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家蠶微粒子病防控技術 版權信息
- ISBN：9787030741790
- 條形碼：9787030741790 ; 978-7-03-074179-0
- 裝幀：一般膠版紙
- 冊數：暫無
- 重量：暫無
- 所屬分類：>
家蠶微粒子病防控技術 內容簡介
本書包括上篇（家蠶微粒子蟲的來源及控制技術）、中篇（家蠶微孢子蟲在個體中擴散及控制技術）、下篇（家蠶微孢子蟲在飼養群體中擴散及控制技術）和實驗方法篇，共計十三章，以及參考文獻和附錄等。從家蠶微粒子蟲是哪里來、如何進入家蠶個體、如何在家蠶飼養群體中擴散的3個維度，在理論研究基礎上，開展技術研發的進展等進行了闡述和思考，并提出了家蠶微粒子蟲變異機制、胚胎感染的蠶座內連續感染擴散模式，以及病害檢疫中基于風險閾值的管理模式等學術觀點，期望為后繼者的學術研究和產業發展提供有益參考。
家蠶微粒子病防控技術 目錄
目錄
前言
緒論 1
**篇 家蠶微粒子蟲來源及防控技術
第1章 感染家蠶的微孢子蟲 11
1.1 家蠶微粒子蟲 11
1.1.1 家蠶微粒子蟲的分類簡史 11
1.1.2 家蠶微粒子蟲的分類學地位 12
1.1.3 家蠶微粒子蟲的分類學特征 12
1.2 其他家蠶微孢子蟲 14
1.2.1 具褶孢蟲屬（Pleistophora）的分類學特征和地位 15
1.2.2 泰羅漢孢蟲屬（Thelohania）的分類學特征和地位 16
1.2.3 變形孢蟲屬（Vairimorpha）的分類學特征和地位 17
1.2.4 內網蟲屬（Endoreticulatus）的分類學特征和地位 19
1.3 養蠶相關昆蟲來源微孢子蟲 20
1.3.1 野外昆蟲來源微孢子蟲 20
1.3.2 野外昆蟲來源微孢子蟲的分類學研究 21
1.3.3 野外昆蟲來源微孢子蟲對家蠶的感染性 21
1.4 家蠶微粒子蟲的生物進化分析 22
1.4.1 基于分子生物學的分類與進化分析 22
1.4.2 家蠶微粒子蟲α-和β-微管蛋白部分基因的克隆及系統發育分析 25
1.5 家蠶來源內網蟲屬樣微孢子蟲 32
1.5.1 內網蟲屬樣微孢子蟲的形態學和感染性觀察 33
1.5.2 內網蟲屬樣微孢子蟲嵊州株rRNA基因序列的研究 36
第2章 家蠶微孢子蟲的變異 42
2.1 昆蟲微孢子蟲的寄主域 42
2.1.1 微孢子蟲的寄主專一性 42
2.1.2 溫度和光照等環境因子對微孢子蟲感染性的影響 44
2.1.3 家蠶微粒子蟲對其他昆蟲的感染性及感染后的孢子形態變化 45
2.2 家蠶微粒子蟲感染桑尺蠖后孢子表面蛋白的變化 50
2.2.1 家蠶微粒子蟲與24Nb-H孢子表面蛋白的聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）比較 51
2.2.2 家蠶微粒子蟲與24Nb-H孢子表面蛋白的2-DE比較 51
2.2.3 家蠶微粒子蟲與24Nb-H孢子總蛋白的SDS-PAGE比較 53
2.2.4 家蠶微粒子蟲與24Nb-H孢子總蛋白的固相2-DE比較 54
2.2.5 孢子表面蛋白與總蛋白的2-DE圖譜比較 56
2.3 家蠶來源內網蟲屬樣微孢子蟲嵊州株與Nb孢子表面蛋白的比較 58
2.3.1 內網蟲屬樣微孢子蟲嵊州株與Nb孢子表面蛋白的SDS-Urea PAGE比較 59
2.3.2 內網蟲屬樣微孢子蟲嵊州株與Nb孢子表面蛋白的固相2-DE比較 59
第3章 養蠶環境中微孢子蟲的分布與家蠶微粒子病檢測技術 65
3.1 養蠶環境病原微生物的分布 65
3.1.1 取樣和檢測方法 67
3.1.2 蠶室環境樣本的檢測 68
3.1.3 不同養蠶技術水平農戶不同蠶室環境樣本的檢出率比較 70
3.1.4 不同養蠶階段蠶室環境樣本的檢出率比較 71
3.2 家蠶微粒子病的免疫學檢測技術 73
3.2.1 免疫學檢測技術的特點 74
3.2.2 液氮處理Nb孢子和未處理Nb孢子包被效果的對比 75
3.2.3 純化Nb孢子的ELISA檢測及模擬感染家蠶微粒子病蠶卵的檢測 75
3.3 家蠶微粒子病的分子生物學檢測技術 79
3.3.1 家蠶微粒子蟲孢子的破碎與核酸獲取 79
3.3.2 常規PCR檢測 87
3.3.3 熒光定量PCR檢測 92
3.3.4 蠶種（卵）的家蠶微粒子病檢測 96
3.3.5 蠶卵組織對熒光定量PCR檢測的影響 102
第二篇 家蠶微粒子蟲在個體中擴散及防控技術
第4章 家蠶微粒子蟲孢子發芽和入侵細胞 111
4.1 家蠶微粒子蟲孢子的發芽 111
