中圖網小程序
一鍵登錄
更方便
本類五星書更多>
-
>
宇宙、量子和人類心靈
-
>
氣候文明史
-
>
南極100天
-
>
考研數學專題練1200題
-
>
希格斯:“上帝粒子”的發明與發現
-
>
神農架疊層石:10多億年前遠古海洋微生物建造的大堡礁
-
>
聲音簡史
生物化學與分子生物學實驗教程(第3版) 版權信息
- ISBN：9787030403902
- 條形碼：9787030403902 ; 978-7-03-040390-2
- 裝幀：一般膠版紙
- 冊數：暫無
- 重量：暫無
- 所屬分類：>
生物化學與分子生物學實驗教程(第3版) 內容簡介
生物化學及分子生物學是一門實踐性極強的學科，縱觀學科發展歷史，糖、脂肪、蛋白質與核酸研究的發展，均是在實驗研究基礎上建立，近代分子生物學的奠基石之一的雙螺旋結構學說更是在眾多實驗成果以及Watson和Crick研究總結的基礎上提出的，很難設想沒有實驗研究，生化及分子生物學會發展成今天的生物醫學學科的領頭羊地位。本教材中首先打破實驗教學依附于理論教學的傳統模式，重新確定實驗教學的地位。打破傳統的以驗證性實驗為主的框架，建立新的實驗比例，即綜合性、設計性比例為主，使學生在掌握基本實驗技術的基礎上，動手操作一些綜合性的大實驗，提高學生綜合分析能力及實驗動手能力。
生物化學與分子生物學實驗教程(第3版) 目錄
目錄
第1篇 總論
實驗須知 （1）
第1章 基本操作技術 （3）
第1節 玻璃器皿的清洗 （3）
第2節 吸量管的種類和使用 （4）
第3節 溶液的混勻、過濾及離心 （5）
第4節 實驗樣品的制備 （6）
第5節 分光光度法 （8）
第2章 電泳技術 （13）
第1節 電泳的基本原理 （13）
第2節 影響電泳的主要因素 （13）
第3節 區帶電泳的分類 （14）
第4節 幾種常見的電泳方法 （15）
第5節 二維電泳 （19）
第3章 層析技術 （24）
第1節 層析技術的分類 （24）
第2節 層析中的常用術語 （24）
第3節 紙層析 （27）
第4節 薄層層析 （28）
第5節 離子交換層析 （28）
第6節 凝膠層析 （30）
第7節 親和層析 （33）
第4章 離心分離技術 （34）
第1節 離心分離技術的原理 （34）
第2節 離心機的使用方法與維護 （35）
第3節 離心技術的分類與選擇 （36）
第4節 離心機轉子的種類與應用 （38）
第5章 印跡技術 （40）
第1節 Southern印跡雜交 （40）
第2節 Northern印跡雜交 （41）
第3節 斑點雜交 （42）
第4節 Western印跡雜交 （42）
第6章 聚合酶鏈式反應 （44）
第1節 PCR技術概述 （44）
第2節 PCR技術的基本原理 （44）
第3節 PCR反應條件的優化 （46）
第4節 PCR技術的擴展 （49）
第5節 PCR中應注意的問題 （52）
第6節 PCR在醫學中的應用 （54）
第2篇 各論
第7章 蛋白質與氨基酸 （55）
實驗1 蛋白質含量的測定 （55）
實驗2 凝膠層析法分離血紅蛋白和DNP-魚精蛋白（或DNP-酪蛋白） （59）
實驗3 酪蛋白等電點的測定 （62）
實驗4 氨基酸的薄層層析 （63）
實驗5 DNS-氨基酸聚酰胺薄膜雙向層析 （65）
第8章 酶學 （68）
