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包郵 植保生物技術(shù)(第二版)

作者：易圖永
出版社：科學(xué)出版社出版時間：2023-03-01
開本： 其他 頁數(shù)： 200
中 圖 價:¥42.3(8.5折) 定價  ¥49.8 登錄后可看到會員價
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植保生物技術(shù)(第二版) 版權(quán)信息

植保生物技術(shù)(第二版) 內(nèi)容簡介

本書共分6章，分別介紹植物保護(hù)與生物技術(shù)的關(guān)系；基因工程技術(shù)及其在植物保護(hù)上的應(yīng)用：植物組織培養(yǎng)技術(shù)及其在無病毒苗繁育和抗病試管苗培育上的應(yīng)用：微生物發(fā)酵技術(shù)及其在微生物農(nóng)藥創(chuàng)制上的應(yīng)用；分子檢測技術(shù)及其在植物病、蟲、草害檢疫上的應(yīng)用；以及組學(xué)/測序技術(shù)在植物保護(hù)上的應(yīng)用。

植保生物技術(shù)(第二版) 目錄

目錄
序
前言
**章　植物保護(hù)與生物技術(shù)　1
**節(jié)　植物保護(hù)學(xué)科的發(fā)現(xiàn)對生命科學(xué)的影響　1
一、發(fā)現(xiàn)煙草花葉病毒—病毒域的首*成員　2
二、發(fā)現(xiàn)馬鈴薯紡錘形塊莖類病毒—類病毒域的首*成員　3
第二節(jié)　植物保護(hù)學(xué)科對生物技術(shù)的推動作用　4
一、對轉(zhuǎn)基因育種的推動作用　4
二、對植物細(xì)胞工程的推動作用　6
三、對發(fā)酵工程的推動作用　6
第三節(jié)　生物技術(shù)在植物保護(hù)上的應(yīng)用概況　10
一、組織培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用概況　10
二、轉(zhuǎn)基因育種技術(shù)的應(yīng)用概況　10
三、發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用概況　11
四、分子生物學(xué)技術(shù)的應(yīng)用概況　12
第二章　植物組織培養(yǎng)技術(shù)在植物保護(hù)上的應(yīng)用　13
**節(jié)　植物組織培養(yǎng)的基本原理、發(fā)展簡史和一般程序　13
一、植物組織培養(yǎng)的基本原理及發(fā)展簡史　13
二、植物組織培養(yǎng)的一般程序　13
第二節(jié)　植物抗病細(xì)胞突變體篩選　15
一、植物抗病細(xì)胞突變體篩選的基本原理　15
二、植物抗病細(xì)胞突變體篩選的一般程序　16
三、植物抗病細(xì)胞突變體篩選的實(shí)例　18
第三節(jié)　抗病蟲細(xì)胞工程育種　23
一、抗病蟲花培單倍體育種　23
二、抗病蟲體細(xì)胞雜交育種　26
第四節(jié)　莖尖脫毒　31
一、莖尖脫毒的基本原理　31
二、莖尖脫毒的一般程序　32
三、莖尖脫毒的實(shí)例　35
第三章　基因工程技術(shù)在植物保護(hù)上的應(yīng)用　46
**節(jié)　基因工程的類別及技術(shù)原理　46
第二節(jié)　目的基因　47
一、目的基因的來源和種類　47
二、目的基因的獲取　55
三、獲取目的基因的實(shí)例　57
第三節(jié)　植物轉(zhuǎn)化技術(shù)　58
一、重組DNA植物轉(zhuǎn)化載體構(gòu)建　59