4.1.1 家蠶微粒子蟲孢子的發芽過程 111
4.1.2 微孢子蟲孢子發芽前-后孢內糖的變化 112
4.1.3 環境理化因子對微孢子蟲孢子發芽的影響 113
4.2 家蠶微粒子蟲孢子發芽相關孢壁蛋白的研究 115
4.2.1 家蠶微粒子蟲孢子孢壁蛋白單克隆抗體特異性鑒定 116
4.2.2 單克隆抗體對家蠶微粒子蟲孢子體外發芽的影響 117
4.2.3 單抗3C2對家蠶微粒子蟲孢子感染BmN細胞的影響 118
4.2.4 家蠶微粒子蟲孢子表面蛋白SP84的分離純化及定位 122
4.2.5 家蠶微粒子蟲孢子表面蛋白SP84的免疫共沉淀和質譜鑒定 125
4.3 家蠶微粒子蟲孢子發芽前-后轉錄組的差異分析 130
4.3.1 轉錄組序列拼接和分析 130
4.3.2 基因注釋和差異基因表達分析 131
4.3.3 差異表達基因聚類分析和功能富集性分析 135
4.3.4 家蠶微粒子蟲孢子發芽相關候選基因的預測 137
4.4 家蠶微粒子蟲孢子發芽前-后的Label-free蛋白質組學定量分析 139
4.4.1 家蠶微粒子蟲孢子發芽前-后蛋白質的Label-free定量色譜分析 139
4.4.2 家蠶微粒子蟲孢子發芽前-后鑒定蛋白的GO分析 145
4.4.3 家蠶微粒子蟲孢子發芽前-后鑒定蛋白的KEGG分析 148
第5章 家蠶微粒子蟲入侵家蠶細胞及繁殖 155
5.1 家蠶微粒子蟲與粉紋夜蛾培養細胞的相互作用 156
5.1.1 家蠶微粒子蟲孢子接種Tn培養細胞的透射電鏡觀察 156
5.1.2 家蠶微粒子蟲孢子接種Tn培養細胞的激光共聚焦顯微鏡觀察 157
5.1.3 家蠶微粒子蟲孢子接種Tn培養細胞的孢子計數和大小測定 159
5.1.4 Tn培養細胞總蛋白和Nb孢壁蛋白的SDS-PAGE分析 160
5.2 家蠶微粒子蟲感染家蠶幼蟲對部分生理生化指標的影響 162
5.2.1 家蠶微粒子蟲感染家蠶幼蟲對生長發育、中腸和血液蛋白酶活性的影響 163
5.2.2 家蠶微粒子蟲感染家蠶幼蟲對血液和中腸蛋白的影響 166
5.2.3 家蠶微粒子蟲感染家蠶幼蟲對海藻糖酶活性的影響 167
5.3 家蠶微粒子蟲孢子母細胞和成熟孢子蛋白差異的比較 168
5.3.1 家蠶微粒子蟲孢子生殖階段細胞的分離 169
5.3.2 孢子母細胞和成熟孢子蛋白的2-DE分析 171
5.3.3 MALDI-TOF/TOF MS分析及數據庫搜索 171
5.4 家蠶微粒子蟲感染家蠶培養細胞的蛋白質組分析 173
5.4.1 家蠶微粒子蟲在BmN培養細胞中的增殖 173
5.4.2 接種Nb孢子BmN細胞培養物的2-DE分析 173
5.4.3 接種Nb孢子BmN細胞培養物差異蛋白點的質譜鑒定 175
5.4.4 接種Nb孢子細胞培養物差異蛋白的生物信息學分析與功能驗證 176
5.5 家蠶微粒子蟲對寄主BmN細胞凋亡的抑制作用 186
5.5.1 微粒子蟲感染與家蠶細胞凋亡 187
5.5.2 放線菌素D處理BmN培養細胞的DNA片段化 190
第6章 家蠶微粒子蟲感染家蠶相關基因及功能 198
6.1 家蠶微粒子蟲孢子SWP5蛋白基因及功能 198
6.1.1 家蠶微粒子蟲孢子蛋白基因的克隆、表達及定位 198
6.1.2 家蠶微粒子蟲孢子NbSWP5蛋白在感染過程中的作用 202
6.2 家蠶微粒子蟲孢壁蛋白SWP12基因的克隆、表達分析及功能研究 209
6.2.1 家蠶微粒子蟲孢子HSWP12蛋白基因的克隆和抗體制備 210
6.2.2 家蠶微粒子蟲孢子孢壁蛋白SWP12在細胞中的表達與定位 213
6.2.3 多克隆抗體對家蠶微粒子蟲孢子黏附及感染的抑制效果 214
6.3 家蠶微粒子蟲蓖麻毒素B凝集素在感染過程中的功能 215
6.3.1 家蠶微粒子蟲蓖麻毒素B凝集素基因的序列分析、表達差異分析和克隆 216
6.3.2 家蠶微粒子蟲蓖麻毒素B凝集素對Nb孢子黏附BmN細胞的影響 220
6.3.3 家蠶微粒子蟲蓖麻毒素B凝集素對Nb侵染BmN細胞的影響 221
6.4 家蠶微粒子蟲Akirin蛋白基因的鑒定與序列分析 223
6.4.1 家蠶微粒子蟲感染BmN細胞的基因差異表達 226
6.4.2 家蠶微粒子蟲Akirin蛋白基因的克隆和測序分析 231
第7章 家蠶消化道的細菌微生態 237
7.1 基于16S rDNA測序的家蠶消化道細菌微生態 238
7.1.1 小蠶期家蠶消化道細菌微生態 238
7.1.2 5齡期家蠶消化道細菌微生態 241
7.1.3 家蠶消化道細菌微生態的主要特征 248
7.2 健康家蠶消化道腸球菌及多樣性 255
