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金錢魚繁育生物學(xué)及人工繁養(yǎng)技術(shù)研究與應(yīng)用

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作者:李廣麗
出版社:科學(xué)出版社出版時間:2022-10-01
開本: 其他 頁數(shù): 236
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金錢魚繁育生物學(xué)及人工繁養(yǎng)技術(shù)研究與應(yīng)用 版權(quán)信息

金錢魚繁育生物學(xué)及人工繁養(yǎng)技術(shù)研究與應(yīng)用 內(nèi)容簡介

金錢魚(ScatophagusargusLinnaeus1766),又名金鼓魚,是我國東南沿海地區(qū)重要的經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖品種。在相同養(yǎng)殖條件下,雌性個體生長速度比同齡雄性個體快12%-20%。繁育、養(yǎng)殖全雌單性金錢魚具有重要經(jīng)濟(jì)價值。基于此,廣東省南方特色魚類繁育與養(yǎng)殖創(chuàng)新團(tuán)隊就金錢魚"種質(zhì)資源評估-生殖生長調(diào)控-人工繁育養(yǎng)殖"開展了近10年的系統(tǒng)研究,結(jié)合國內(nèi)外有關(guān)金錢魚的近期新研究資料,總結(jié)編著本書。本書**章簡要概述了金錢魚主要生物學(xué)研究現(xiàn)狀、人工繁育養(yǎng)殖技術(shù)及研究展望。第二章圍繞種質(zhì)資源遺傳評估,基于基因組、遺傳圖譜及分子遺傳標(biāo)記,對中國沿海9個代表性金錢魚地理群體樣本的遺傳多樣性、遺傳結(jié)構(gòu)和種群歷史動態(tài)進(jìn)行了評估,為金錢魚親本選育提供了參考。第三章和第四章分別就金錢魚生殖內(nèi)分泌調(diào)控機(jī)理和生長內(nèi)分泌調(diào)控機(jī)理,克隆了部分生殖和生長相關(guān)基因,分別構(gòu)建了金錢魚生殖內(nèi)分泌基本調(diào)控網(wǎng)絡(luò),闡明了金錢魚生長相關(guān)基因的生物學(xué)功能,并以GH/IGF軸為基礎(chǔ)闡明金錢魚雌雄性別生長二態(tài)性的機(jī)理。第五章和第六章結(jié)合長期生產(chǎn)實踐經(jīng)驗,較為全面的總結(jié)了金錢魚親魚培育、人工促熟、人工催產(chǎn)、苗種培育、魚苗淡化和多元綠色生態(tài)混養(yǎng)等技術(shù)。

金錢魚繁育生物學(xué)及人工繁養(yǎng)技術(shù)研究與應(yīng)用 目錄

目錄
**章 金錢魚研究概述 1
**節(jié) 金錢魚主要生物學(xué)研究現(xiàn)狀 1
第二節(jié) 金錢魚人工養(yǎng)殖技術(shù)研究 4
第三節(jié) 金錢魚研究展望 5
參考文獻(xiàn) 6
第二章 金錢魚種質(zhì)資源分析 8
**節(jié) 基因組測序與組裝 8
第二節(jié) 金錢魚遺傳連鎖圖構(gòu)建 15
第三節(jié) 金錢魚微衛(wèi)星多態(tài)標(biāo)記開發(fā) 33
第四節(jié) 基于SSR 標(biāo)記的金錢魚種群遺傳分析 41
