labb6，1899年）、斯坦普爾（Stempell，1902年）、韋森博（Weissenberg，1922年）、工藤六三郎（Kudo，1931年）、魏澤爾（Weiser，1947年）、施泰因彖斯（Steinhaus，1959年）、瓦夫拉（Vavra，1976年）、斯普拉格（Sprague，1977年～）、伊思（Issi，1986年）、維特納（Wittner，1999年）和維斯（Weiss，1999年）等一大批學(xué)者對(duì)微孢子蟲(chóng)的分類(lèi)學(xué)研究做出了重要的貢獻(xiàn)（Sprague，1992；Franzen，2008）。 在微孢子蟲(chóng)分類(lèi)方面，重要或基礎(chǔ)性的內(nèi)容主要涉及寄主、生活史、形態(tài)和分布等綜合性研究。在寄主種類(lèi)方面，較早時(shí)期從家蠶和魚(yú)類(lèi)上發(fā)現(xiàn)微孢子蟲(chóng)后，1909年桑德?tīng)枺╖ander）發(fā)現(xiàn)了蜜蜂微孢子蟲(chóng)（Nosema apis）和熊蜂微孢子蟲(chóng)（N.bombi），之后
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