7.2.1 腸球菌分離菌株表型特征的多樣性 256
7.2.2 腸球菌的數值鑒定和多樣性分析 260
7.2.3 基于RAPD技術的家蠶腸球菌多樣性 263
7.2.4 基于染色體雜交技術的家蠶腸球菌菌種鑒定 264
7.2.5 基于16S rDNA測序的家蠶腸球菌菌種鑒定 268
7.2.6 基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜鑒定技術 271
7.3 家蠶消化液抗腸球菌蛋白 272
7.3.1 家蠶5齡幼蟲消化液抗腸球菌蛋白的分離純化與抑菌活性檢測 272
7.3.2 不同家蠶品種的抗腸球菌蛋白 274
7.3.3 抗腸球菌蛋白的部分特征 275
7.4 家蠶微粒子蟲感染對家蠶中腸腸球菌結構的影響 276
7.4.1 腸球菌總數的變化及主要菌屬 277
7.4.2 家蠶微粒子蟲感染對腸球菌分布的影響 280
第8章 家蠶個體水平防控技術的研究 284
8.1 基于物理因子的蠶種高溫浸酸和熱空氣處理 284
8.2 基于化學因子的家蠶微粒子病防控藥物實驗 285
8.2.1 幾種化學藥物對家蠶微粒子病的濃度效應 286
8.2.2 化學藥物不同添食方式的治療效果 287
8.2.3 化學藥物對不同劑量微粒子蟲孢子感染的治療效果 288
8.3 微生物因子對家蠶微粒子病發生的影響 289
8.3.1 家蠶消化道來源腸球菌對家蠶微粒子蟲孢子發芽的抑制作用 289
8.3.2 腸球菌體外抑制家蠶微粒子蟲孢子發芽的動力學研究 292
8.3.3 腸球菌培養物的活性物純化與活性測定 296
第三篇 家蠶微粒子蟲在飼養群體中擴散及防控技術
第9章 環境來源家蠶微粒子蟲的傳播規律及防控技術 307
9.1 家蠶微粒子病的流行規律分析 310
9.1.1 蠶種生產量對家蠶微粒子病發生的影響 312
9.1.2 前-后季養蠶對家蠶微粒子病發生的影響 313
9.1.3 不同生產季節對家蠶微粒子病發生的影響 314
9.1.4 不同生產方式對家蠶微粒子病發生的影響 315
9.1.5 其他客觀因素對家蠶微粒子病發生的影響 316
9.2 消毒和生產過程家蠶微粒子病檢測等技術措施對其發生的影響 317
9.2.1 家蠶微粒子蟲對物理和化學因子的抵抗性 318
9.2.2 化學藥物對家蠶微粒子蟲的殺滅作用 318
9.2.3 預知檢查和補正檢查 324
9.3 母蛾檢測批的規模類型對家蠶微粒子病流行的影響 328
9.3.1 不同母蛾檢測批的規模類型數據樣本與數據處理 329
9.3.2 母蛾檢測批的規模類型變化 329
9.3.3 母蛾檢測中未檢出和檢出合格蠶種的分布規律 332
9.3.4 母蛾檢測中淘汰蠶種的分布規律 334
第10章 家蠶微粒子蟲胚胎感染的傳播規律及防控技術 338
10.1 家蠶幼蟲期感染與母蛾感染率、感染程度及胚胎感染率的關系 339
10.1.1 家蠶5齡幼蟲后期不同濃度家蠶微粒子蟲添食感染的母蛾感染率及感染程度 339
10.1.2 家蠶5齡期不同階段經不同劑量家蠶微粒子蟲口腔注射感染的母蛾感染率 340
10.1.3 感染母蛾的胚胎感染率 343
10.2 原種母蛾檢測與一代雜交蠶種農村飼養家蠶微粒子病傳染擴散 346
10.2.1 不同家蠶品種的原種母蛾檢測 347
10.2.2 不同母蛾檢測結果類型一代雜交蠶種的農村飼養 350
10.3 家蠶微粒子蟲胚胎感染的傳播規律 358
10.3.1 家蠶飼養及胚胎感染母蛾個體樣本制作和檢測 360
10.3.2 不同家蠶微粒子蟲感染程度母蛾所產蠶卵的混育實驗 361
10.3.3 個體育實驗家蠶微粒子病的檢出時相 365
10.4 成品卵的家蠶微粒子病檢測 368
10.4.1 成品卵均勻性的調
前言
緒論 1
**篇 家蠶微粒子蟲來源及防控技術
第1章 感染家蠶的微孢子蟲 11
1.1 家蠶微粒子蟲 11
1.1.1 家蠶微粒子蟲的分類簡史 11
1.1.2 家蠶微粒子蟲的分類學地位 12
1.1.3 家蠶微粒子蟲的分類學特征 12
1.2 其他家蠶微孢子蟲 14
1.2.1 具褶孢蟲屬（Pleistophora）的分類學特征和地位 15
1.2.2 泰羅漢孢蟲屬（Thelohania）的分類學特征和地位 16
1.2.3 變形孢蟲屬（Vairimorpha）的分類學特征和地位 17
1.2.4 內網蟲屬（Endoreticulatus）的分類學特征和地位 19
1.3 養蠶相關昆蟲來源微孢子蟲 20
1.3.1 野外昆蟲來源微孢子蟲 20
1.3.2 野外昆蟲來源微孢子蟲的分類學研究 21