實驗6 影響酶活性的因素 （68）
實驗7 蔗糖酶的專一性 （69）
實驗8 丙氨酸轉氨酶活性的測定 （72）
實驗9 乳酸脫氫酶同工酶的分離 （74）
實驗10 轉氨基反應 （76）
實驗11 琥珀酸脫氫酶的作用及競爭性抑制 （78）
實驗12 米氏常數的測定 （80）
第9章 糖、脂和生物氧化 （88）
實驗13 饑餓和飽食對肝糖原含量的影響 （88）
實驗14 血清甘油三酷測定 （89）
實驗15 高密度脂蛋白中膽固醇含量測定 （91）
實驗16 血清總膽固醇含量測定 （93）
實驗17 乳酸測定 （95）
實驗18 血中葡萄糖含量的測定 （99）
第10章 核酸 （103）
實驗19 細胞核的分離和純化 （103）
實驗20 核酸含量的測定 （105）
實驗21 酵母RNA的提取及組分鑒定 （108）
實驗22 真核細胞基因組DNA的制備與定量 （110）
實驗23 Southern印跡雜交 （111）
實驗24 Northern印跡雜交 （117）
實驗25 PCR擴增技術 （120）
實驗26 隨機擴增多態性DNA技術 （122）
第11章 綜合性實驗 （124）
實驗27 血清γ-球蛋白分離與純度 鑒定 （124）
實驗28 蛋白質的分離、提取、SDS-聚丙燦酰胺凝膠電泳及Western印跡 （127）
實驗29 脂蛋白的分離、提純和電泳鑒定 （136）
實驗30 大腸桿菌感受態細胞的制備及質粒DNA分子導入原核細胞、提取、純化鑒定 （140）
實驗31 堿性磷酸酶的純化及比活性和Km值的測定 （146）
實驗32 血清中鞘糖脂的分離與質譜分析 （150）
參考文獻 （154）
附錄一 （155）
附錄二 （169）
第1篇 總論
實驗須知 （1）
第1章 基本操作技術 （3）
第1節 玻璃器皿的清洗 （3）
第2節 吸量管的種類和使用 （4）
第3節 溶液的混勻、過濾及離心 （5）
第4節 實驗樣品的制備 （6）
第5節 分光光度法 （8）
第2章 電泳技術 （13）
第1節 電泳的基本原理 （13）
第2節 影響電泳的主要因素 （13）
第3節 區帶電泳的分類 （14）
第4節 幾種常見的電泳方法 （15）
第5節 二維電泳 （19）
第3章 層析技術 （24）
第1節 層析技術的分類 （24）
第2節 層析中的常用術語 （24）
第3節 紙層析 （27）
第4節 薄層層析 （28）
第5節 離子交換層析 （28）
第6節 凝膠層析 （30）
第7節 親和層析 （33）
第4章 離心分離技術 （34）
第1節 離心分離技術的原理 （34）
第2節 離心機的使用方法與維護 （35）
第3節 離心技術的分類與選擇 （36）
第4節 離心機轉子的種類與應用 （38）
第5章 印跡技術 （40）
第1節 Southern印跡雜交 （40）
第2節 Northern印跡雜交 （41）
第3節 斑點雜交 （42）
第4節 Western印跡雜交 （42）
第6章 聚合酶鏈式反應 （44）
第1節 PCR技術概述 （44）
第2節 PCR技術的基本原理 （44）
第3節 PCR反應條件的優化 （46）
第4節 PCR技術的擴展 （49）
第5節 PCR中應注意的問題 （52）
第6節 PCR在醫學中的應用 （54）
第2篇 各論
第7章 蛋白質與氨基酸 （55）
