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細胞生物學實驗簡明教程與習題指南 版權信息
- ISBN：9787030487551
- 條形碼：9787030487551 ; 978-7-03-048755-1
- 裝幀：一般膠版紙
- 冊數：暫無
- 重量：暫無
- 所屬分類：>
細胞生物學實驗簡明教程與習題指南 內容簡介
本書分兩篇：**篇為細胞生物學實驗教程，包括基礎、綜合性實驗和設計、研究性實驗兩部分，共28個實驗。所選實驗均為細胞生物學實驗基本的、經典的技術和方法，內容包括細胞形態結構的顯微和亞顯微結構觀察、細胞器分離與觀察技術、細胞生理生化技術、細胞分裂、染色體制片與核型分析技術、細胞培養和細胞工程技術、細胞轉染、細胞凋亡的誘導和細胞凋亡的流式細胞儀檢測等。第二篇為細胞生物學習題指南，目的是幫助學生理解、消化和鞏固課堂內容。
細胞生物學實驗簡明教程與習題指南 目錄
目錄
**篇細胞生物學實驗簡明教程
**部分基礎性、綜合性實驗3
實驗一普通光學顯微鏡的原理、結構及使用方法——染色體、核仁組織區、染色體帶型標本的觀察3
實驗二顯微制片的基本方法與技術9
Ⅰ．臨時制片法9
Ⅱ．**制片法11
實驗三熒光顯微鏡的原理、結構及使用方法14
實驗四相差顯微鏡的原理、結構及使用方法19
實驗五數碼顯微攝影技術22
實驗六流式細胞儀的原理、結構及使用方法26
實驗七電子顯微鏡的原理、結構及演示30
實驗八細胞大小和數目的測量及計算32
實驗九細胞器的分離、純化和鑒定36
Ⅰ．葉綠體的分離與熒光觀察36
Ⅱ．差速離心法分離線粒體38
實驗十細胞骨架觀察40
Ⅰ．細胞的胞質環流40
Ⅱ．細胞骨架的顯示和光學顯微鏡觀察42
實驗十一細胞膜的滲透性44
實驗十二植物凝集素對紅細胞的凝集作用45
實驗十三小鼠腹腔巨噬細胞的吞噬實驗48
實驗十四DNA的細胞化學——Feulgen反應50
實驗十五細胞中多糖和過氧化物酶的定位觀察52
實驗十六線粒體和液泡系的超活染色與觀察54
實驗十七細胞核仁組織區的銀染色法57
實驗十八細胞的有絲分裂與減數分裂觀察59
Ⅰ．細胞有絲分裂觀察59
Ⅱ．細胞減數分裂觀察60
實驗十九植物染色體標本的臨時制備與觀察63
實驗二十蛙類骨髓細胞染色體標本制備66
實驗二十一動物細胞染色體核型分析68
實驗二十二動物細胞原代培養技術70
實驗二十三動物胚胎干細胞的分離與培養技術72
實驗二十四煙草葉肉原生質體的分離、融合與培養76
第二部分研究性、設計性實驗79
實驗二十五細胞周期時相及藥物阻斷的流式細胞儀檢測79
實驗二十六細胞凋亡的誘導和流式細胞儀檢測81
實驗二十七細胞微核檢測技術83
實驗二十八孢子萌發、細胞分裂、生長分化及配子體發育的細胞學研究86
第二篇細胞生物學習題指南
**部分習題精選93
**章緒論93
第二章細胞的統一性和多樣性94
第三章細胞生物學研究方法96
第四章細胞質膜98
第五章物質的跨膜運輸99
第六章細胞的能量轉換——線粒體和葉綠體100
第七章真核細胞內膜系統、蛋白質分選與膜泡運輸103
第八章細胞信號轉導106
第九章細胞骨架108
第十章細胞核與染色體109
第十一章核糖體111
第十二章細胞增殖及其調控113
第十三章程序性細胞死亡與細胞衰老115
第十四章細胞分化與癌細胞116
第十五章細胞社會的聯系：細胞連接、細胞黏著和細胞外基質118
第二部分參考答案121
**章緒論121
第二章細胞的統一性和多樣性123
第三章細胞生物學研究方法126
第四章細胞質膜127
第五章物質的跨膜運輸129
第六章細胞的能量轉換——線粒體和葉綠體132
第七章真核細胞內膜系統、蛋白質分選與膜泡運輸135
