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白樺BpGT14基因和啟動(dòng)子的克隆及功能分析 版權(quán)信息
- ISBN：9787030544377
- 條形碼：9787030544377 ; 978-7-03-054437-7
- 裝幀：一般膠版紙
- 冊(cè)數(shù)：暫無(wú)
- 重量：暫無(wú)
- 所屬分類：>
白樺BpGT14基因和啟動(dòng)子的克隆及功能分析 本書特色
本研究旨在明確糖基轉(zhuǎn)移酶BpGT14基因在白樺生長(zhǎng)發(fā)育中的功能，克隆了白樺GT14基因全長(zhǎng)序列和啟動(dòng)子區(qū)，分析了其結(jié)構(gòu)特征和表達(dá)模式，獲得了pRNAi-GG-BpGT14轉(zhuǎn)基因白樺。結(jié)果顯示：RNAi白樺莖橫截面中木質(zhì)部面積增加了23%～47%，而韌皮部面積比例無(wú)明顯變化；木質(zhì)部中導(dǎo)管面積為對(duì)照的1.82～2.16倍，韌皮纖維面積比例無(wú)明顯變化。干擾白樺纖維素含量無(wú)明顯變化，半纖維素、果膠質(zhì)含量顯著降低，相比野生型分別減少了約40%和10%，說(shuō)明BpGT14在植物半纖維素、果膠質(zhì)等細(xì)胞壁多糖合成中具有重要作用。
白樺BpGT14基因和啟動(dòng)子的克隆及功能分析 內(nèi)容簡(jiǎn)介
曾凡鎖、詹亞光著的《白樺BpGT14基因和啟動(dòng)子的克隆及功能分析》究旨在明確糖基轉(zhuǎn)移酶BpGT14基因在白樺生長(zhǎng)發(fā)育中的功能，克隆了白樺GT14基因全長(zhǎng)序列和啟動(dòng)子區(qū)，分析了其結(jié)構(gòu)特征和表達(dá)模式，獲得了pRNAi-GG-BpGT14轉(zhuǎn)基因白樺。結(jié)果顯示：RNAi白樺莖橫截面中木質(zhì)部面積增加了23%～47%，而韌皮部面積比例無(wú)明顯變化；木質(zhì)部中導(dǎo)管面積為對(duì)照的1.82～2.16倍，韌皮纖維面積比例無(wú)明顯變化。干擾白樺纖維素含量無(wú)明顯變化，半纖維素、果膠質(zhì)含量顯著降低，相比野生型分別減少了約40%和10%，說(shuō)明BpGT14在植物半纖維素、果膠質(zhì)等細(xì)胞壁多糖合成中具有重要作用。本書對(duì)白樺和其他木本植物的遺傳改良及功能基因的研究具有很好的借鑒意義。本書可供從事林木遺傳改良和逆境分了生物學(xué)研究及教學(xué)的人員參考，也可用作林術(shù)遺傳育種學(xué)相關(guān)專業(yè)研究生的學(xué)習(xí)參考書。
白樺BpGT14基因和啟動(dòng)子的克隆及功能分析 目錄
前言
1 緒論
1.1 糖基轉(zhuǎn)移酶簡(jiǎn)介
1.2 糖基轉(zhuǎn)移酶功能
1.2.1 植物防御反應(yīng)
1.2.2 植物次生代謝產(chǎn)物修飾
1.2.3 植物次生細(xì)胞壁合成
1.2.4 植物激素平衡
1.3 糖基轉(zhuǎn)移酶14研究進(jìn)展
1.3.1 GT14／DUF266(GT14-like)蛋白的鑒定
1.3.2 GT14和GT14-like基因系統(tǒng)發(fā)育的關(guān)系
1.3.3 GT14和GT14-like基因的進(jìn)化
1.3.4 GT14和GT14-like基因的表達(dá)模式分析
1.3.5 GT14蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)及亞細(xì)胞定位
1.4 植物啟動(dòng)子研究
1.4.1 啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)及功能
1.4.2 啟動(dòng)子克隆方法
1.4.3 啟動(dòng)子的應(yīng)用
1.5 轉(zhuǎn)錄因了研究
1.5.1 轉(zhuǎn)錄因子簡(jiǎn)介
1.5.2 轉(zhuǎn)錄因子分類及功能
1.6 轉(zhuǎn)錄因子與啟動(dòng)了互作研究方法
1.6.1 酵母單雜交
1.6.2 免疫共沉淀
1.7 植物DNA甲基化的作用方式及功能
1.7.1 植物DNA甲基化的作用方式
1.7.2 植物DNA甲基化的功能
1.8 木本植物小同發(fā)育階段DNA甲基化水平和模式的變化
1.8.1 DNA甲基化與木本植物的年齡
1.8.2 DNA甲基化與木本植物的花期、休眠和育性
1.9 木本植物離體繁殖過(guò)程中的DNA甲基化模式重建