實驗1 蛋白質含量的測定 （55）
實驗2 凝膠層析法分離血紅蛋白和DNP-魚精蛋白（或DNP-酪蛋白） （59）
實驗3 酪蛋白等電點的測定 （62）
實驗4 氨基酸的薄層層析 （63）
實驗5 DNS-氨基酸聚酰胺薄膜雙向層析 （65）
第8章 酶學 （68）
實驗6 影響酶活性的因素 （68）
實驗7 蔗糖酶的專一性 （69）
實驗8 丙氨酸轉氨酶活性的測定 （72）
實驗9 乳酸脫氫酶同工酶的分離 （74）
實驗10 轉氨基反應 （76）
實驗11 琥珀酸脫氫酶的作用及競爭性抑制 （78）
實驗12 米氏常數的測定 （80）
第9章 糖、脂和生物氧化 （88）
實驗13 饑餓和飽食對肝糖原含量的影響 （88）
實驗14 血清甘油三酷測定 （89）
實驗15 高密度脂蛋白中膽固醇含量測定 （91）
實驗16 血清總膽固醇含量測定 （93）
實驗17 乳酸測定 （95）
實驗18 血中葡萄糖含量的測定 （99）
第10章 核酸 （103）
實驗19 細胞核的分離和純化 （103）
實驗20 核酸含量的測定 （105）
實驗21 酵母RNA的提取及組分鑒定 （108）
實驗22 真核細胞基因組DNA的制備與定量 （110）
實驗23 Southern印跡雜交 （111）
實驗24 Northern印跡雜交 （117）
實驗25 PCR擴增技術 （120）
實驗26 隨機擴增多態性DNA技術 （122）
第11章 綜合性實驗 （124）
實驗27 血清γ-球蛋白分離與純度 鑒定 （124）
實驗28 蛋白質的分離、提取、SDS-聚丙燦酰胺凝膠電泳及Western印跡 （127）
實驗29 脂蛋白的分離、提純和電泳鑒定 （136）
實驗30 大腸桿菌感受態細胞的制備及質粒DNA分子導入原核細胞、提取、純化鑒定 （140）
實驗31 堿性磷酸酶的純化及比活性和Km值的測定 （146）
實驗32 血清中鞘糖脂的分離與質譜分析 （150）
參考文獻 （154）
附錄一 （155）
附錄二 （169）
展開全部
生物化學與分子生物學實驗教程(第3版) 節選
第1篇 總論 實驗須知 生物化學與分子生物學實驗課是教學的重要環節。通過實驗教學，觀察某些生化與分子生物學反應現象，聯系并加深對理論內容的理解，驗證和鞏固理論知識；掌握生化與分子生物學實驗的基本操作、實驗原理和一般儀器的使用；培養科學實驗技能和嚴謹的科學態度，準確記錄，科學分析并作出實事求是的實驗報告，逐步提高觀察問題、分析問題和解決問題的能力，為今后學習生物醫學專業后續課程打好必要的基礎。 [實驗要求] （1）實驗前必須預習，明確實驗目的，了解基本原理、主要操作、注意事項及預期結果。 （2）實驗中操作應嚴肅認真，注意觀察，如實記錄實驗過程中出現的現象、數據與結果。 （3）實驗后及時整理總結，根據實驗結果進行科學分析，按時書寫并提交實驗報告。 [試劑使用] （1）仔細辨認試劑標簽，看清名稱及濃度，切勿用錯。 （2）使用滴管時，滴管尖端朝下，不可倒置，以免試劑流入橡皮帽。 （3）用吸量管取液體時，應該用吸耳球吸，不能用嘴吸。 （4）取出試劑后，立即蓋好瓶塞并將試劑瓶放回原處，瓶塞不要蓋錯。 （5）吸標準溶液時，應先將標準液倒入干凈試管中，再用吸量管吸，以防污染瓶中標準溶液。 [實驗報告] 包括實驗名稱、日期、目的、要求、原理、操作、結果、分析、討論等。 （1）目的要求、原理及操作，應簡單扼要的敘述，但必須寫清楚操作的關鍵環節。 （2）一般實驗要有結論，扼要簡單的說明本次實驗獲得的結果。 （3）實驗數據結果，應歸納整理成各種圖表（如標準曲線圖、對照與實驗組的比較表等）。 （4）分析討論是對實驗方法、結果、異，F象的探討和評論及對實驗設計的認識、體會、建議，不是對結果的重述。 （5）書寫報告時應實事求是，字跡清楚、工整，杜絕抄襲。 [實驗室清潔] （1）保持實驗室的安靜與整潔，不隨地吐痰及亂丟紙屑；注意衛生，不在實驗室里吃食物。 （2）所有固體廢棄物（棉花、紗布、濾紙等），須丟入垃圾筒中，不可棄于桌上及水池里。 （3）濃酸應倒入專用小缽中，用水稀釋沖淡后再流水沖洗。 （4）有毒及有害物不能扔在簸箕里，應專門收集并無害化處理。 （5）實驗完畢，所有公用物品擺放整齊，各自清理自己的實驗桌面，清洗所用器材。 （6）實驗室由值日小組（依次以實驗桌為單位）輪流負責打掃，關好水電及門窗。 [安全注意事項] （1）易燃易爆試劑應遠離火源，低沸點有機溶劑如需加熱定要用水浴。 （2）發煙或產生有毒氣體的實驗應在通風櫥內進行。 （3）實驗室若起火應根據起火性質分別采用沙子、水、四氯化碳滅火器等撲救。 （4）如遇酸堿灼傷皮膚應先及時用水沖洗，酸灼者再用飽和NaHCO3液中和；堿灼者再用飽和H3BO3液中和；氧化劑傷害者用Na2S2O3處理。 （王卉放 錢暉） 第1章 基本操作技術 第1節 玻璃器皿的清洗 生物化學與分子生物學實驗常用各種玻璃器皿，其清潔程度直接影響測量樣品的可靠性和反應的準確性。因此玻璃器皿的清潔不僅是實驗前后的常規工作，而且是一項重要的基本技術。玻璃器皿的清洗方法很多，需要根據實驗的要求以及污物性質，選用不同的方法。洗滌的玻璃器皿要求清潔透明，玻璃表面不含可溶解的物質，水沿器壁自然下流時不掛水珠。 一、新購器皿的清洗 新購器皿表面附著油污和灰塵，特別是附著可游離的金屬離子。因此，新購器皿需要用肥堪水刷洗，流水沖凈后，浸于0.93moI/L Na2CO3溶液中煮沸。用流水沖凈后，再浸泡于0.3~0.6mol/L HCl溶液中過夜。流水洗凈酸液，用蒸餾水少量多次蕩洗后，干燥備用。 二、用過玻璃器皿的清洗 1.—般非計量玻璃器皿或粗容量器皿（如試管、燒杯、量筒等）先用肥皂水刷洗，再用 自來水沖洗干凈，*后用蒸餾水蕩洗2~3次后，倒置于清潔處晾干。 2.容量分析器皿（如吸量管、滴定管、容量瓶等）先用自來水沖洗，晾干后浸于鉻酸洗液中浸泡數小時，然后用自來水和蒸餾水沖洗干凈并干燥備用。 3.比色杯用畢立即用自來水反復沖洗，如有污物黏附于杯壁，宜用鹽酸或適當溶劑清洗。然后用自來水、蒸餾水沖洗干凈。切忌用刷子、粗糙的布或濾紙等擦拭。洗凈后，倒置晾干備用。 三、清洗液的種類及配制 1.肥皂水和洗衣粉溶液這是*常用的洗滌劑，主要是利用其乳化作用除去污垢，一般玻璃器皿均可用其刷洗。 2.鉻酸洗液廣泛用于玻璃器皿的洗滌，其清潔效力來自于它的強氧化性和強酸性。由重鉻酸鉀（K2Cr2O7）和濃硫酸配制而成，硫酸越濃，鉻酸越多，其清潔效力越強。洗液具有強腐蝕性，使用時必須注意安全。當洗液由棕紅色變為綠色時則不宜再用。 主要有下列3種配制方法： （1）常用鉻酸洗液的濃度為3%~5%。