第五節(jié) 基于線粒體標(biāo)記的金錢魚群體遺傳分析 54
參考文獻(xiàn) 68
第三章 金錢魚生殖內(nèi)分泌調(diào)控機(jī)制 72
**節(jié) 金錢魚促性腺激素釋放激素的克隆及其在生殖調(diào)控中的功能 72
第二節(jié) 金錢魚促黑素受體4 的克隆及其在生殖調(diào)控中的功能 86
第三節(jié) 金錢魚雌激素受體基因的克隆及其在卵黃蛋白生成中的功能 99
參考文獻(xiàn) 114
第四章 金錢魚生長內(nèi)分泌調(diào)控機(jī)制 117
**節(jié) 金錢魚生長抑素克隆及其在生長調(diào)控中的功能 117
第二節(jié) 金錢魚生長激素釋放激素基因及其受體的克隆和表達(dá)分析 133
第三節(jié) 金錢魚生長激素基因的克隆及在生長調(diào)控中的功能 141
第四節(jié) 金錢魚胰島素樣生長因子的克隆及其在生長調(diào)控中的功能 158
第五節(jié) 金錢魚肝轉(zhuǎn)錄組篩選生長相關(guān)基因 167
參考文獻(xiàn) 183
第五章 金錢魚人工繁殖及苗種培育 187
**節(jié) 溫度和魚油含量在金錢魚卵巢發(fā)育成熟中的功能 187
第二節(jié) 金錢魚親魚培育和促熟技術(shù) 202
第三節(jié) 金錢魚人工催產(chǎn)和授精 204
第四節(jié) 苗種培育 206
參考文獻(xiàn) 209
第六章 金錢魚綠色生態(tài)養(yǎng)殖 212
**節(jié) 金錢魚苗種淡化培育 212
第二節(jié) 金錢魚-凡納濱對蝦混養(yǎng)模式分析 216
參考文獻(xiàn) 230
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金錢魚繁育生物學(xué)及人工繁養(yǎng)技術(shù)研究與應(yīng)用 節(jié)選

**章 金錢魚研究概述 **節(jié)金錢魚主要生物學(xué)研究現(xiàn)狀 金錢魚QScatophagus argus),又名金鼓魚,隸屬鱸形目(Perciformes)刺尾魚亞目(Acanthuroidei)金錢魚科(Scatophagidae)金錢魚屬Q(mào)Scatophagus)廣泛分布于印度-太平洋水域。金錢魚科僅金錢魚1屬,含金錢魚、多帶金錢魚和四棘金錢魚3種。目前我國唯一記錄在案的金錢魚,主要分布于東海南部至南海北部灣區(qū)域。金錢魚富含多不飽和脂肪酸,營養(yǎng)價值高、味道鮮美,是廣受喜愛的優(yōu)質(zhì)食用魚。該魚食性廣,適應(yīng)性和抗病、抗逆性強,可在咸水、咸淡水及淡水中生長,養(yǎng)殖成本低,是我國東南沿海地區(qū)重要的經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖品種。 一、基礎(chǔ)生物學(xué)特征 1.形態(tài)學(xué)特征 金錢魚體高、側(cè)扁,側(cè)面呈圓盤形,背部高聳隆起,口小;魚體黃褐色,腹部銀白,體表滿布大小不等條形或圓形黑斑;鰓蓋膜與峽部稍連;皮堅韌、被小櫛鱗;側(cè)線完全;胸鰭稍圓,腹鰭長于胸鰭,尾鰭寬大、雙凹近截形,鰭條挺括;臀鰭有4根鰭棘;鰭棘前部具凹槽,有毒腺。稚魚頭部顱骨后方兩側(cè)出現(xiàn)1對三葉狀特異形骨結(jié)節(jié)突起、末端尖銳,有微細(xì)輻射紋,是此階段種類鑒別的重要參考特征。