二、用重組的植物轉(zhuǎn)化載體轉(zhuǎn)化根癌農(nóng)桿菌　60
三、用含轉(zhuǎn)化載體的根癌農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化植物　60
四、檢驗(yàn)轉(zhuǎn)基因植株及其后代　61
第四節(jié)　基因編輯技術(shù)在植物保護(hù)上的應(yīng)用　62
一、基因編輯技術(shù)在病害防治中的應(yīng)用　62
二、基因編輯技術(shù)在雜草防治及害蟲防治中的應(yīng)用　63
第四章　微生物發(fā)酵技術(shù)在植物保護(hù)上的應(yīng)用　65
**節(jié)　發(fā)酵技術(shù)的基本知識　65
一、發(fā)酵技術(shù)的內(nèi)容　65
二、發(fā)酵技術(shù)的特點(diǎn)及應(yīng)用　66
三、發(fā)酵設(shè)備　68
第二節(jié)　微生物發(fā)酵過程　69
一、基本過程　70
二、發(fā)酵的操作方式　72
三、發(fā)酵工藝控制　74
四、發(fā)酵過程中的檢測　77
第三節(jié)　殺蟲微生物的發(fā)酵生產(chǎn)　78
一、蘇云金芽孢桿菌的選育和發(fā)酵生產(chǎn)　78
二、核型多角體昆蟲病毒的鑒定、生產(chǎn)和加工技術(shù)　80
三、白僵菌和綠僵菌的選育和發(fā)酵生產(chǎn)　81
第四節(jié)　殺菌微生物的發(fā)酵生產(chǎn)　83
一、微生物抑制病原菌的作用機(jī)制　83
二、木霉菌的選育和發(fā)酵生產(chǎn)　85
三、抗病芽孢桿菌的選育和發(fā)酵生產(chǎn)　87
第五節(jié)　除草微生物的選育和發(fā)酵生產(chǎn)　88
一、真菌除草劑　89
二、細(xì)菌除草劑　91
三、放線菌除草劑　91
四、病毒除草劑　92
五、微生物除草劑的作用機(jī)制　92
六、微生物除草劑存在的問題和措施　96
第六節(jié)　產(chǎn)抗生素微生物的發(fā)酵生產(chǎn)　97
一、農(nóng)用抗生素的類別　98
二、產(chǎn)抗生素微生物的篩選過程　98
三、產(chǎn)殺蟲抗生素鏈霉菌的選育和發(fā)酵生產(chǎn)　99
四、產(chǎn)殺菌抗生素鏈霉菌的選育和發(fā)酵生產(chǎn)　103
第五章　分子檢測技術(shù)在植物保護(hù)上的應(yīng)用　105
**節(jié)　蛋白質(zhì)檢測技術(shù)　106
一、酶聯(lián)免疫吸附測定　106
二、免疫印跡法　110
第二節(jié)　核酸分子雜交檢測技術(shù)　111
一、原理　111
二、核酸分子雜交中的探針　111
三、核酸分子的雜交方法　115
四、影響核酸分子雜交的因素　121
第三節(jié)　PCR技術(shù)　121
一、PCR的原理　122
二、PCR反應(yīng)中的主要成分　122
三、PCR反應(yīng)參數(shù)　126
四、PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測　128
五、PCR操作過程　129
六、PCR的特點(diǎn)　130
七、PCR的類型　130
第四節(jié)　實(shí)時熒光PCR技術(shù)　134
一、實(shí)時熒光PCR技術(shù)的原理　135
二、實(shí)時熒光PCR技術(shù)的種類　135
三、實(shí)時熒光PCR技術(shù)的特點(diǎn)　138
第五節(jié)　DNA分子標(biāo)記　138
一、**代分子標(biāo)記　139
二、第二代分子標(biāo)記　141
三、第三代分子標(biāo)記　142
第六節(jié)　生物芯片技術(shù)　142