方法是:重鉻酸鉀5g置250ml燒杯中，加入熱水5ml攪拌。為使其盡量溶解，在燒杯下放一石棉網，向燒杯中緩慢加入工業用濃硫酸100ml，隨加隨攪拌。硫酸不宜加入過快，注意不要濺出來。此時溶液由紅黃色變為黑褐色。冷卻后裝瓶備用并蓋嚴以防吸水。 （2）取100ml工業用濃硫酸置燒杯中，小心加熱，然后慢慢加入5g重鉻酸鉀粉，邊加邊攪拌，待全部溶解后冷卻，貯于具塞的細口瓶中。 （3）取80g重鉻酸鉀溶于1000ml水中，慢慢加入工業用硫酸，邊加邊攪拌，冷卻后備用。 3.乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-Na2）洗液濃度為5%~10%的EDTA-Na2洗液加熱煮沸，可去除玻璃器皿內部鈣鎂鹽類的白色沉淀和不易溶解的重金屬鹽類。 4.草酸洗液草酸5~10g，溶于100ml水中，加入少量硫酸或濃鹽酸，可洗脫高錳酸鉀的痕跡。 5.尿素洗液45%的尿素溶液是清洗血污和蛋白質的良好溶劑。 6.鹽酸-乙醇洗液3%的鹽酸-乙醇洗液可以除去玻璃器皿上附著的染料。 7.乙酸-硝酸混合液用于清洗一般方法難以洗凈的有機物，*適于清洗滴定管。 8.50g/L Na3PO4 12H2O水溶液堿性液體可用于洗滌油污，所洗器皿不可用于磷的測定。 第2節 吸量管的種類和使用 吸量管是生化實驗*常用的儀器之一，微量移液器則是分子生物學實驗必用之器材，測定的準確度與吸量管及微量移液器的正確選擇和使用密切相關。 一、吸量管的種類 常用的吸量管可以分為3種： 1.移液管常量取50.0ml、25.0ml、10.0ml、5.0ml、2.0ml、1.0ml的液體。這種吸量管只有1個刻度，放液時，量取的液體自然流出后，管尖需在盛器內壁停留15s。注意管尖殘留液體不要吹出。 2.奧氏吸管供準確量取0.5ml、l.0ml、2.0ml、3.0ml液體用。此吸量管只有1個刻度，當放出所量取的液體時，管尖余留的液體必須吹入盛器內。 3.刻度吸管供量取10ml以下任意體積的液體。一般刻度包括尖端部分。將所量液體全部放出后，還需要吹出殘留于管尖的溶液。此類吸管為“吹出式”，吸管上端標有“吹”或“快”字。未標“吹”或“快”字的吸管，則不必吹出管尖的殘留液體。 二、吸量管的使用 1.選用原則量取整數量體積液體并且取量要求準確時，應選用奧氏吸管；量取大體積液體時，要用移液管；量取任意體積（10ml以下）的液體時，應選用取液量*接近的刻度吸管。如取0.15ml液體，應選用0.2ml的刻度吸管。同一定量實驗中，要加同種試劑于不同試管中且取量不同時，應選擇與*大取液量接近的1支刻度吸管。如各試管應加液體量為0.3ml、0.5ml、0.7ml、0.9ml時應選用1支1.0ml的刻度吸管。 2.使用中指和拇指拿住吸管上端，食指置吸管上端旁；用橡皮球吸液體至刻度上，眼睛看著液面上升；吸完后用食指頂住吸管頂端，用濾紙擦干其外壁；吸管保持垂直，尖端與試劑瓶接觸，用食指控制液體下降至所需體積的刻度處，液體凹面、刻度和視線應在同一水平面上；吸管移入準備接受溶液的盛器中，其出口尖端接觸器壁并成一角度，吸管仍保持垂直；放開食指，使液體自動流出。 三、自動移液器的使用 1.