1.3.3 野外昆蟲來源微孢子蟲對家蠶的感染性 21
1.4 家蠶微粒子蟲的生物進化分析 22
1.4.1 基于分子生物學的分類與進化分析 22
1.4.2 家蠶微粒子蟲α-和β-微管蛋白部分基因的克隆及系統發育分析 25
1.5 家蠶來源內網蟲屬樣微孢子蟲 32
1.5.1 內網蟲屬樣微孢子蟲的形態學和感染性觀察 33
1.5.2 內網蟲屬樣微孢子蟲嵊州株rRNA基因序列的研究 36
第2章 家蠶微孢子蟲的變異 42
2.1 昆蟲微孢子蟲的寄主域 42
2.1.1 微孢子蟲的寄主專一性 42
2.1.2 溫度和光照等環境因子對微孢子蟲感染性的影響 44
2.1.3 家蠶微粒子蟲對其他昆蟲的感染性及感染后的孢子形態變化 45
2.2 家蠶微粒子蟲感染桑尺蠖后孢子表面蛋白的變化 50
2.2.1 家蠶微粒子蟲與24Nb-H孢子表面蛋白的聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）比較 51
2.2.2 家蠶微粒子蟲與24Nb-H孢子表面蛋白的2-DE比較 51
2.2.3 家蠶微粒子蟲與24Nb-H孢子總蛋白的SDS-PAGE比較 53
2.2.4 家蠶微粒子蟲與24Nb-H孢子總蛋白的固相2-DE比較 54
2.2.5 孢子表面蛋白與總蛋白的2-DE圖譜比較 56
2.3 家蠶來源內網蟲屬樣微孢子蟲嵊州株與Nb孢子表面蛋白的比較 58
2.3.1 內網蟲屬樣微孢子蟲嵊州株與Nb孢子表面蛋白的SDS-Urea PAGE比較 59
2.3.2 內網蟲屬樣微孢子蟲嵊州株與Nb孢子表面蛋白的固相2-DE比較 59
第3章 養蠶環境中微孢子蟲的分布與家蠶微粒子病檢測技術 65
3.1 養蠶環境病原微生物的分布 65
3.1.1 取樣和檢測方法 67
3.1.2 蠶室環境樣本的檢測 68
3.1.3 不同養蠶技術水平農戶不同蠶室環境樣本的檢出率比較 70
3.1.4 不同養蠶階段蠶室環境樣本的檢出率比較 71
3.2 家蠶微粒子病的免疫學檢測技術 73
3.2.1 免疫學檢測技術的特點 74
3.2.2 液氮處理Nb孢子和未處理Nb孢子包被效果的對比 75
3.2.3 純化Nb孢子的ELISA檢測及模擬感染家蠶微粒子病蠶卵的檢測 75
3.3 家蠶微粒子病的分子生物學檢測技術 79
3.3.1 家蠶微粒子蟲孢子的破碎與核酸獲取 79
3.3.2 常規PCR檢測 87
3.3.3 熒光定量PCR檢測 92
3.3.4 蠶種（卵）的家蠶微粒子病檢測 96
3.3.5 蠶卵組織對熒光定量PCR檢測的影響 102
第二篇 家蠶微粒子蟲在個體中擴散及防控技術
第4章 家蠶微粒子蟲孢子發芽和入侵細胞 111
4.1 家蠶微粒子蟲孢子的發芽 111
4.1.1 家蠶微粒子蟲孢子的發芽過程 111
4.1.2 微孢子蟲孢子發芽前-后孢內糖的變化 112
4.1.3 環境理化因子對微孢子蟲孢子發芽的影響 113
4.2 家蠶微粒子蟲孢子發芽相關孢壁蛋白的研究 115
4.2.1 家蠶微粒子蟲孢子孢壁蛋白單克隆抗體特異性鑒定 116
4.2.2 單克隆抗體對家蠶微粒子蟲孢子體外發芽的影響 117
4.2.3 單抗3C2對家蠶微粒子蟲孢子感染BmN細胞的影響 118
4.2.4 家蠶微粒子蟲孢子表面蛋白SP84的分離純化及定位 122
4.2.5 家蠶微粒子蟲孢子表面蛋白SP84的免疫共沉淀和質譜鑒定 125
4.3 家蠶微粒子蟲孢子發芽前-后轉錄組的差異分析 130
4.3.1 轉錄組序列拼接和分析 130
4.3.2 基因注釋和差異基因表達分析 131
4.3.3 差異表達基因聚類分析和功能富集性分析 135
4.3.4 家蠶微粒子蟲孢子發芽相關候選基因的預測 137
4.4 家蠶微粒子蟲孢子發芽前-后的Label-free蛋白質組學定量分析 139
4.4.1 家蠶微粒子蟲孢子發芽前-后蛋白質的Label-free定量色譜分析 139
4.4.2 家蠶微粒子蟲孢子發芽前-后鑒定蛋白的GO分析 145
4.4.3 家蠶微粒子蟲孢子發芽前-后鑒定蛋白的KEGG分析 148
第5章 家蠶微粒子蟲入侵家蠶細胞及繁殖 155
5.1 家蠶微粒子蟲與粉紋夜蛾培養細胞的相互作用 156
5.1.1 家蠶微粒子蟲孢子接種Tn培養細胞的透射電鏡觀察 156
5.1.2 家蠶微粒子蟲孢子接種Tn培養細胞的激光共聚焦顯微鏡觀察 157
5.1.3 家蠶微粒子蟲孢子接種Tn培養細胞的孢子計數和大小測定 159
5.1.4 Tn培養細胞總蛋白和Nb孢壁蛋白的SDS-PAGE分析 160
5.2 家蠶微粒子蟲感染家蠶幼蟲對部分生理生化指標的影響 162