一、工作原理　143
二、生物芯片的分類　146
第七節(jié)　其他檢驗(yàn)技術(shù)　148
一、連接酶鏈反應(yīng)　148
二、依賴核酸序列擴(kuò)增法　148
三、轉(zhuǎn)錄依賴的擴(kuò)增系統(tǒng)　149
四、Qβ復(fù)制酶反應(yīng)　149
五、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增法　149
六、重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)　150
第八節(jié)　分子檢測技術(shù)在有害生物鑒定中的應(yīng)用　150
一、分子檢測技術(shù)在植物病害診斷中的應(yīng)用　150
二、分子檢測技術(shù)在昆蟲系統(tǒng)學(xué)研究中的應(yīng)用　153
第六章　高通量測序技術(shù)在植物保護(hù)上的應(yīng)用　155
**節(jié)　高通量測序技術(shù)發(fā)展歷史　155
一、**代測序技術(shù)　155
二、第二代測序技術(shù)　157
三、第三代測序技術(shù)　158
第二節(jié)　高通量測序數(shù)據(jù)分析基本概念　160
一、幾種高通量測序常用的應(yīng)用場景　161
二、測序read及序列格式　162
三、其他常見的數(shù)據(jù)格式　164
四、其他相關(guān)專業(yè)術(shù)語　169
第三節(jié)　常見應(yīng)用及生物信息分析流程　171
一、de novo基因組測序及分析　171
二、轉(zhuǎn)錄組測序及分析　178
第四節(jié)　高通量測序在植物病毒檢測中的應(yīng)用與實(shí)例分析　181
一、樣品制備　181
二、文庫構(gòu)建　181
三、數(shù)據(jù)分析流程　182
主要參考文獻(xiàn)　184
展開全部

植保生物技術(shù)(第二版) 節(jié)選

**章|植物保護(hù)與生物技術(shù) 植物保護(hù)學(xué)科是研究植物有害生物的分類鑒定、生物學(xué)特性及其發(fā)生消長規(guī)律，并對其進(jìn)行預(yù)測、預(yù)報(bào)和綜合治理，以保證植物健康生長的一門科學(xué)。它的任務(wù)主要是控制各種農(nóng)林作物和野生植物上的病、蟲、草、鼠害，確保農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、林業(yè)生產(chǎn)及生態(tài)環(huán)境安全。現(xiàn)代植物保護(hù)學(xué)科的總趨勢是朝著微觀、宏觀兩個方向發(fā)展，在宏觀指導(dǎo)下進(jìn)行微觀研究，并將微觀資料進(jìn)行宏觀分析和處理，不斷發(fā)展病蟲治理新理論和新技術(shù)。在宏觀方面，應(yīng)用生態(tài)學(xué)和系統(tǒng)工程學(xué)的原理和方法建立農(nóng)業(yè)生態(tài)系統(tǒng)中病、蟲、草、鼠害監(jiān)控決策體系；在微觀方面，以分子生物學(xué)和基因工程的理論與技術(shù)為基礎(chǔ)對病蟲災(zāi)變機(jī)制進(jìn)行研究和分析，并為決策提供依據(jù)。21世紀(jì)植物保護(hù)學(xué)科的發(fā)展必將為建立有利于提高農(nóng)業(yè)的綜合生產(chǎn)能力、有利于保護(hù)生物多樣性、有利于控制環(huán)境污染和節(jié)約能源的植物保護(hù)技術(shù)提供理論知識和技能，并通過農(nóng)業(yè)生態(tài)系統(tǒng)的有效調(diào)控，提高農(nóng)作物生物災(zāi)害控制工作的系統(tǒng)性、綜合性、科學(xué)性和可持續(xù)性，為農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展和生態(tài)環(huán)境的保護(hù)提供保障。 