操作將吸嘴牢固地裝在吸引桿上，裝上后輕輕地旋轉一下以保證氣密；撳按鈕到**停止點（A），把吸嘴頭尖浸入取樣液內2~5mm，釋放按鈕，使之慢慢返回到初始位置，停留1s；把吸嘴沿取樣容器壁滑動從取樣液內取出，用濾紙擦去吸嘴外面的液體，注意不要接觸到吸嘴頭尖孔；把移液器的吸嘴頭尖置于加樣容器壁上，用拇指慢慢地將按鈕撳到**停止點，停留1s（黏性較高的溶液停留時間長些）；然后撳到第二停止點（B），再讓吸嘴沿著容器壁向上滑動，當吸嘴頭尖與容器壁或溶液不接觸時釋放按鈕，使其返回到初始位置（0），如圖1-1和圖1-2。 圖1-1 自動移液器的構造 圖1-2 自動移液器的使用 2.注意事項 （1）當移液器吸取溶液時（尤其是血清、蛋白質和有機溶液），在吸嘴的內壁將會有一薄膜形成，如果吸嘴僅填充1次會導致比規定值大的誤差。因為此薄膜在同一吸嘴連續取溶液時能保持相對的常量，則在以后重復填充該吸嘴時能獲得較高的精度。所以取樣之前通過該溶液預先潤洗吸嘴對獲得較好的精度是很重要的。 （2）提高移液精度的要點是吸液和排液的速度盡可能一致，切忌“啪”地一下釋放按鈕；取樣時每次浸入相同的液體深度（不得超過5mm）并保持移液器垂直向下；吸取過冷、較熱的樣品時，應使吸嘴溫度與樣品溫度接近，以免樣品熱脹冷縮。 （3）注意不要接觸會損害吸嘴的硝酸或硫酸溶液。 （4）移液器不能高壓消毒，吸嘴可以。 第3節 溶液的混勻、過濾及離心 一、溶液的混勻 生物化學及分子生物學實驗中，為使化學反應充分進行，加入試劑后的充分混勻是保證實驗成功的又一關鍵。一般有以下幾種混勾方式： 1.腕混勻 右手持試管上端，利用手腕的旋轉，使試管作圓周運動，使液體混勻。 2.指彈混勻 左手持試管上部，試管與地面垂直。右手手指呈切線方向快撥試管下部，使管內液體呈渦狀轉動。 3.吹吸混勻 用吸管、滴管或移液器將溶液反復吹吸數次，使溶液混勻。 4.攪動混勻 用細玻棒攪動大試管或燒杯內容物（如固體試劑）使之混勻。 5.甩動混勻 試管內液體較少時可采用。 6.磁攪拌混勻 一般用于燒杯內容物的混勻。 7.旋渦器混勻 所有混勻操作都應防止管內液體濺出，以免造成液體流失。嚴禁用手指堵住試管口混勻液體，防止污染和樣品的損失。 二、過濾 過濾用于收集濾液、沉淀或洗滌沉淀。在生化實驗中如用于收集濾液，應選用干濾紙，不應將濾紙先弄濕，濕濾紙將影響濾液的稀釋比例。濾紙過濾一般采用平折法（即對折后再對折），且使濾紙上緣與漏斗壁完全吻合不留縫隙。向漏斗內加液時，要用玻棒引流而且不應倒人過快，勿使液面超過濾紙上緣。較粗的過濾可用紗布或脫脂棉代替濾紙。要將沉淀與母液分開，過濾和離心都可以。當沉淀黏稠或顆粒小得可以通過濾紙時，應選用離心法。溶液量小又需定量測定時，離心分離更有優越性。 三、離心 離心機是利用離心力，分離液體與固體顆粒或液體與液體的混合物中各組分的機械。離心機主要用于將懸浮液中的固體顆粒與液體分開，或將乳濁液中兩種密度不同，又互不相溶的液體分開，它也可用于排除濕固體中的液體。離心機種類很多，按離心力來分可將離心機分為常速離心機（600~1200r/min）、高速離心機（3500~50000r/min）、超高速離心機（>50000r/min）
書友推薦
- >
莉莉和章魚
- >
【精裝繪本】畫給孩子的中國神話
- >
人文閱讀與收藏·良友文學叢書:一天的工作
- >
中國歷史的瞬間
- >
姑媽的寶刀
- >
伊索寓言-世界文學名著典藏-全譯本
- >
上帝之肋:男人的真實旅程
- >
山海經
本類暢銷