第八章細胞信號轉導140
第九章細胞骨架145
第十章細胞核與染色體146
第十一章核糖體150
第十二章細胞增殖及其調控151
第十三章程序性細胞死亡與細胞衰老155
第十四章細胞分化與癌細胞158
第十五章細胞社會的聯系：細胞連接、細胞黏著和細胞外基質160
參考文獻162
附錄一實驗室規則163
附錄二細胞生物學實驗繪圖方法與要求163
**篇細胞生物學實驗簡明教程
**部分基礎性、綜合性實驗3
實驗一普通光學顯微鏡的原理、結構及使用方法——染色體、核仁組織區、染色體帶型標本的觀察3
實驗二顯微制片的基本方法與技術9
Ⅰ．臨時制片法9
Ⅱ．**制片法11
實驗三熒光顯微鏡的原理、結構及使用方法14
實驗四相差顯微鏡的原理、結構及使用方法19
實驗五數碼顯微攝影技術22
實驗六流式細胞儀的原理、結構及使用方法26
實驗七電子顯微鏡的原理、結構及演示30
實驗八細胞大小和數目的測量及計算32
實驗九細胞器的分離、純化和鑒定36
Ⅰ．葉綠體的分離與熒光觀察36
Ⅱ．差速離心法分離線粒體38
實驗十細胞骨架觀察40
Ⅰ．細胞的胞質環流40
Ⅱ．細胞骨架的顯示和光學顯微鏡觀察42
實驗十一細胞膜的滲透性44
實驗十二植物凝集素對紅細胞的凝集作用45
實驗十三小鼠腹腔巨噬細胞的吞噬實驗48
實驗十四DNA的細胞化學——Feulgen反應50
實驗十五細胞中多糖和過氧化物酶的定位觀察52
實驗十六線粒體和液泡系的超活染色與觀察54
實驗十七細胞核仁組織區的銀染色法57
實驗十八細胞的有絲分裂與減數分裂觀察59
Ⅰ．細胞有絲分裂觀察59
Ⅱ．細胞減數分裂觀察60
實驗十九植物染色體標本的臨時制備與觀察63
實驗二十蛙類骨髓細胞染色體標本制備66
實驗二十一動物細胞染色體核型分析68
實驗二十二動物細胞原代培養技術70
實驗二十三動物胚胎干細胞的分離與培養技術72
實驗二十四煙草葉肉原生質體的分離、融合與培養76
第二部分研究性、設計性實驗79
實驗二十五細胞周期時相及藥物阻斷的流式細胞儀檢測79
實驗二十六細胞凋亡的誘導和流式細胞儀檢測81
實驗二十七細胞微核檢測技術83
實驗二十八孢子萌發、細胞分裂、生長分化及配子體發育的細胞學研究86
第二篇細胞生物學習題指南
**部分習題精選93
**章緒論93
第二章細胞的統一性和多樣性94
第三章細胞生物學研究方法96
第四章細胞質膜98
第五章物質的跨膜運輸99
第六章細胞的能量轉換——線粒體和葉綠體100
第七章真核細胞內膜系統、蛋白質分選與膜泡運輸103
第八章細胞信號轉導106
第九章細胞骨架108
第十章細胞核與染色體109
第十一章核糖體111
第十二章細胞增殖及其調控113
第十三章程序性細胞死亡與細胞衰老115
第十四章細胞分化與癌細胞116
第十五章細胞社會的聯系：細胞連接、細胞黏著和細胞外基質118
第二部分參考答案121
**章緒論121
第二章細胞的統一性和多樣性123
第三章細胞生物學研究方法126
第四章細胞質膜127
第五章物質的跨膜運輸129
第六章細胞的能量轉換——線粒體和葉綠體132
第七章真核細胞內膜系統、蛋白質分選與膜泡運輸135
第八章細胞信號轉導140
第九章細胞骨架145
第十章細胞核與染色體146
第十一章核糖體150
第十二章細胞增殖及其調控151
第十三章程序性細胞死亡與細胞衰老155
第十四章細胞分化與癌細胞158
第十五章細胞社會的聯系：細胞連接、細胞黏著和細胞外基質160
參考文獻162
附錄一實驗室規則163
附錄二細胞生物學實驗繪圖方法與要求163
展開全部
細胞生物學實驗簡明教程與習題指南 節選
