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發育生物學實驗

包郵 發育生物學實驗

作者:林丹軍
出版社:科學出版社出版時間:2021-12-01
開本: B5 頁數: 176
本類榜單:自然科學銷量榜
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發育生物學實驗 版權信息

  • ISBN:9787030315724
  • 條形碼:9787030315724 ; 978-7-03-031572-4
  • 裝幀:一般膠版紙
  • 冊數:暫無
  • 重量:暫無
  • 所屬分類:>

發育生物學實驗 內容簡介

本書共20個實驗,包括精子和卵子的發生,受精的細胞學觀察,動物的早期發育,蛙的器官發生,雞的原生殖細胞,蛙的人工催產及早期發育觀察,無尾兩棲類的單性生殖,雞卵的人工孵育和早期發育觀察,雞胚肢芽的尿囊絨毛膜移植,雞胚的殼外培養,蛙胚胎細胞的分離和再聚集,胚胎誘導,小鼠早期胚胎發育和胚胎移植,細胞核移植,胚芽的連續切片制作技術,用免疫組織化學方法分析胚胎發育中的基因表達,用核酸原位雜交技術分析胚胎發育中的基因表達,小鼠胚胎干細胞的體外培養。

發育生物學實驗 目錄

目錄
前言
卷首語:實驗的教與學 1
實驗一 精子的發生 4
實驗二 卵子的發生 10
實驗三 受精的細胞學觀察 17
實驗四 動物早期發育:卵裂及囊胚類型 24
實驗五 動物早期發育:原腸形成和原腸胚類型 31
實驗六 蛙的器官發生 39
實驗七 雞的原生殖細胞 49
實驗八 蛙的人工催產及早期發育觀察 55
實驗九 無尾兩棲類單性生殖 65
實驗十 雞卵的人工孵育和胚胎發育觀察 73
實驗十一 雞胚肢芽的尿囊絨毛膜移植 82
實驗十二 雞胚的殼外培養 87
實驗十三 蛙胚胎細胞的分離和再聚集 92
實驗十四 胚胎誘導 96
實驗十五 小鼠早期胚胎發育和胚胎移植 102
實驗十六 細胞核移植 114
實驗十七 胚胎的連續切片制作技術 122
實驗十八 用免疫組織化學方法分析胚胎發育中的基因表達 129
實驗十九 用核酸原位雜交技術分析胚胎發育中的基因表達 135
實驗二十 小鼠胚胎干細胞的體外培養 144
附錄一 常用試劑的配制 152
附錄二 實驗中常用的自制工具 157
附錄三 常用器皿和玻片的處理 159
附錄四 小鼠sonichedgehog (shh)基因RNA探針的制備與標記 160
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發育生物學實驗 節選