生物技術(shù)是指人們以現(xiàn)代生命科學(xué)為基礎(chǔ)，結(jié)合其他基礎(chǔ)科學(xué)的科學(xué)原理，采用先進(jìn)的科學(xué)技術(shù)手段，按照預(yù)先的設(shè)計(jì)改造生物體或加工生物原料，為人類生產(chǎn)所需產(chǎn)品或達(dá)到某種目的的技術(shù)方式。生物技術(shù)是對微生物、動植物等多個領(lǐng)域的深入研究，利用新興技術(shù)對物質(zhì)原料進(jìn)行加工，從而為社會服務(wù)提供產(chǎn)品。生物技術(shù)是20世紀(jì)70年代初在分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)等學(xué)科的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一門綜合性的科學(xué)技術(shù)，主要包括轉(zhuǎn)基因育種技術(shù)（基因工程）、組織培養(yǎng)技術(shù)（細(xì)胞工程）、微生物發(fā)酵技術(shù)（發(fā)酵工程）等。現(xiàn)代生物技術(shù)以分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、微生物學(xué)、免疫學(xué)、遺傳學(xué)、生理學(xué)和系統(tǒng)生物學(xué)等學(xué)科為支撐，結(jié)合了化學(xué)、化工、計(jì)算機(jī)和微電子等學(xué)科，從而形成了一門多學(xué)科互相滲透的綜合性學(xué)科。 植保生物技術(shù)是以上這兩門學(xué)科交叉而形成的一門新學(xué)科。 **節(jié)植物保護(hù)學(xué)科的發(fā)現(xiàn)對生命科學(xué)的影響 *先發(fā)現(xiàn)的植物病毒-煙草花葉病毒（Tobaccomosaicvirus，TMV）后來成為了生命科學(xué)研究的模式工具。此外，植物病理學(xué)家還發(fā)現(xiàn)了可轉(zhuǎn)移到植物基因組中，隨同植物DNA—同復(fù)制和表達(dá)的轉(zhuǎn)移DNA（T-DNA）和五大激素之一的赤霉素。 一、發(fā)現(xiàn)煙草花葉病毒——病毒域的首*成員 1898年，荷蘭代爾夫特理工大學(xué)的微生物學(xué)教授貝葉林克（Beijerinck）報(bào)告了煙草花葉病的病原是一種可通過細(xì)菌過濾器的傳染性“活”液，能在活體內(nèi)“繁殖”，因而不是毒素，也不同于小型微生物，是一類全新的分子生物，從而改寫了生物的定義，并實(shí)質(zhì)上促進(jìn)了病毒學(xué)的誕生。1993年在蘇格蘭召開了一次國際病毒學(xué)大會，正式將1898年定為病毒學(xué)誕生年。在此之前，曾有其他研究者也做了大量工作，其中以邁爾（Mayer）和伊萬諾夫斯基（Ivanovski）的研究*為有名。 （一）邁爾發(fā)現(xiàn)煙草花葉病有傳染性 19世紀(jì)末，煙草在荷蘭己大面積種植，但煙草的生產(chǎn)受到花葉病的嚴(yán)重阻礙，甚至有些土地因?yàn)榛ㄈ~病而不能繼續(xù)種煙草。邁爾是荷蘭瓦格寧根農(nóng)業(yè)試驗(yàn)站站長，他首先分析了病株和健株的化學(xué)組成，分析了病株周圍的土壤和線蟲及光、溫、肥，嘗試了鑒定病原，結(jié)果排除了營養(yǎng)因素、動物因素和環(huán)境因素。