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白樺BpGT14基因和啟動子的克隆及功能分析 版權信息
- ISBN：9787030544377
- 條形碼：9787030544377 ; 978-7-03-054437-7
- 裝幀：一般膠版紙
- 冊數：暫無
- 重量：暫無
- 所屬分類：>
白樺BpGT14基因和啟動子的克隆及功能分析 本書特色
本研究旨在明確糖基轉移酶BpGT14基因在白樺生長發育中的功能，克隆了白樺GT14基因全長序列和啟動子區，分析了其結構特征和表達模式，獲得了pRNAi-GG-BpGT14轉基因白樺。結果顯示：RNAi白樺莖橫截面中木質部面積增加了23%～47%，而韌皮部面積比例無明顯變化；木質部中導管面積為對照的1.82～2.16倍，韌皮纖維面積比例無明顯變化。干擾白樺纖維素含量無明顯變化，半纖維素、果膠質含量顯著降低，相比野生型分別減少了約40%和10%，說明BpGT14在植物半纖維素、果膠質等細胞壁多糖合成中具有重要作用。
白樺BpGT14基因和啟動子的克隆及功能分析 內容簡介
曾凡鎖、詹亞光著的《白樺BpGT14基因和啟動子的克隆及功能分析》究旨在明確糖基轉移酶BpGT14基因在白樺生長發育中的功能，克隆了白樺GT14基因全長序列和啟動子區，分析了其結構特征和表達模式，獲得了pRNAi-GG-BpGT14轉基因白樺。結果顯示：RNAi白樺莖橫截面中木質部面積增加了23%～47%，而韌皮部面積比例無明顯變化；木質部中導管面積為對照的1.82～2.16倍，韌皮纖維面積比例無明顯變化。干擾白樺纖維素含量無明顯變化，半纖維素、果膠質含量顯著降低，相比野生型分別減少了約40%和10%，說明BpGT14在植物半纖維素、果膠質等細胞壁多糖合成中具有重要作用。本書對白樺和其他木本植物的遺傳改良及功能基因的研究具有很好的借鑒意義。本書可供從事林木遺傳改良和逆境分了生物學研究及教學的人員參考，也可用作林術遺傳育種學相關專業研究生的學習參考書。
白樺BpGT14基因和啟動子的克隆及功能分析 目錄
前言
1 緒論
1.1 糖基轉移酶簡介
1.2 糖基轉移酶功能
1.2.1 植物防御反應
1.2.2 植物次生代謝產物修飾
1.2.3 植物次生細胞壁合成
1.2.4 植物激素平衡
1.3 糖基轉移酶14研究進展
1.3.1 GT14／DUF266(GT14-like)蛋白的鑒定
1.3.2 GT14和GT14-like基因系統發育的關系
1.3.3 GT14和GT14-like基因的進化
1.3.4 GT14和GT14-like基因的表達模式分析
1.3.5 GT14蛋白質三維結構及亞細胞定位
1.4 植物啟動子研究
1.4.1 啟動子結構及功能
1.4.2 啟動子克隆方法
1.4.3 啟動子的應用
1.5 轉錄因了研究
1.5.1 轉錄因子簡介
1.5.2 轉錄因子分類及功能
1.6 轉錄因子與啟動了互作研究方法
1.6.1 酵母單雜交
1.6.2 免疫共沉淀
1.7 植物DNA甲基化的作用方式及功能
1.7.1 植物DNA甲基化的作用方式
1.7.2 植物DNA甲基化的功能
1.8 木本植物小同發育階段DNA甲基化水平和模式的變化
1.8.1 DNA甲基化與木本植物的年齡
1.8.2 DNA甲基化與木本植物的花期、休眠和育性
1.9 木本植物離體繁殖過程中的DNA甲基化模式重建
1.9.1 組織培養植株與野生植株的DNA甲基化水平和模式差異
1.9.2 再生過程、體胚發生、繼代培養及外植體狀態與DNA甲基化
1.10 植物DNA甲基轉移酶及與甲基化有關的蛋白質
1.10.1 METI家族
1.10.2 CMT家族
1.10.3 DRM家族
1.11 白樺的生物學特性
1.12 研究意義
2 白樺BpGT14基因及其啟動子的克隆及生物信息學分析
2.1 實驗材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 菌株及載體
2.1.3 數據分析
2.2 實驗方法
2.2.1 白樺BpGT14基因生物信息學分析
2.2.2 白樺莖段懸浮細胞非生物脅迫處理
2.2.3 轉錄表達定量分析
2.2.4 數據處理
2.2.5 白樺BpGT14啟動子的克隆
2.2.6 啟動子生物信息學分析
2.2.7 植物表達載體的構建
2.2.8 植物表達載體農桿菌的轉化
2.2.9 BpGT14啟動子在煙草中的表達活性
2.2.10 啟動子在白樺細胞中的表達活性
2.3 結果與分析
2.3.1 白樺BpGT14基因的生物信息學分析
2.3.2 白樺BpGT14基因時空特異性表達分析
2.3.3 白樺莖段懸浮細胞BpGT14基因非生物脅迫下表達分析
2.3.4 白樺BpGT14基因啟動子克隆
2.3.5 白樺BpGT14基因啟動子序列元件分析
2.3.6 啟動子pXGUS-P及pXGFP-P植物表達載體的構建及鑒定
2.3.7 植物表達載體轉化農桿菌的鑒定
2.3.8 非生物脅迫下啟動子在煙草中的表達活性