金錢魚雌、雄成魚個體形態(tài)差異明顯,雌魚個體較大、體形較高、頭較大、吻較長,雄魚頭部較雌魚尖、小。在養(yǎng)殖過程中,雌性個體生長速度顯著快于同齡雄性個體,因而單性全雌品種養(yǎng)殖具有重要經(jīng)濟(jì)價值。吳波等(2014)以吻長/頭長、眼間距/頭長、體寬/體長、體高/體長、頭高/體長5個性狀建立了性別判別方程,準(zhǔn)確率達(dá)85.96%,為快速、準(zhǔn)確鑒定金錢魚的性別提供了新策略。 2.習(xí)性與食性 金錢魚喜成群游動,性情溫和,不相互打斗或搶掠食物。該魚為廣鹽性,稚魚在咸淡水中生活,鹽度5~20為宜,隨著生長逐漸向深海移動,但也可在咸淡水及淡水中生長。金錢魚對pH及水溫的適應(yīng)范圍廣,適宜pH及水溫分別為6.5~8.4和20~28°C,極限生存水溫為8C。幼魚耐酸、耐高溫能力較強,但低溫耐受力差,低溫半致死溫度為12.2C。作為暖水性魚類,金錢魚成魚對低溫敏感,在極端天氣時常發(fā)生凍死事件,因此養(yǎng)殖中需做好防寒保暖工作。 金錢魚為雜食性,食性廣且隨生長逐漸變化,自然狀態(tài)下偏愛植物性餌料,但人工馴化能使其食性發(fā)生轉(zhuǎn)化。稚、幼魚主要攝食單胞藻、硅藻、輪蟲、小型軟體動物、橈足類、十足類幼體、魚卵等;幼、成魚則以多胞藻為主,亦攝食硅藻、甲殼類、雙殼類、輪蟲類、橈足類、海綿動物、多毛類等。成魚對動物蛋白需求低,投喂植物蛋白飼料時生長顯著快于動物蛋白飼料,這為高效人工餌料的選擇提供了正確指導(dǎo)。 3.生長發(fā)育 金錢魚胚胎發(fā)育歷經(jīng)受精卵、卵裂、囊胚期、原腸期、神經(jīng)胚期、器官形成期、肌肉效應(yīng)期、心跳期、出膜期等階段。在24°C、鹽度28的條件下,歷時28.5h破膜,積溫為682.7°C h。初孵仔魚全長1.62~1.88mm,51h開口;4~5d齡仔魚卵黃囊消失;32d齡稚魚尾部色素粒、體側(cè)褐色橫紋及背鰭、臀鰭、腹鰭鰭棘、鰭條等基本發(fā)育完整。仔魚早期發(fā)育除具硬骨魚類發(fā)育特征外,還具紅、黑色素帶、鰭膜泡狀結(jié)構(gòu)。 金錢魚年內(nèi)生長呈明顯階段性,與水溫密切相關(guān),但與鹽度相關(guān)性不大。Pak Panang灣群體動態(tài)研究表明:金錢魚屬異速生長型,體形參數(shù)比例隨生長階段而發(fā)生變化。體高的增長速度*快,背鰭前長、臀鰭前長次之,眼徑*慢。金錢魚雌、雄生長差異顯著,1齡雌魚比雄魚生長速度快30%~50%,2齡雌魚生長速度則高于同齡雄魚的1倍以上。本實驗室利用Fi家系群體對金錢魚的生長性狀進(jìn)行考察,發(fā)現(xiàn)1齡和2齡雌、雄群體間的生長速度差異大約為12%~20%,與早期文獻(xiàn)報道的結(jié)果有差異,但金錢魚雌性生長速度快于同齡雄性個體這點與此前文獻(xiàn)報道結(jié)果一致。基于此特性,繁育單一雌性魚苗,實現(xiàn)單性養(yǎng)殖,對提高養(yǎng)殖效率、漁獲品質(zhì)和經(jīng)濟(jì)效益具有重要意義。 4.滲透壓調(diào)節(jié) 金錢魚對鹽度的劇烈快速波動有很強的耐受力,因而成為滲透調(diào)節(jié)分子機(jī)制的理想研究模型。其在淡水馴化時經(jīng)歷兩個階段:在適應(yīng)期調(diào)節(jié)鰓氯細(xì)胞、腎收集管數(shù)量,以及腎小球、收集管直徑和收集管肌肉組織厚度;適應(yīng)期過后,鰓和腎形態(tài)學(xué)保持穩(wěn)定。