5.2.1 家蠶微粒子蟲感染家蠶幼蟲對生長發育、中腸和血液蛋白酶活性的影響 163
5.2.2 家蠶微粒子蟲感染家蠶幼蟲對血液和中腸蛋白的影響 166
5.2.3 家蠶微粒子蟲感染家蠶幼蟲對海藻糖酶活性的影響 167
5.3 家蠶微粒子蟲孢子母細胞和成熟孢子蛋白差異的比較 168
5.3.1 家蠶微粒子蟲孢子生殖階段細胞的分離 169
5.3.2 孢子母細胞和成熟孢子蛋白的2-DE分析 171
5.3.3 MALDI-TOF/TOF MS分析及數據庫搜索 171
5.4 家蠶微粒子蟲感染家蠶培養細胞的蛋白質組分析 173
5.4.1 家蠶微粒子蟲在BmN培養細胞中的增殖 173
5.4.2 接種Nb孢子BmN細胞培養物的2-DE分析 173
5.4.3 接種Nb孢子BmN細胞培養物差異蛋白點的質譜鑒定 175
5.4.4 接種Nb孢子細胞培養物差異蛋白的生物信息學分析與功能驗證 176
5.5 家蠶微粒子蟲對寄主BmN細胞凋亡的抑制作用 186
5.5.1 微粒子蟲感染與家蠶細胞凋亡 187
5.5.2 放線菌素D處理BmN培養細胞的DNA片段化 190
第6章 家蠶微粒子蟲感染家蠶相關基因及功能 198
6.1 家蠶微粒子蟲孢子SWP5蛋白基因及功能 198
6.1.1 家蠶微粒子蟲孢子蛋白基因的克隆、表達及定位 198
6.1.2 家蠶微粒子蟲孢子NbSWP5蛋白在感染過程中的作用 202
6.2 家蠶微粒子蟲孢壁蛋白SWP12基因的克隆、表達分析及功能研究 209
6.2.1 家蠶微粒子蟲孢子HSWP12蛋白基因的克隆和抗體制備 210
6.2.2 家蠶微粒子蟲孢子孢壁蛋白SWP12在細胞中的表達與定位 213
6.2.3 多克隆抗體對家蠶微粒子蟲孢子黏附及感染的抑制效果 214
6.3 家蠶微粒子蟲蓖麻毒素B凝集素在感染過程中的功能 215
6.3.1 家蠶微粒子蟲蓖麻毒素B凝集素基因的序列分析、表達差異分析和克隆 216
6.3.2 家蠶微粒子蟲蓖麻毒素B凝集素對Nb孢子黏附BmN細胞的影響 220
6.3.3 家蠶微粒子蟲蓖麻毒素B凝集素對Nb侵染BmN細胞的影響 221
6.4 家蠶微粒子蟲Akirin蛋白基因的鑒定與序列分析 223
6.4.1 家蠶微粒子蟲感染BmN細胞的基因差異表達 226
6.4.2 家蠶微粒子蟲Akirin蛋白基因的克隆和測序分析 231
第7章 家蠶消化道的細菌微生態 237
7.1 基于16S rDNA測序的家蠶消化道細菌微生態 238
7.1.1 小蠶期家蠶消化道細菌微生態 238
7.1.2 5齡期家蠶消化道細菌微生態 241
7.1.3 家蠶消化道細菌微生態的主要特征 248
7.2 健康家蠶消化道腸球菌及多樣性 255
7.2.1 腸球菌分離菌株表型特征的多樣性 256
7.2.2 腸球菌的數值鑒定和多樣性分析 260
7.2.3 基于RAPD技術的家蠶腸球菌多樣性 263
7.2.4 基于染色體雜交技術的家蠶腸球菌菌種鑒定 264
7.2.5 基于16S rDNA測序的家蠶腸球菌菌種鑒定 268
7.2.6 基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜鑒定技術 271
7.3 家蠶消化液抗腸球菌蛋白 272
7.3.1 家蠶5齡幼蟲消化液抗腸球菌蛋白的分離純化與抑菌活性檢測 272
7.3.2 不同家蠶品種的抗腸球菌蛋白 274
7.3.3 抗腸球菌蛋白的部分特征 275
7.4 家蠶微粒子蟲感染對家蠶中腸腸球菌結構的影響 276
7.4.1 腸球菌總數的變化及主要菌屬 277
7.4.2 家蠶微粒子蟲感染對腸球菌分布的影響 280
第8章 家蠶個體水平防控技術的研究 284
8.1 基于物理因子的蠶種高溫浸酸和熱空氣處理 284
8.2 基于化學因子的家蠶微粒子病防控藥物實驗 285
8.2.1 幾種化學藥物對家蠶微粒子病的濃度效應 286
8.2.2 化學藥物不同添食方式的治療效果 287
8.2.3 化學藥物對不同劑量微粒子蟲孢子感染的治療效果 288
8.3 微生物因子對家蠶微粒子病發生的影響 289
8.3.1 家蠶消化道來源腸球菌對家蠶微粒子蟲孢子發芽的抑制作用 289
8.3.2 腸球菌體外抑制家蠶微粒子蟲孢子發芽的動力學研究 292
8.3.3 腸球菌培養物的活性物純化與活性測定 296
第三篇 家蠶微粒子蟲在飼養群體中擴散及防控技術
第9章 環境來源家蠶微粒子蟲的傳播規律及防控技術 307
9.1 家蠶微粒子病的流行規律分析 310
9.1.1 蠶種生產量對家蠶微粒子病發生的影響 312