**篇細胞生物學實驗簡明教程 **部分基礎性、綜合性實驗 實驗一普通光學顯微鏡的原理、結構及使用方法——染色體、核仁組織區、染色體帶型標本的觀察 【實驗目的】 （1）了解普通光學顯微鏡的原理、結構。 （2）掌握普通光學顯微鏡的使用方法。 （3）了解染色體、核仁組織區、染色體帶型標本制備的原理。 （4）掌握人類染色體、核仁組織區、染色體帶型的特征。 【實驗原理】 顯微鏡的主要部分是目鏡和物鏡，為兩組凸透鏡。物鏡的焦距短，目鏡的焦距較長，其成像原理如圖1-1所示。當被觀察物體AB放在物鏡前方的1~2倍焦距之間時，光線通過物鏡在鏡筒中形成一個放大的倒立實像A'B′，這個實像恰好位于目鏡的焦平面之內，通過目鏡后形成一個放大的倒立虛像A″B″。用調焦裝置使A″B″落在人眼睛的明視距離（25mm）內，眼睛看到的物體才昀清晰。從圖1-1可以看出，A″B″的視角比眼睛直接看AB的視角大得多，因此用顯微鏡可以看清非常微小的物體。 圖1-1普通光學顯微鏡成像原理圖 向培養物中加入適量秋水仙素可使紡錘體微管解聚，導致細胞停留在中期，從而獲得大量的分裂細胞。用低滲鹽溶液（一般是0.075mol/L的KCl）處理，使其中的紅細胞及分裂象細胞膜和一部分細胞質除去，昀后以氣干法制片，可獲得較好的染色體標本。 核仁組織區（NOR）是染色體上編碼5.8SrRNA、18SrRNA和28SrRNA的基因（rDNA）所在的部位。染色體上具有轉錄活性或已轉錄過rRNA基因的部位伴有豐富的酸性蛋白（C23蛋白，分子質量100kDa；B23蛋白，分子質量37kDa），這類酸性蛋白含有SH基團和二硫鍵，可將AgNO3中的Ag+還原成黑色的Ag顆粒，故有轉錄活性的核仁組織區可被AgNO3鍍上顆粒而呈黑色，無轉錄活性的核仁組織區則不被著色。銀染色強度與rRNA的轉錄活性有關。 近代染色體顯帶技術始于Caspersson及其同事，以及Pardue和Gall的開拓性研究，前者運用熒光素芥子喹吖因（QM）使染色體的不同區段出現亮暗相間的帶紋，后者在原位雜交中使染色體的著絲粒區域染上深色。隨后相繼出現了Q、G、C、R、N、T、Cd等多種類型的顯帶技術，顯示染色體的許多亞結構，昀常用的一種是G-顯帶技術。 G-帶的形成與Giemsa染料組成的染色特性是分不開的。Giemsa染料由不同噻嗪染料混合物（昀重要的是天青）和伊紅組成，而染色體的著色有賴于在原位形成噻嗪-伊紅（2：1）沉淀物。著色過程：首先，兩個噻嗪分子與DNA結合，然后再與一個伊紅分子結合；其次，需要一個疏水環境，以利于染料沉淀物的累積。染色體上含有高濃度疏水性蛋白質的區域，有利于噻嗪-伊紅沉淀物的形成。這些區域相當于含高比例二硫鍵的氧化態蛋白質區域，經過一系列處理后顯示暗帶；而另一些區域（明帶區）則為含巰基的還原態蛋白質區域，為親水性蛋白質，對染料的親和力低，不易顯色。這表明在G-帶的形成過程中，蛋白質狀態是一個很關鍵的因素，這與染色體的功能有關。如果染色體上某一區域的DNA為重復序列，則其轉錄活性就低，相應地包裝它們的蛋白質也就較穩定，可能通過較強的二硫鍵形成很穩定的疏水的α螺旋結構，成為染料沉淀物沉積的環境，從而顯示出陽性帶；相反如果染色體上某一區域的DNA富含具有轉錄活性的結構基因，則其在功能上就相對活躍，包裝它們的蛋白質也就較疏松，在構象上類似于β折疊結構，經處理后，二硫鍵斷裂，還原為巰基，成為親水性蛋白質而不利于染料沉淀物的積累，所以著色淺，顯示陰性帶。 G-帶有許多優點：染色是**性的，標本保存時間長，帶紋通常較穩定，有利于染色體的結構分析，以及物種之間染色體同源性的比較。 【實驗用品】 器具：顯微鏡、電子天平、冰箱、超聲波清洗機、載玻片、蓋玻片、尖頭鑷子、刀片、標記筆、量筒、吸管、橡皮頭、吸水紙、擦鏡紙、細口瓶、廣口瓶、燒杯、玻璃棒、容量瓶、洗瓶、滴瓶。 材料：染色體、核仁組織區、染色體帶型標本。 