1.9.1 組織培養(yǎng)植株與野生植株的DNA甲基化水平和模式差異
1.9.2 再生過(guò)程、體胚發(fā)生、繼代培養(yǎng)及外植體狀態(tài)與DNA甲基化
1.10 植物DNA甲基轉(zhuǎn)移酶及與甲基化有關(guān)的蛋白質(zhì)
1.10.1 METI家族
1.10.2 CMT家族
1.10.3 DRM家族
1.11 白樺的生物學(xué)特性
1.12 研究意義
2 白樺BpGT14基因及其啟動(dòng)子的克隆及生物信息學(xué)分析
2.1 實(shí)驗(yàn)材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 菌株及載體
2.1.3 數(shù)據(jù)分析
2.2 實(shí)驗(yàn)方法
2.2.1 白樺BpGT14基因生物信息學(xué)分析
2.2.2 白樺莖段懸浮細(xì)胞非生物脅迫處理
2.2.3 轉(zhuǎn)錄表達(dá)定量分析
2.2.4 數(shù)據(jù)處理
2.2.5 白樺BpGT14啟動(dòng)子的克隆
2.2.6 啟動(dòng)子生物信息學(xué)分析
2.2.7 植物表達(dá)載體的構(gòu)建
2.2.8 植物表達(dá)載體農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化
2.2.9 BpGT14啟動(dòng)子在煙草中的表達(dá)活性
2.2.10 啟動(dòng)子在白樺細(xì)胞中的表達(dá)活性
2.3 結(jié)果與分析
2.3.1 白樺BpGT14基因的生物信息學(xué)分析
2.3.2 白樺BpGT14基因時(shí)空特異性表達(dá)分析
2.3.3 白樺莖段懸浮細(xì)胞BpGT14基因非生物脅迫下表達(dá)分析
2.3.4 白樺BpGT14基因啟動(dòng)子克隆
2.3.5 白樺BpGT14基因啟動(dòng)子序列元件分析
2.3.6 啟動(dòng)子pXGUS-P及pXGFP-P植物表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定
2.3.7 植物表達(dá)載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌的鑒定
2.3.8 非生物脅迫下啟動(dòng)子在煙草中的表達(dá)活性
2.3.9 啟動(dòng)子在白樺細(xì)胞中的表達(dá)活性
2.4 討論
2.5 本章小結(jié)
3 酵母單雜交篩選啟動(dòng)子區(qū)及MYBPLANT元件結(jié)合候選蛋白
3.1 實(shí)驗(yàn)材料
3.2 實(shí)驗(yàn)方法
3.2.1 啟動(dòng)子1156bp片段PCR擴(kuò)增
3.2.2 誘餌載體pAbAi線性化及與啟動(dòng)子片段的連接
3.2.3 MYBPLANT元件的構(gòu)建
3.2.4 酵母感受態(tài)的制備
3.2.5 重組誘餌載體pAbAi轉(zhuǎn)化酵母感受態(tài)細(xì)胞
3.2.6 誘餌酵母的鑒定
3.2.7 報(bào)告基因在誘餌酵母中本底表達(dá)水平的測(cè)定
3.2.8 白樺文庫(kù)cDNA的合成
3.2.9 酵母單雜交文庫(kù)的構(gòu)建及篩選
3.2.10 陽(yáng)性克隆菌株的鑒定
3.2.11 陽(yáng)性克隆cDNA插入片段的生物信息學(xué)分析
3.2.12 啟動(dòng)子候選互作蛋白BpARF2基因的非生物脅迫響應(yīng)
3.3 結(jié)果與分析
3.3.1 重組誘餌載體的構(gòu)建
3.3.2 重組誘餌質(zhì)粒轉(zhuǎn)化酵母感受態(tài)細(xì)胞
3.3.3 報(bào)告基因在誘餌酵母中本底表達(dá)水平的測(cè)定
3.3.4 白樺文庫(kù)cDNA的合成
3.3.5 酵母單雜交文庫(kù)的構(gòu)建及篩選
3.3.6 陽(yáng)性克隆cDNA插入片段的生物信息學(xué)分析
3.3.7 啟動(dòng)子互作候選蛋白BpARF2基因非生物脅迫響應(yīng)
3.3.8 MYB-pAbAi重組誘餌載體的構(gòu)建
3.3.9 MYBPLANT元件結(jié)合候選蛋白的篩選
3.4 討論
3.5 本章小結(jié)
4 啟動(dòng)子MYBPLANT元件結(jié)合候選蛋白的鑒定
4.1 實(shí)驗(yàn)材料
4.2 實(shí)驗(yàn)方法
4.2.1 候選蛋白互作強(qiáng)弱初步鑒定
4.2.2 白樺BpGT14基因的克隆