金錢魚鰓表面及微細(xì)結(jié)構(gòu)與其他硬骨魚類基本相似,但氯細(xì)胞數(shù)量較少;幼魚由淡水轉(zhuǎn)入咸水后鰓絲和鰓瓣的氯細(xì)胞密度顯著增大,說明氯細(xì)胞可能與鹽度變化適應(yīng)性密切相關(guān)。腎在維持體液平衡、適應(yīng)不同鹽度過程中起重要作用,也是魚類重要的滲透調(diào)節(jié)器官之一。與其他淡、海水魚類類似,淡水馴化后金錢魚腎組織形態(tài)學(xué)特征會發(fā)生改變,淡水及低鹽度下收集小管和腎小球的密度顯著降低。細(xì)胞生理學(xué)研究亦表明,金錢魚腎細(xì)胞系的滲透調(diào)節(jié)能力高于草魚We//M50腎細(xì)胞系,對鹽度的耐受性較強。由于相關(guān)研究還不夠系統(tǒng)和深入,金錢魚滲透調(diào)節(jié)分子機(jī)制尚未完全明晰,但可以預(yù)見,其將會是未來研究的熱點之一。 二、繁殖生物學(xué) 1.基本繁殖特性 金錢魚性成熟與產(chǎn)卵受溫度、鹽度、降雨、食物等環(huán)境因素影響。在菲律賓等東南亞地區(qū),金錢魚繁殖季節(jié)為6~7月;在我國南方沿海繁殖季節(jié)則較長,始于4月中下旬,終于9月,盛期在5~8月。雌、雄魚*小生殖生物學(xué)年齡均為1齡,首次性成熟體重分別為150~200g、83.5~90g,雄魚性腺成熟系數(shù)(GSI)*高2.2%,雌魚GSI*高達(dá)14.7%,但性腺發(fā)育不同步,雄性一般先于雌性成熟。金錢魚體重與懷卵量比約為(18~20):1,但具體繁殖力數(shù)值存在差異,可能與親魚大小、生長環(huán)境、飼養(yǎng)條件、地域品種差異等因素有關(guān)。成熟卵子直徑為430~750叫,球形,浮性,無色透明,含單個直徑約300叫的黃色油球。成熟精子屬于硬骨魚I型精子結(jié)構(gòu),精子存活率和運動性在鹽度25~30*高。未受精卵子在1h內(nèi)變渾濁。受精卵呈規(guī)則球形,具光澤,卵膜薄且無色透明,受精后1~2h內(nèi)油球會不斷融合。 2.性腺發(fā)育 目前己明確了金錢魚精巢和卵巢的5個發(fā)育階段(I~V)及其組織結(jié)構(gòu)特征。其卵母細(xì)胞發(fā)育存在非同步現(xiàn)象,產(chǎn)卵后仍存在n~w期卵母細(xì)胞,為分批非同步產(chǎn)卵類型。金錢魚卵巢發(fā)育的適宜溫度為23~26°C,此條件下GSI、血清雌二醇(E2)、蛋白磷和蛋白鈣水平顯著高于29C。因此,金錢魚親魚的培育、促熟過程應(yīng)控制水溫。在性腺發(fā)育、成熟過程中,魚類需從外界攝取充足的營養(yǎng)物質(zhì),尤其是蛋白質(zhì)和脂類。脂類中多不飽和脂肪酸(PUFA)是魚類特別是海水魚類繁殖及生長發(fā)育過程中不可缺少的營養(yǎng)因子。魚油中富含n-3PUFA,其對海水魚性腺發(fā)育成熟具有重要促進(jìn)作用。研究證實,金錢魚飼料中添加6%的魚油可顯著上調(diào)一些繁殖相關(guān)基因的表達(dá)、促進(jìn)E2分泌及卵巢發(fā)育成熟,該發(fā)現(xiàn)在親魚培育與促熟中有很好的實用價值。 3.繁殖相關(guān)調(diào)控基因 金錢魚性腺分化發(fā)育與繁殖內(nèi)分泌相關(guān)基因及其分子調(diào)控機(jī)制成為近年的研究熱點。