2.3.9 啟動子在白樺細胞中的表達活性
2.4 討論
2.5 本章小結
3 酵母單雜交篩選啟動子區及MYBPLANT元件結合候選蛋白
3.1 實驗材料
3.2 實驗方法
3.2.1 啟動子1156bp片段PCR擴增
3.2.2 誘餌載體pAbAi線性化及與啟動子片段的連接
3.2.3 MYBPLANT元件的構建
3.2.4 酵母感受態的制備
3.2.5 重組誘餌載體pAbAi轉化酵母感受態細胞
3.2.6 誘餌酵母的鑒定
3.2.7 報告基因在誘餌酵母中本底表達水平的測定
3.2.8 白樺文庫cDNA的合成
3.2.9 酵母單雜交文庫的構建及篩選
3.2.10 陽性克隆菌株的鑒定
3.2.11 陽性克隆cDNA插入片段的生物信息學分析
3.2.12 啟動子候選互作蛋白BpARF2基因的非生物脅迫響應
3.3 結果與分析
3.3.1 重組誘餌載體的構建
3.3.2 重組誘餌質粒轉化酵母感受態細胞
3.3.3 報告基因在誘餌酵母中本底表達水平的測定
3.3.4 白樺文庫cDNA的合成
3.3.5 酵母單雜交文庫的構建及篩選
3.3.6 陽性克隆cDNA插入片段的生物信息學分析
3.3.7 啟動子互作候選蛋白BpARF2基因非生物脅迫響應
3.3.8 MYB-pAbAi重組誘餌載體的構建
3.3.9 MYBPLANT元件結合候選蛋白的篩選
3.4 討論
3.5 本章小結
4 啟動子MYBPLANT元件結合候選蛋白的鑒定
4.1 實驗材料
4.2 實驗方法
4.2.1 候選蛋白互作強弱初步鑒定
4.2.2 白樺BpGT14基因的克隆
4.2.3 白樺BpGT14基因生物信息學分析
4.2.4 候選蛋白互作強弱初步鑒定
4.2.5 三次重復元件pCXGus植物表達載體構建
4.2.6 三親雜交及農桿菌的遺傳轉化
4.2.7 煙草中GUS基因表達水平鑒定
4.2.8 非生物脅迫下白樺BpGT14基因表達水平鑒定
4.3 結果與分析
4.3.1 候選蛋白互作強弱鑒定
4.3.2 白樺BpGT14基因的克隆
4.3.3 白樺BpGT14基因生物信息學分析
4.3.4 白樺BpGT14基因植物表達載體的構建
4.3.5 三次重復元件pCXGus植物表達載體構建
4.3.6 BpAL4蛋白及MYBPLANT元件共轉化分析
4.4 討論
4.5 本章小結
5 白樺BpGT14基因表達載體及RNA干擾載體的構建及遺傳轉化
5.1 實驗材料
5.2 實驗方法
5.2.1 白樺總RNA的提取與cDNA的合成
5.2.2 白樺BpGT14基因pMD18-T載體的構建
5.2.3 白樺BpGT14基因干擾載體的構建
5.2.4 三親雜交法轉化根癌農桿菌
5.2.5 根癌農桿菌介導的白樺遺傳轉化
5.2.6 轉基因植株的分子鑒定
5.2.7 轉基因白樺組培苗的移栽
5.2.8 石蠟切片
5.2.9 轉基因白樺木質素、纖維素、半纖維素和果膠的測定
5.3 結果與分析
5.3.1 白樺BpGT14基因PMD18-T載體的構建
5.3.2 白樺BpGT14基因干擾載體的構建
5.3.3 三親雜交
5.3.4 轉基因植株的獲得
5.3.5 轉基因植株的分子鑒定
5.3.6 RNAi白樺莖段結構分析
5.3.7 BpGT14-RNAi轉基因白樺細胞壁成分分析
5.4 討論
5.5 本章小結
6 白樺微繁過程中BpGT14表達及DNA甲基化的變異機制
6.1 實驗材料
6.1.1 植物材料
6.1.2 實驗器材
6.2 實驗方法
6.2.1 培養基及培養條件
6.2.2 外植體選取與消毒
6.2.3 腋芽增殖的繼代培養
6.2.4 愈傷組織的誘導及分化
6.2.5 再生植株生根及移栽
6.2.6 酶液制取
6.2.7 保護酶活性的測定
6.2.8 木質素測定
6.2.9 丙二醛含量測定
6.2.10 可溶性糖含量測定
6.2.11 可溶性蛋白含量測定
6.2.12 白樺DNA提取及亞硫酸鹽處理
6.2.13 BpGT14及甲基轉移酶基因表達量分析
6.2.14 數據處理
6.3 結果與分析
6.3.1 愈傷組織織的誘導和分化
6.3.2 甲基轉移酶基因的表達
6.3.3 甲基轉移酶的活性分析
6.3.4 5-CCGG的胞嘧啶甲基化水平
6.3.5 再生不同階段細胞氧化還原水平
6.3.6 再生不同階段變異的主成分分析
6.3.7 愈傷再生不同發育階段BpGT14基因表達分析
6.3.8 白樺BpGT14基因內含子生物信息學分析
6.3.9 愈傷再生不同發育階段BpGT14基因啟動子及編碼區DNA甲基化變異
6.4 討論
6.4.1 甲基轉移酶基因在再生過程中的表達
6.4.2 白樺組織培養中DNA甲基化的變化
6.4.3 微繁殖過程中的生理變化
6.4.4 不同發育階段的表觀遺傳參數和生理指標的變化
6.4.5 愈傷再生不同發育階段BpGT14基因啟動子及編碼區DNA甲基化變異
6.5 本章小結
7 展望
參考文獻
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