9.1.2 前-后季養蠶對家蠶微粒子病發生的影響 313
9.1.3 不同生產季節對家蠶微粒子病發生的影響 314
9.1.4 不同生產方式對家蠶微粒子病發生的影響 315
9.1.5 其他客觀因素對家蠶微粒子病發生的影響 316
9.2 消毒和生產過程家蠶微粒子病檢測等技術措施對其發生的影響 317
9.2.1 家蠶微粒子蟲對物理和化學因子的抵抗性 318
9.2.2 化學藥物對家蠶微粒子蟲的殺滅作用 318
9.2.3 預知檢查和補正檢查 324
9.3 母蛾檢測批的規模類型對家蠶微粒子病流行的影響 328
9.3.1 不同母蛾檢測批的規模類型數據樣本與數據處理 329
9.3.2 母蛾檢測批的規模類型變化 329
9.3.3 母蛾檢測中未檢出和檢出合格蠶種的分布規律 332
9.3.4 母蛾檢測中淘汰蠶種的分布規律 334
第10章 家蠶微粒子蟲胚胎感染的傳播規律及防控技術 338
10.1 家蠶幼蟲期感染與母蛾感染率、感染程度及胚胎感染率的關系 339
10.1.1 家蠶5齡幼蟲后期不同濃度家蠶微粒子蟲添食感染的母蛾感染率及感染程度 339
10.1.2 家蠶5齡期不同階段經不同劑量家蠶微粒子蟲口腔注射感染的母蛾感染率 340
10.1.3 感染母蛾的胚胎感染率 343
10.2 原種母蛾檢測與一代雜交蠶種農村飼養家蠶微粒子病傳染擴散 346
10.2.1 不同家蠶品種的原種母蛾檢測 347
10.2.2 不同母蛾檢測結果類型一代雜交蠶種的農村飼養 350
10.3 家蠶微粒子蟲胚胎感染的傳播規律 358
10.3.1 家蠶飼養及胚胎感染母蛾個體樣本制作和檢測 360
10.3.2 不同家蠶微粒子蟲感染程度母蛾所產蠶卵的混育實驗 361
10.3.3 個體育實驗家蠶微粒子病的檢出時相 365
10.4 成品卵的家蠶微粒子病檢測 368
10.4.1 成品卵均勻性的調
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家蠶微粒子病防控技術 節選
緒論 家蠶微粒子。╬ebrine）是養蠶業的毀滅性病害，在養蠶國家或區域具有很高的認知度，由此決定了對其持續的研究與養蠶業發展同步前進。在產業中，如何有效控制或消除該病害對養蠶業和人類經濟生活的不良影響？能像防控曾被歷史學家認為甚于槍炮或戰爭對人類種族大屠殺的疾病一天花（small pox）—樣，使之消失①，始終是人類的一種美好愿望。 在今天，傳染性病害是病原微生物與宿主相互作用的結果的認知，已經十分簡明易解。但在這種認知的獲取中，人類經歷了漫長的探索與實踐過程。今天，在人類對自身以及動物和植物病害得到有效治療或控制的期盼中，不斷進行著各種技術研究和開發的同時，宿主和病原微生物的起源與進化依然是一個永恒的課題！拔粗，焉知死”不僅是人類自身的命題，也是包括家蠶微粒子病在內所有病害研究的基本命題。 在理論上，家蠶微粒子病的出現源于家蠶和微孢子蟲兩種生物起源后共同存在，人類開始飼養或利用家蠶后不久，應該就會發現該病的存在，家蠶、微孢子蟲和兩者相遇而發生蠶病的歷史即成為探究的問題。 （1）家蠶的起源和養蠶的歷史 有關家蠶（Sow知r OTor/）和養蠶（sericulture）的起源，已有太多的文獻和專業書籍對其進行了描述，簡而言之包括三個層面的論述。其一是傳說或后期的文字記載，主要有“伏羲化蠶”、“嫘祖始蠶”和“馬頭娘佑蠶”，即養蠶始于中華文化的人文初祖。其二是考古學的發現，1926年山西夏縣西夏村新石器時代遺址發掘，發現半顆被割裂的蠶繭，這半顆距今6950～4950年的蠶繭，形態大小介于現在的家蠶繭和野蠶繭之間；1928年河南省安陽縣開始殷墟考古，在挖掘出的甲骨上發現有“桑”、“蠶”、“絲”和“帛”等與家蠶及養蠶有關的文字（甲骨文，公元前1400年～公元前1100年）；1958年在浙江省吳興縣錢山漾發現的絹片、絲帶和絲線等，被考證為公元前2715年±100年的遺物。由此可見，我國人民發現和利用家蠶已有數千年的歷史（蔣猷龍，1982；嵇發根，1994；吳一舟，2005）。其三是包括形態和習性、染色體數目、遺傳距離和核酸多態性、線粒體脫氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）序列變化速率，以及血清學、數量性狀、生理生化指標和繭色等在內的生物學研究表明，家蠶是不同于野桑蠶（Bombyx mandarina）而獨立起源的昆蟲。 在公元前10世紀，我國已開始與東西方國家進行蠶種或絲綢交流，蠶種交流到不同國家和區域后，在當地開展了不同方式的馴化，在不同的國家和我國不同的地區也發現了大量生物學性狀不同的家蠶。