后來，他將患有花葉病的煙草植株的壓榨液用毛細(xì)管吸取后接種到室外生長的無病煙草植株的葉和莖上，幾周后觀察到后者發(fā)病，從而首次證明了煙草花葉病有傳染性。1886年他發(fā)表了研究結(jié)果，將此病命名為“煙草花葉病”，并詳細(xì)描述了癥狀。 接下來，邁爾嘗試遵循科赫法則來鑒定病原。科赫法則有4條：一是只要有某種疾病發(fā)生就必有某種微生物存在；二是能從生病的生物體分離到這種微生物并得到純培養(yǎng)物；三是用分離純化的微生物接種到同種生物的無病個體上能重現(xiàn)疾病的癥狀；四是從接種后生病的生物體再次分離到同種微生物。當(dāng)時，要證明一種疾病的病原，這4條都必須滿足。雖然邁爾成功地從研磨液中分離和培養(yǎng)了微生物，但分離到的微生物沒有一個在接種健株后可重現(xiàn)病害癥狀。他又試著用大量的己知細(xì)菌和動物糞便、變質(zhì)奶酪、腐敗的豆類來接種，結(jié)果無一成功。對他來說，病原只剩兩個可能：一是酶；二是某種微生物。他覺得病原是酶的說法是荒謬的，因?yàn)槊覆荒茏晕覐?fù)制。然后他用雙層濾紙將病株研磨液過濾，再接種到健株上，發(fā)現(xiàn)過濾液可傳病，排除了真菌因素。而過濾液經(jīng)多次過濾得到的“清液”不能傳病，因此他認(rèn)為病原是一種細(xì)菌。盡管邁爾對病原做出的結(jié)論是錯誤的，但他的名字應(yīng)該留在病毒這一分子生命發(fā)現(xiàn)史的豐碑上，因?yàn)樗l(fā)現(xiàn)了煙草花葉病有傳染性。邁爾活到了1942年，這使他有機(jī)會看到了病毒學(xué)現(xiàn)代理論發(fā)展，包括1935年斯坦尼（Staney）對煙草花葉病毒的提純。邁爾的發(fā)現(xiàn)及他研究病原的方法給后來伊萬諾夫斯基和貝葉林克的研究以啟示。 （二）伊萬諾夫斯基發(fā)現(xiàn)煙草花葉病的病原可通過細(xì)菌過濾器 伊萬諾夫斯基是俄羅斯植物病理學(xué)家，他于1892年在圣彼得堡向俄羅斯科學(xué)院提交了簡短報(bào)告，對邁爾的煙草花葉病病原可通過雙層濾紙的發(fā)現(xiàn)表示懷疑。他用張伯倫（Chamberland）氏濾菌器（可*終阻止細(xì)菌的過濾器）做了大量試驗(yàn)，得到的結(jié)果讓他驚訝不己一過濾液始終可以傳病。他一開始懷疑是不是過濾器有問題，通過對過濾器進(jìn)行檢查，發(fā)現(xiàn)過濾器沒有問題，排除了細(xì)菌病原。于是他得出了煙草花葉病是由細(xì)菌分泌的毒素引起或者是由一種可通過細(xì)菌過濾器的細(xì)菌引起的結(jié)論。他說：“根據(jù)當(dāng)今流行的觀點(diǎn)，對我來說，假設(shè)細(xì)菌分泌且溶解在濾液中的毒素引起花葉病，是*簡單不過的解釋。但是還可以有一種同等可接受的解釋，即煙草植株上的細(xì)菌透過了細(xì)菌過濾器的孔口，即使每次試驗(yàn)我都檢查了過濾器，并確認(rèn)過濾器沒有漏洞和缺口”。 伊萬諾夫斯基于1903年發(fā)表了關(guān)于煙草花葉病的*終報(bào)告，詳細(xì)報(bào)告了對病組織細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的兩類內(nèi)含體的顯微鏡觀察，以及在培養(yǎng)病原的嘗試上所做的大量無效勞動。盡管貝葉林克己經(jīng)在1898年發(fā)表了病原病毒說的論文，但受當(dāng)時盛行的巴斯德細(xì)菌病原說影響，伊萬諾夫斯基的*終結(jié)論是煙草花葉病的病原是一種不可培養(yǎng)的細(xì)菌，十分遺憾，他與病毒的發(fā)現(xiàn)失之交臂。 （三）貝葉林克發(fā)現(xiàn)煙草花葉病的病原為傳染性“活”液并命名為“病毒” 在邁爾研究煙草花葉病毒時，貝葉林克也在荷蘭瓦格寧根工作。1885年邁爾給貝葉林克看了他的試驗(yàn)結(jié)果，但貝葉林克在尋找引致花葉病的微生物方面也無能為力。貝葉林克接著轉(zhuǎn)向研究土壤細(xì)菌，1887年發(fā)現(xiàn)了根瘤細(xì)菌，接著他又繼續(xù)研究煙草花葉病，他試著改用燒結(jié)石過濾器來過濾，結(jié)果過濾液仍有傳染性；他試著尋找其中的微生物，不僅做了好氧菌的分離，也做了厭氧菌的分離，結(jié)果表明過濾液是無菌的；他又用一滴病株榨取液接種健株，再取接種后發(fā)病的植株榨取液接種新的健株，經(jīng)多次循環(huán)后，發(fā)現(xiàn)這一滴病株榨取液可傳染無數(shù)植株。由此他猜想病原在病株中自制了它自己，是一種傳染性“活”液。為了證明病原不是一種細(xì)菌，他做了一個瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)，讓病株榨取液在較高濃度的瓊脂膠平板上擴(kuò)散，結(jié)果致病因子在10天內(nèi)擴(kuò)散了至少2mm，說明病原不是細(xì)菌，而是一種液體或是可溶性的物質(zhì)。他還發(fā)現(xiàn)病原在3個月的試驗(yàn)中很穩(wěn)定，提取物的致病力既沒有降低，也沒有增加，進(jìn)一步證明了其不是細(xì)菌；病原在葉組織干燥后仍然是活的，侵染強(qiáng)度不減；提取液加熱到90°C可使病原失活。1898年，貝葉林克發(fā)表了著名的題為“Ueber ein contagium vivum fluidum als Ursache der Fleckenkrankheit der Tabaksblatter”（“Concerning a Contagium Vivum Fluidum as a Cause of the Spot Disease of Tobacco Leaves”）的論文，在這篇論文中，他將病原稱為“virus”（病毒）。病毒學(xué)由此誕生。 二、發(fā)現(xiàn)馬鈴薯紡錘形塊莖類病毒——類病毒域的首*成員 1971年美國植物病理學(xué)家迪納（Diener）報(bào)告，將患有馬鈴薯紡錘形塊莖病的植株通過多種化學(xué)方法提純，發(fā)現(xiàn)了一種比病毒還小的病原生物，這種病原生物沒有蛋白質(zhì)外殼，僅含有一個分子量很小的環(huán)狀RNA。迪納將其稱為類病毒（viroid）。從此宣告了一種新分子生物的誕生。 1971年前盛行的科學(xué)教義是一種沒有蛋白質(zhì)的生物是不可能自發(fā)自制的，即便有宿主細(xì)胞的幫助。科學(xué)家還相信侵染所需的*小分子量是100萬，一個像馬鈴薯紡錘形塊莖類病毒（PSTV）那樣小的實(shí)體（分子量為130000）不可能侵染任何生物，即使是馬鈴薯。不過，這個科學(xué)教義對迪納沒有什么影響，他還是非常認(rèn)真地證明了類病毒確實(shí)存在，為此他付出了整整6年的艱辛勞動。 *早研究馬鈴薯紡錘形塊莖病的是美國植物病理學(xué)家雷默（Raymer），20世紀(jì)60年代早期，他在位于美國馬里蘭州貝爾茨維爾（Beltsville）的美國農(nóng)業(yè)研究局（ARS）馬鈴薯病害研究室工作，并啟動了發(fā)現(xiàn)類病毒的研究計(jì)劃。在研究中他遇到了一個難題，馬鈴薯紡錘形塊莖病在馬鈴薯中要過幾年才顯示癥狀，許多試驗(yàn)的結(jié)果出來得很慢。后來，雷默和他的同事植物病理學(xué)家穆里爾（Muriel）發(fā)現(xiàn)這種未知的病原容易在番茄中傳染，只要2周時間番茄植株就會明顯矮化。于是，他們改用番茄作為生物測定和繁殖寄主，方便提取馬鈴薯紡錘形塊莖病的病原。