卷首語:實驗的教與學 今天,我們能夠對一般動物的發育過程和發育機制有所認識,是基于上百年來一代又一代的胚胎學家和發育生物學家對動物發育進行無數次觀察和實驗所獲得的研究成果。早期,研究者只是簡單地觀察單細胞的受精卵如何通過奇妙的轉變而成為復雜的個體,并且具有成千上萬不同類型的細胞。后來,通過研究者精細的觀察,我們懂得了在動物發育過程中出現了細胞分裂、細胞運動、細胞特化等變化。隨之,問題也就提出來了,我們想知道在發育中這些事件是如何發生的。這是一個極具挑戰性的問題。為了揭開發育之謎,研究者開始深入探索動物的發育機制:探究胚胎發育過程中胚胎對營養、離子代謝等的諸多需求,發育中的各種事件是如何發生的;發育這些事件是否在胚胎的一個地方或多個地方發生;胚胎附近細胞或組織對這些事件的發生是否有重要影響;這些發育中所發生的變化是否可逆,基因是如何控制這些變化的;在發育過程中,基因組有否變化 近年來,由于各學科的相互滲透,研究生物化學、分子生物學等新技術、新儀器的應用,使人們對過去觀察過的發育事件,又重新用遺傳學、分子生物學的觀點進行解析。例如,在發育過程中相同的基因組如何通過差異的表達,產生不同的細胞類型;RNA 的加工、蛋白質的合成如何對發育進行調節,等等。 在這門實驗課程中,有關發育的很多觀點都體現在各個實驗內容中,包括實驗原理、實驗過程和結果。通過實驗你可以學習如何做每個實驗,分析每次實驗結果,并理解每個結論的意義。然而,實驗不僅僅只有結果,更重要的是可以經歷結果產生的過程。這個過程不是僅僅通過閱讀教科書或科學雜志就能夠獲得的。在實驗中使用活的實驗材料,這使得每次實驗都更具有挑戰性。使用活的實驗材料能使你有機會置身于真正的研究中。實驗中可能會出現教材中未提及的現象和結果,因為活的胚胎對環境因素的改變是十分敏感的。當你開始發育生物學的探索時,*重要的是帶有一顆好奇的心,問問題、提假想,然后在實驗中仔細操作、認真觀察,才能獲得令人滿意的結果。如果沒有付出辛勤的勞動,實驗就有可能失敗。因此,一開始就要告訴學生,搞研究并不像我們看到的已發表文章中所呈現的結果那么圓滿。在發表的文章中不會把錯誤、失敗或獲得成果的辛勞告訴大家。研究工作中錯誤和失敗隨時都可能發生,學生應準備面對挫折。實驗前要認真閱讀教材和相關資料,對實驗內容、目的要求、操作順序及要領做到心中有數。應該非常認真地去做實驗。如果你的實驗結果不完善,或實驗的具體過程出現的錯誤等,也要如實記錄。科研工作者和學生通常都有壓力,科研人員總想迅速得到理想的結果,學生總想在有限的時間里取得好的成績,這樣都有可能產生去造假的念頭。所以,對于科學研究者來講,實驗態度嚴肅認真,實事求是,寫出可靠的結果和真實的實驗報告是很重要的。 每個學生都要有自己的實驗記錄本,所有的實驗過程和觀察都要完整地當場記錄下來,切不可過后補寫,即使非常小的細節,有時對你也是重要的。在將來分析實驗結果時,這些記錄是你完成實驗報告的原始記錄和依據。此外,還應準備繪圖紙張和鉛筆等,隨時在顯微鏡下記錄和繪出動物發育的形態特點和變化。 撰寫實驗報告是完成每個實驗后必須做的功課或作業。實驗報告的格式多樣,可以根據實驗內容的復雜性進行設計。有些探索性實驗*好以正式發表論文的格式進行寫作,這對初次進行科學探索的學生而言也是一個很好的科學訓練。實驗報告應包括這幾方面的內容。 (1)前言(intrduction):簡單描述實驗的目的與目標,前人在該領域的研究成果和進展,所要進行實驗的實驗原理、理論根據,提出的假設或設想等。若需要引用他人文獻,請注明出處。 (2)材料與方法(materialandmethod):寫出你自己的實驗步驟,完整記錄實驗操作流程與實驗條件。雖然在實驗教材中對每個實驗都有詳細的描述、具體的實驗步驟,而且實驗室為每個實驗提供了儀器和試劑,但在具體操作時一些實驗條件的變化,如實驗材料狀況、實驗時的溫度、pH 及其他因素都有可能對實驗結果造成影響。 (3)結果(result):條理清晰地寫出你的實驗結果,真實地陳述觀察所得結果。實驗數據要經過整理后做成圖、表以利于解讀。發育觀察可通過繪圖或拍攝圖像加以注釋。