因此，目前較為公認的家蠶起源是“多中心馴化”（蔣猷龍，1982）。我國自秦代以后，已有大量文獻記載了栽桑養蠶的生產過程（《詩經 豳風》）和相關技術（《氾勝之書》），其中也包括了一些與防病有關的記載（如“ 使蠶不疾病者，皆置之黃金一斤 ”《管子 山權數》）。1877年德國地質地理學家李；舴遥≧ichthofen）在其著作《中國》一書中，把從公元前114年至公元127年，中國與中亞、中國與印度間，以絲綢貿易為媒介的這條西域交通道路命名為“絲綢之路”，“絲綢之路”也是我國養蠶業在世界范圍內產生影響的重要事件（浙江大學，2001；吳一舟，2005；蔣猷龍，2007；呂鴻聲，2015）。 （2）家蠶微粒子病的發現 家蠶的起源和養蠶業的發展具有悠久的歷史，與之相較，有關家蠶微粒子病的發現記載則要遲得多。人類以文字方式記載該病害的*早文獻，可能是中國金朝（1115～1234年）末期《務本新書》中“拳翅無目、焦腳焦尾、無毛禿紋、黑身黑頭、先出而后生”對家蠶微粒子病病癥的描述，F存*早的文字記載，可能是清朝永瑢等編纂的《四庫全書》（1773年～）中轉載記錄的上述描述。其后，魯明善（1271～1368年）的《農桑衣食撮要》中“ 若有拳翅、禿眉、焦尾、赤肚、無毛等蛾，撿去不用 ”（魯明善，1962）、沈煉（1507～1557年）的《廣蠶桑說輯補》中“蛾出時，撿去拳翅、禿眉、焦尾、赤肚諸病蛾，而取其無病者 ”（沈煉，1960）、宋應星的《天工開物》（1637年）中“ 粒粒勻鋪，天然無一堆積 ”（宋應星，1936）等文獻，相繼記載了有關微粒子病病蛾的癥狀，以及剔除病蛾或病蛾所產蠶卵的技術措施，可防止其在次代養蠶群體中產生危害。這些經驗科學的積累和普及，也是我國養蠶產業持續輝煌的重要基礎之一。 在亨利四世（法國國王，波旁王朝的創建者，1553～1610年）時期，歐洲各國開始大規模發展養蠶，并在較早時期發現了家蠶微粒子病。德國、法國和意大利等國分別將家蠶的微粒子病稱為K6rperchen Krankheit、Maladie corpusculeuse和Malattia dei corpuscoli。在日本和印度等養蠶國家，對該病也有不同的稱謂和記載，如灰頭病、黑疲病、gattine（蠶疫）和cota等。1845年在法國東南部的沃克呂茲（Vaucluse）省發生該病，次年波及鄰近3個省份的蠶區，1851年蔓延全法國并波及德國、意大利和西班牙等歐洲其他養蠶國家。法國的蠶繭產量從1853年的26000t驟降到1865年的4000t，當年蠶繭減產導致了1億法郎的經濟損失。通過對不同蠶區輸入蠶種飼養結果的比較，發現該病的發生與蠶種密切相關，或認為該病的病因在于蠶種。1867年巴黎拿破侖高等學校自然歷史學者國利伐（Quatrefages）教授，對表面覆蓋黑色斑點的病蠶研究后，將其稱為“pebrme”（法國南部方言，意為“胡椒病”）（石川金太郎，1936；呂鴻聲，2008）。 （3）家蠶微粒子蟲的發現 家蠶微粒子病病原發現的社會背景，是歐洲科技（工業）革命和人文主義的興起。在經歷了文藝復興、宗教改革和啟蒙運動的歐洲，蒸汽機的發明和改良、質量守恒定律等在紡織工業領域的應用，大大促進了歐洲紡織工業的發展。集哲學家、科學家、工匠于一身的人才大量涌現，使科學和技術高速發展，呈現出一片繁榮的景象。 光學顯微鏡的發明和技術進步（詹森、利珀希、伽利略和列文虎克等），為微生物的發現和微生物學專業領域的發展提供了有效的技術基礎。意大利昆蟲學家巴西（BassO經過25年研究，在1835年發現家蠶白僵。ㄕ婢』蛴不。┑牟∫蚴遣≡⑸，即球孢白僵菌（Beauveria bassiana）的入侵，由此確立了微生物病原學說。1849年，法國學者介朗（Gu6rin，1799～1874年）用顯微鏡發現患病家蠶血液中存在著不同于家蠶血細胞的運動性微小顆粒，并將該病原體稱為“Hematozoides”。1853～1855年，英國學者萊貝特（Lebert）和弗雷耶（Freye）研究認為，寄生于病蠶中的微小粒子是一種酵母，將其稱為“Panhistophyton ovatum”或“Corpuscolo del Cornalia”，并提出該微小粒子可通過蠶卵傳染。1854年，法國學者奧西莫（Osimo）發現患病家蠶中的橢圓形小體，不僅附著于蠶卵表面，還存在于蠶卵內，并提出通過檢查蛹和卵來進行該病的預防（Franzen，2008）。1857年，瑞士植物學家內格里（Nageli）從患病家蠶中發現了家蠶微粒子蟲，認為其是一種真菌的孢子，并命名為Nosema bombycis，該命名被其后的分類學家巴爾比亞尼（Balbiani，“Microsporidia Balbiani1882”）、斯普拉格（Sprague）和貝克雷爾（Becnel）（1998年）的分類系統所確定，即Nosena bombycis Nageli1857，并一直沿用至今。 