己有卵黃蛋白原(v?g)、foxl2、、卵泡刺激素(fhb)、促黃體生成素(懸)、芳香化酶、抗米勒管激素(arnh)、wnt4、sox9、daxl、sfl、雌激素受體(er)、雄激素受體(《r)等基因被克隆研究。 foxl2基因主要參與哺乳動物卵巢發(fā)育、功能維持和粒層細(xì)胞分化,在魚類中也具有類似的調(diào)控功能。硬骨魚類的腦型芳香化酶(基因為cypWalb、和性腺型芳香化酶(基因為cyp19a1a)是雌激素合成的關(guān)鍵酶和限速酶,可調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌和繁殖功能。較高溫度(>26°C)會抑制金錢魚卵巢中foxl2、cyp19a1b和vtg基因的表達(dá),適宜溫度(23~26C)則可上調(diào)細(xì)12基因的表達(dá)并有效促進(jìn)卵巢發(fā)育成熟,這從分子水平初步解釋了溫度影響卵巢發(fā)育的機(jī)制。foxl2、cyp19a1a和cyp19a1b基因在金錢魚精巢、卵巢的表達(dá)具有性別二態(tài)性,性腺發(fā)育早期foxl2基因在卵巢中表達(dá)較高,而在性成熟時下降到較低水平,表明fioxl2基因在性別分化中扮演重要角色,并可能調(diào)控cyp19a1a和cyp19a1b基因的表達(dá)。Amh基因在I~m期精巢維持高表達(dá),在m、W期卵巢表達(dá)量會升高,可能對精巢發(fā)育、精子產(chǎn)生、卵母細(xì)胞發(fā)育和功能維持有重要意義。wrnt4a和wmt4b基因分別在I期精巢、n~皿期卵巢高表達(dá),因此wnt4a基因可能參與精巢發(fā)育及精原細(xì)胞增殖,而wnt4b基因則與卵巢發(fā)育有關(guān)。性逆轉(zhuǎn)研究初步表明,daxl和f基因參與性腺分化且二者具有明顯的拮抗作用,而sox9基因在性腺雄性化過程中有重要功能。 雌、雄激素受體在魚類等脊椎動物繁殖調(diào)控過程中非常關(guān)鍵。金錢魚3種雌激素受體亞型基因和對基因的表達(dá)調(diào)控有明顯差異。在卵黃蛋白發(fā)生期,era基因與vtg基因的表達(dá)水平同步上調(diào),era基因?qū)tg-B和vtg-C基因起到關(guān)鍵調(diào)控作用。Chen等(2016a)發(fā)現(xiàn)ar基因在精巢發(fā)育中期表達(dá)水平*高并維持至末期;經(jīng)甲基睪酮(MT)處理后,卵巢中ar基因表達(dá)水平顯著增高,證明在外源類固醇激素作用下,金錢魚性腺具有可塑性,為性逆轉(zhuǎn)及全雌育苗中偽雄魚的培育奠定了理論基礎(chǔ)。 促黑素受體4(MC4R)是G蛋白耦聯(lián)受體超家族成員之一,在多種魚類性腺中表達(dá),且mc4r基因拷貝顯性負(fù)突變可推遲雄性劍尾魚的性成熟,暗示其與魚類的生殖有關(guān)。本實驗室近年率先探究金錢魚MC4R的生殖調(diào)控作用,初步結(jié)果表明,激活MC4R信號通路可促進(jìn)下丘腦gnrh基因的表達(dá),進(jìn)而調(diào)控腦垂體FSH和LH的合成;也可直接調(diào)控腦垂體fshb和ITab基因的表達(dá)水平,證明MC4R確實參與魚類生殖的調(diào)控。此發(fā)現(xiàn)有助于拓展對魚類繁殖內(nèi)分泌調(diào)控網(wǎng)絡(luò)及其機(jī)制的認(rèn)知水平,對生殖調(diào)控新技術(shù)的開發(fā)亦具有指導(dǎo)作用。 