有了這種方法，就可很快得到大量的病葉，可以用提純病毒的高速離心法提取病原。但是用這種方法得到的病原很少使健株發(fā)病，顯然該病原不是一種典型的病毒。帶著困惑，雷默來到了迪納的辦公室，并從1965年開始合作。一年后，他們基本認(rèn)定此病是由一種病毒造成。然后他們試用了ARS化學(xué)家發(fā)明的一種不同的離心方式，即密度梯度離心，這種方法證明該病原小且輕。因此迪納認(rèn)為病原不可能是一種傳統(tǒng)的病毒核蛋白，更有可能是一種游離核酸。迪納和雷默接著做了酶化學(xué)試驗(yàn)，用RNA酶處理番茄病葉的提取液，去除RNA，結(jié)果發(fā)現(xiàn)處理液不能像酶處理前那樣侵染健康番茄，而用DNA酶和蛋白酶處理則不影響侵染番茄的能力。結(jié)果表明病原是一種RNA，不含蛋白質(zhì)。 1966年，就在類病毒即將發(fā)現(xiàn)的這個關(guān)鍵時刻，雷默離開實(shí)驗(yàn)室到一家私人企業(yè)工作。迪納又花了5年時間分離病原并研究其特征，核實(shí)他做過的試驗(yàn)，填補(bǔ)漏洞，準(zhǔn)備應(yīng)對懷疑論者的挑戰(zhàn)。1971年，迪納正式在《病毒學(xué)》（Virology）上發(fā)表了他的研究結(jié)果，題目為“Potato spindle tuber‘virus’.IV.A replicating，low molecular weight RNA”，文中將病原稱為“viroid”（類病毒）。他的理論的確遇到了阻力，阻力主要是來自不熟悉他先前所做工作的動物病毒學(xué)家和醫(yī)學(xué)研究者，但他準(zhǔn)備充分，證據(jù)極具說服力。大致在同一時間，另一個項(xiàng)目組在另一種病害的研究中報(bào)告了類似的發(fā)現(xiàn)。自此，類病毒的存在得到了公認(rèn)。目前只在植物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)類病毒。 第二節(jié)植物保護(hù)學(xué)科對生物技術(shù)的推動作用 一、對轉(zhuǎn)基因育種的推動作用 （一）植物病原的核酸序列成為植物轉(zhuǎn)化的載體 T-DNA的發(fā)現(xiàn)使人們聯(lián)想到可利用其對植物進(jìn)行轉(zhuǎn)化。不過，用天然Ti質(zhì)粒作載體有四大缺點(diǎn)：①分子量太大；②限制性酶切位點(diǎn)太多；③被轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞生成腫瘤而不分化；④在大腸桿菌中不能復(fù)制，不便于操作。后來，有人試圖將Ti質(zhì)粒分解成兩個質(zhì)粒：一個是T-DNA區(qū)以外的部分，含有vir區(qū)和土壤桿菌內(nèi)復(fù)制起點(diǎn)，是一個大質(zhì)粒，約170kb；另一個是T-DNA區(qū)加上土壤桿菌內(nèi)復(fù)制起點(diǎn)，是一個小質(zhì)粒。將兩個質(zhì)粒單獨(dú)或組合轉(zhuǎn)化無質(zhì)粒的土壤桿菌，結(jié)果只轉(zhuǎn)入一個質(zhì)粒的不能引發(fā)癌腫，而同時轉(zhuǎn)入了兩個質(zhì)粒的菌系可引發(fā)癌腫。將小質(zhì)粒上T-DNA區(qū)內(nèi)的生長素合成酶基因、細(xì)胞分裂素合成酶基因及根癌堿合成酶基因去掉，保持了T-DNA的左邊界和右邊界，另外加上選擇標(biāo)記基因、供外來基因插入的多克隆位點(diǎn)和大腸桿菌復(fù)制起

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