若重復嘗試過多次的實驗,可去蕪存菁,只寫出有意義的實驗結果。 (4)討論(discussion):對實驗結果作進一步的整合與分析,說明由結果中所獲得的信息。若有與事實或已知不符的現象,請仔細討論或解釋。此部分內容*需要發揮你的專業實力。 (5)參考文獻(reference):報告中若引用他人結果,一定要列入參考文獻。編輯參考文獻要多下苦功,參考文獻的寫法相當復雜,不同期刊有不同格式,請選定一種格式。 各個實驗項目可以根據實驗室的實際條件靈活安排,但在課程開始前要仔細計劃和安排日程。實驗中所使用的活材料,如海膽、蛙、魚在一年中只有生殖季節(4~6月)才可獲得胚胎。雖然雞胚生殖不受季節限制,但是秋、冬季的活力不如春季。因此,建議實驗課程*好安排在春季。有的實驗室有條件人工飼養爪蟾(Xenopuslaevis)和斑馬魚(Daniorerio),可在人工控制下隨時獲得活胚胎。 一般實驗盡可能安排在每周3個學時內完成,指導老師應在實驗前做好實驗材料、儀器和試劑等的準備工作。有些實驗難以在3個學時內完成,如胚胎標本制作(實驗十七)、免疫組織化學(實驗十八)、原位雜交技術(實驗十九)和胚胎干細胞培養(實驗二十)等實驗都必須用幾天的時間才能完成,這就需要合理安排實驗時間。觀察動物胚胎發育過程,如蛙的早期發育(實驗八)、雞的孵化(實驗十)、雞胚的殼外培養(實驗十二)等,通常需要在晚上或第二天以后繼續觀察,將發生的變化詳細記錄下來,所以實驗室有時必須向學生全天開放。實驗室應建立必要的規章制度,學生應愛護實驗室內的一切設備儀器,避免損壞和浪費;保持實驗室整潔、安靜、安全、文明。每次實驗完畢,要將實驗用具等放置到指定地點或指定狀態,由值日生做好實驗室清理衛生及水電等的安全檢查工作。 希望學生學習了本實驗課程后懂得在科學探索中怎樣去做實驗,怎樣去分析實驗結果。在實驗過程中體會科學探索的辛勞,并從中獲得初次探索的喜悅。 實驗一 精子的發生 精子發生的全過程是在精巢(testis)內進行的。各種動物的精巢結構不同,精子的形態也各種各樣,但精子發生的規律基本相似。精子發生都必須經歷增殖期、生長期、成熟期和精子形成期這幾個階段。生精細胞包括精原細胞(spermatogonium)、初級精母細胞(primaG ryspermatocyte)、次級精母細胞(secondary spermatocyte)和精子細胞(spematid)。精母細胞經過一次復制和兩次成熟分裂,形成單倍體的精子細胞,再經過變態形成精子(sperm)(圖1.1)。 此外,在生精細胞之間還分布著一種稱之為支持細胞(sertolicell)的體細胞,它對生精細胞具有支持、營養和分解殘余物質的作用,也具有調節精子發生和誘導精子形成的作用。 精子的發生是一個連續過程。在哺乳動物精巢中有許多的生精小管,在生精小管上有規律地分布著各期生精細胞(圖1.2、圖1.3)。兩棲動物或魚類精子的發生有著明顯的季節性變化。在精巢中有許多形態不規則的精小葉(seminiferouslobulus),各期生精細胞以精小囊(spermatogeniccyst)為單位,分布在精小葉中(圖1.4)。在同一個精小囊中的生精細胞往往為同一發育期的生精細胞,不同精小囊的生精細胞發育不同步。 一、實驗目的 (1)通過觀察哺乳動物、蛙類或魚類的精巢切片,了解精原細胞、初級精母細胞、次級精母細胞和精子細胞的形態特征,了解精子的形成過程,比較不同動物精巢的結構特點。 (2)通過觀察動物的活體精子和精子涂片,了解各種精子的形態和活動狀況。 二、材料、儀器、試劑 (一)材 料 (1)小鼠的精巢切片(H.E.染色)、魚或蛙的精巢切片(H.E.染色)、人的精子涂片(鐵釩蘇木精染色)。 (2)性成熟的雄性小鼠、蛙或魚。 (二)儀器用具 普通顯微鏡、手術剪、鑷子、培養皿、吸管、潔凈的載玻片和蓋玻片。 (三)藥品試劑 哺乳動物的生理鹽水(0.9%NaCl),魚或蛙的生理鹽水(0.65%NaCl)。

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