三、細(xì)胞遺傳學(xué) 金錢魚細(xì)胞遺傳學(xué)進(jìn)展緩慢,僅在染色體數(shù)目和核型方面有報道。金錢魚為二倍體,核型為2n=48,48t,臂數(shù)NF=48,染色體數(shù)為48,均為端部著絲點染色體,不具性別二態(tài)性,不能依據(jù)染色體形態(tài)區(qū)分性染色體。染色體組型研究是細(xì)胞遺傳學(xué)和分子遺傳學(xué)的基礎(chǔ),對了解遺傳物質(zhì)組成、遺傳變異規(guī)律、發(fā)育機(jī)制和性別決定有積極作用,對系統(tǒng)演化與分類、進(jìn)化地位確定和細(xì)胞分類學(xué)等研究也具有重要意義。深入開展細(xì)胞遺傳學(xué)研究可有力推動金錢魚染色體結(jié)構(gòu)和功能等方面的研究。 四、分子遺傳學(xué) 金錢魚的分子遺傳學(xué)研究主要局限于分子標(biāo)記開發(fā)和線粒體基因組測序,而在遺傳多樣性、種群遺傳結(jié)構(gòu)、種群動態(tài)、分子系統(tǒng)進(jìn)化等方面則鮮有報道。基于FIASCO、高通量RNA測序技術(shù),目前己開發(fā)了一系列多態(tài)性簡單重復(fù)序列(SSR)和單核苷酸多態(tài)性(SNP)標(biāo)記,但仍不能滿足后續(xù)研究對大量分子標(biāo)記的需求。我們開發(fā)了SSR、擴(kuò)增片段長度多態(tài)性(AFLP)和相關(guān)序列擴(kuò)增多態(tài)性(SRAP)標(biāo)記用于雌、雄群體的遺傳多樣性分析,3種標(biāo)記的分析結(jié)果具有一致性,金錢魚群體遺傳多樣性較低,雌雄間遺傳變異小。金錢魚線粒體基因組己完成測序,測序結(jié)果表明線粒體DNA具有分子結(jié)構(gòu)簡單、母系遺傳、幾乎不發(fā)生重組、進(jìn)化速度快、不同區(qū)域進(jìn)化速度存在差異等特點,可廣泛應(yīng)用于種群遺傳學(xué)、分子系統(tǒng)學(xué)等領(lǐng)域。金錢魚線粒體基因組數(shù)據(jù)為其線粒體功能基因組學(xué)、分子生態(tài)學(xué)、分子分類學(xué)、分子系統(tǒng)發(fā)育和進(jìn)化的深入研究奠定了基礎(chǔ)。 第二節(jié)金錢魚人工養(yǎng)殖技術(shù)研究 一、人工養(yǎng)殖技術(shù) 金錢魚人工養(yǎng)殖技術(shù)研究主要集中在池塘混養(yǎng)和淡化養(yǎng)殖。池塘混養(yǎng)能有效改善精養(yǎng)池塘水質(zhì),降低亞硝酸鹽、氨氮含量及化學(xué)需氧量(COD),穩(wěn)定浮游植物種群結(jié)構(gòu),控制浮游動物過度繁殖。雜食性的金錢魚性情溫和、易馴化,適合與蝦、蟹、貝混養(yǎng),可有效提高水域生產(chǎn)力和綜合經(jīng)濟(jì)效益,是重點發(fā)展的養(yǎng)殖模式之一。有研究表明,對蝦-金錢魚-蕹菜多營養(yǎng)級綜合養(yǎng)殖,以及金錢魚-長毛對蝦-青蟹-縊蟶立體生態(tài)混養(yǎng),可提高飼料氮磷利用率,增加池塘生態(tài)系與結(jié)構(gòu)的利用空間,維持良好的養(yǎng)殖生態(tài)環(huán)境,減少水污染和疾病的發(fā)生,提高餌料利用率和經(jīng)濟(jì)效益。

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