【實驗方法和步驟】 一、普通光學顯微鏡的構造 普通光學顯微鏡的構造主要分為三部分：機械部分、照明部分和光學部分（圖1-2）。 圖1-2普通光學顯微鏡的構造 1．機械部分 （1）鏡座：是指顯微鏡的底座，用以支持整個鏡體。 （2）鏡柱：是指鏡座上面直立的部分，用以連接鏡座和鏡臂。 （3）鏡臂：一端連于鏡柱，一端連于鏡筒，支持鏡筒與鏡臺，是取放顯微鏡時手握的部位。 （4）鏡筒：連在鏡臂的前上方，鏡筒上端裝有目鏡，下端裝有物鏡轉換器，保護成像的光路和亮度。 （5）物鏡轉換器：接于鏡筒下方的圓盤狀部件，可自由轉動，盤上有3個或4個圓孔，是安裝物鏡的部位。轉動轉換器，可以調換不同倍數的物鏡，當聽到碰叩聲后方可進行觀察，此時物鏡光軸恰好對準通光孔中心，光路接通。 （6）鏡臺（載物臺）：在鏡筒下方，有方形、圓形兩種，用以放置玻片標本，中央有一通光孔，鏡臺上裝有玻片標本推進器（推片器），推進器左側有彈簧夾，用以夾持玻片標本，鏡臺下有推進器調節輪，可使玻片標本作左右、前后方向的移動。 （7）調節器：是指裝在鏡柱上的大小兩種螺旋，調節時使鏡臺作上、下方向的移動，用以調節焦距。①粗調節器（大螺旋）：大螺旋稱為粗調節器，移動時可使鏡臺作快速和較大幅度的升降，迅速調節物鏡和標本之間的距離使物像呈現于視野中，通常在使用低倍鏡時，先用粗調節器迅速找到物像。②細調節器（小螺旋）：小螺旋稱為細調節器，移動時可使鏡臺緩慢地升降，多在運用高倍鏡時使用，從而得到更清晰的物像，并借以觀察標本不同層次和不同深度的結構。 2．照明部分 裝在鏡臺下方、包括反光鏡、集光器。 （1）反光鏡：裝在鏡座上面，可向任意方向轉動，有平、凹兩面，其作用是將光源光線反射到聚光器上，再經通光孔照明標本。凹面鏡聚光作用強，適于光線較弱時使用；平面鏡聚光作用弱，適于光線較強時使用。 （2）集光器（聚光器）：位于鏡臺下方的集光器架上，由聚光鏡和光圈組成，其作用是把光線集中到所要觀察的標本上。①聚光鏡：由一片或數片透鏡組成，起匯聚光線的作用，加強對標本的照明，并使光線射入物鏡內，升降聚光器可以調節視野中光亮度的強弱。②光圈（虹彩光圈）：在聚光鏡下方，由十幾張金屬薄片組成，其外側伸出一柄，推動它可調節其開孔的大小，以調節通過的光量。 3．光學部分 （1）目鏡：裝在鏡筒的上端，通常備有2個或3個目鏡，上面刻有5×、10×或15×符號，表示其放大倍數，一般裝的是10×的目鏡。 裝在鏡臺下方，包括反光鏡、集光器。 （2）物鏡：裝在鏡筒下端的物鏡轉換器上，一般有3個或4個物鏡，其中刻有“10×”符號的為低倍鏡，刻有“40×”符號的為高倍鏡，刻有“100×”符號的為油鏡。通常在物鏡上標有主要的性能指標：放大倍數和鏡口率，如10/0.25、40/0.65和100/1.30；鏡筒長度和所要求的蓋玻片厚度，如160/0.17mm（圖1-3）。 鏡口率（numericalaperture，N.A.）反映該鏡頭分辨力的大小，其數字越大，表示分辨率越高。各物鏡的鏡口率如表1-1所示。 表1-1不同倍數物鏡的比較 圖1-3不同倍數物鏡 表1-1中的工作距離是指顯微鏡處于工作狀態（物像調節清楚）時物鏡的下表面與蓋玻片上表面之間的距離，物鏡的放大倍數越大，它的工作距離越小。 顯微鏡的放大倍數是物鏡的放大倍數與目鏡的放大倍數的乘積。例如，物鏡為10×，目鏡為10×，其放大倍數就為10×10＝100。 二、普通光學顯微鏡的使用方法 1．低倍鏡的使用方法 （1）取鏡和放置：顯微鏡平時存放在柜或箱中，用時從柜中取出，右手緊握鏡臂，左手托住鏡座，將顯微鏡放在自己左肩前方的實驗臺上，鏡座后端距桌邊3~6cm為
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