意大利真菌學家維塔蒂尼（Vitadrni）1859年在意大利的帕維亞大學研究家蠶微粒子病時，發現蠶卵和蟻蠶中存在微孢子蟲，以及在蟻蠶孵化前微孢子蟲數量大幅增加的現象，并提出通過促進催青、檢測蟻蠶防止該病害的方法。同期的英國學者科妮莉亞（Cornelia）也提出了通過檢測蠶卵預防該病的方法（Franzen，2008）。 家蠶微粒子蟲的發現和病害防控技術研究中，*為知名的當屬法國微生物學家、化學家、近代微生物學的奠基人巴斯德及其團隊。他們從1865年開始，對該病害進行了5年系統的調查和研究，在1870年發表《蠶病研究》（Etudes sur la maladie des vers a soie）專著。文中研究認為：①引起家蠶微粒子病的病原微生物是Nosema bombycis，在病變組織中發現游走體（planont）或雙核孢原質（binucleate sporoplasm）及裂殖體（schizont，Sc）的存在；②該病原可通過食下感染（oral infection，病蠶蠶糞污染桑葉喂詞健康家蠶后重演癥狀）和胚胎感染（embryonic infection，可通過感染母蛾傳遞給子代）兩種途徑在飼養群體中傳播；③采用隔離制種法可有效防控該病害流行，即建立了顯微鏡檢查母蛾法（病原在卵期難以發現，但在蛹和蛾期極易發現），淘汰有病母蛾所產蠶卵。巴斯德及其團隊的系統性研究成果，不僅在當時歐洲養蠶病害流行的控制中發揮了重要的作用，也奠定了家蠶微粒子病研究的理論認識和防控技術基礎。 在從蒸汽機到發電機發明與應用的兩次科技革命期間（1830～1870年），科學研究繁花似錦，科技成果碩果累累。達爾文在拉馬克（Larmarck，1744～1829年）和馬爾薩斯（Halthus，1766～1834年）等科學家提出的進化論觀點上，1859年與華萊士（Wallace）聯名發表了自然選擇的進化論，同年11月發表《物種起源》這部光輝巨作。同時代的巴斯德，則在介朗和內格里等學者發現病蠶體內存在家蠶微粒子蟲，以及萊貝特、弗雷耶和奧西莫等學者發現家蠶微粒子蟲在家蠶卵內存在，并可導致后代家蠶發病的研究基礎上，經過系統研究后發表了《蠶病研究》這部關于家蠶病害防控的專著。 巴斯德不僅在家蠶微粒子病的防控領域做出貢獻并成為經典科技成果，他在微生物學、消毒學和免疫學等領域的成就，為抵抗人類和動物疾病做出了更為巨大的貢獻。 （4）家蠶微粒子病研究的發展 巴斯德有關家蠶微粒子病系統性研究成果發表后的150多年，有關家蠶微粒子病及其防控技術的研究取得了大量的進展，這些進展和成果也成為我國與其他養蠶國家產業重要科學發展和技術進步的基礎。 在病原學研究方面，除內格里和巴斯德等學者對家蠶微粒子病的病原開展了大量的研究外，也有學者從其他一些生物中發現了類似于家蠶微粒子蟲QNosema bombycis）的微生物。例如，1838年格里格（Glugea）在魚上發現了后被命名為刺鯧格留蟲（.Glugea anomala）的微生物，克雷帕林（Creplin）和穆勒（Mtiller）分別在1841年和1842年觀察到類似的微生物。巴爾比亞尼（1882年）在經過系統研究后，首次提出應該將家蠶微粒子蟲（N.bowbvc/s）建立為單獨的分類學階元-微孢子蟲。泰羅漢（Th6lohan，1892～1895年）提出并建立微孢子蟲（Microsporidia）的分類系統。其后，拉韋（Labb6，1899年）、斯坦普爾（Stempell，1902年）、韋森博（Weissenberg，1922年）、工藤六三郎（Kudo，1931年）、魏澤爾（Weiser，1947年）、施泰因彖斯（Steinhaus，1959年）、瓦夫拉（Vavra，1976年）、斯普拉格（Sprague，1977年～）、伊思（Issi，1986年）、維特納（Wittner，1999年）和維斯（Weiss，1999年）等一大批學者對微孢子蟲的分類學研究做出了重要的貢獻（Sprague，1992；Franzen，2008）。 在微孢子蟲分類方面，重要或基礎性的內容主要涉及寄主、生活史、形態和分布等綜合性研究。在寄主種類方面，較早時期從家蠶和魚類上發現微孢子蟲后，1909年桑德爾（Zander）發現了蜜蜂微孢子蟲（Nosema apis）和熊蜂微孢子蟲（N.bombi），之后
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