4.2.3 白樺BpGT14基因生物信息學(xué)分析
4.2.4 候選蛋白互作強(qiáng)弱初步鑒定
4.2.5 三次重復(fù)元件pCXGus植物表達(dá)載體構(gòu)建
4.2.6 三親雜交及農(nóng)桿菌的遺傳轉(zhuǎn)化
4.2.7 煙草中GUS基因表達(dá)水平鑒定
4.2.8 非生物脅迫下白樺BpGT14基因表達(dá)水平鑒定
4.3 結(jié)果與分析
4.3.1 候選蛋白互作強(qiáng)弱鑒定
4.3.2 白樺BpGT14基因的克隆
4.3.3 白樺BpGT14基因生物信息學(xué)分析
4.3.4 白樺BpGT14基因植物表達(dá)載體的構(gòu)建
4.3.5 三次重復(fù)元件pCXGus植物表達(dá)載體構(gòu)建
4.3.6 BpAL4蛋白及MYBPLANT元件共轉(zhuǎn)化分析
4.4 討論
4.5 本章小結(jié)
5 白樺BpGT14基因表達(dá)載體及RNA干擾載體的構(gòu)建及遺傳轉(zhuǎn)化
5.1 實(shí)驗(yàn)材料
5.2 實(shí)驗(yàn)方法
5.2.1 白樺總RNA的提取與cDNA的合成
5.2.2 白樺BpGT14基因pMD18-T載體的構(gòu)建
5.2.3 白樺BpGT14基因干擾載體的構(gòu)建
5.2.4 三親雜交法轉(zhuǎn)化根癌農(nóng)桿菌
5.2.5 根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的白樺遺傳轉(zhuǎn)化
5.2.6 轉(zhuǎn)基因植株的分子鑒定
5.2.7 轉(zhuǎn)基因白樺組培苗的移栽
5.2.8 石蠟切片
5.2.9 轉(zhuǎn)基因白樺木質(zhì)素、纖維素、半纖維素和果膠的測(cè)定
5.3 結(jié)果與分析
5.3.1 白樺BpGT14基因PMD18-T載體的構(gòu)建
5.3.2 白樺BpGT14基因干擾載體的構(gòu)建
5.3.3 三親雜交
5.3.4 轉(zhuǎn)基因植株的獲得
5.3.5 轉(zhuǎn)基因植株的分子鑒定
5.3.6 RNAi白樺莖段結(jié)構(gòu)分析
5.3.7 BpGT14-RNAi轉(zhuǎn)基因白樺細(xì)胞壁成分分析
5.4 討論
5.5 本章小結(jié)
6 白樺微繁過(guò)程中BpGT14表達(dá)及DNA甲基化的變異機(jī)制
6.1 實(shí)驗(yàn)材料
6.1.1 植物材料
6.1.2 實(shí)驗(yàn)器材
6.2 實(shí)驗(yàn)方法
6.2.1 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件
6.2.2 外植體選取與消毒
6.2.3 腋芽增殖的繼代培養(yǎng)
6.2.4 愈傷組織的誘導(dǎo)及分化
6.2.5 再生植株生根及移栽
6.2.6 酶液制取
6.2.7 保護(hù)酶活性的測(cè)定
6.2.8 木質(zhì)素測(cè)定
6.2.9 丙二醛含量測(cè)定
6.2.10 可溶性糖含量測(cè)定
6.2.11 可溶性蛋白含量測(cè)定
6.2.12 白樺DNA提取及亞硫酸鹽處理
6.2.13 BpGT14及甲基轉(zhuǎn)移酶基因表達(dá)量分析
6.2.14 數(shù)據(jù)處理
6.3 結(jié)果與分析
6.3.1 愈傷組織織的誘導(dǎo)和分化
6.3.2 甲基轉(zhuǎn)移酶基因的表達(dá)
6.3.3 甲基轉(zhuǎn)移酶的活性分析
6.3.4 5-CCGG的胞嘧啶甲基化水平
6.3.5 再生不同階段細(xì)胞氧化還原水平
6.3.6 再生不同階段變異的主成分分析
6.3.7 愈傷再生不同發(fā)育階段BpGT14基因表達(dá)分析
6.3.8 白樺BpGT14基因內(nèi)含子生物信息學(xué)分析
6.3.9 愈傷再生不同發(fā)育階段BpGT14基因啟動(dòng)子及編碼區(qū)DNA甲基化變異
6.4 討論
6.4.1 甲基轉(zhuǎn)移酶基因在再生過(guò)程中的表達(dá)
6.4.2 白樺組織培養(yǎng)中DNA甲基化的變化
6.4.3 微繁殖過(guò)程中的生理變化
6.4.4 不同發(fā)育階段的表觀遺傳參數(shù)和生理指標(biāo)的變化
6.4.5 愈傷再生不同發(fā)育階段BpGT14基因啟動(dòng)子及編碼區(qū)DNA甲基化變異
6.5 本章小結(jié)
7 展望
參考文獻(xiàn)
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