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放線菌資源及藥物發現 版權信息
- ISBN：9787030691965
- 條形碼：9787030691965 ; 978-7-03-069196-5
- 裝幀：一般膠版紙
- 冊數：暫無
- 重量：暫無
- 所屬分類：>>
放線菌資源及藥物發現 內容簡介
本書論述了作者近十多年研究各種環境下放線菌資源的區系組成、分布規律及特點, 放線菌資源藥用價值評估, 從放線菌發現的生物活性先導化合物及部分有開發價值新化合物的生物合成。
放線菌資源及藥物發現 目錄
目錄
**章 放線菌資源 1
**節 放線菌分離方法的重要性 2
一、實驗樣品采集 2
二、樣品的預處理 2
三、分離培養基的選擇 2
四、抑制劑 3
第二節 土壤放線菌資源 3
一、云南西雙版納熱帶雨林自然保護區的土壤放線菌資源 3
二、怒江大峽谷的土壤放線菌資源 4
三、高黎貢山龍陵段的土壤放線菌資源 7
四、云南 3個特殊地質地貌地區的土壤放線菌資源 7
五、中國西南部分地區的土壤放線菌資源 26
六、新疆、青海鹽堿地區的土壤放線菌資源 29
七、土壤放線菌資源分布的規律及特點 31
第三節 動物放線菌資源 32
一、2種長臂猿 32
二、2種金絲猴 33
三、獼猴 33
四、3種虎 34
五、4種熊科動物 34
六、麝香貓 36
七、5種鹿 38
八、2種羊駝 39
九、2種犀牛 39
十、亞洲象 40
十一、9種鳥類 44
十二、中華竹鼠 46
十三、北海獅、髯海豹 46
十四、羅非魚 46
十五、云南土白蟻 46
十六、幾類高等動物糞便免培養微生物的比較 47
十七、動物糞便放線菌區系的特點 48
第四節 地衣放線菌資源 51
一、滇西南地區地衣放線菌 52
二、普洱地區地衣放線菌 55
三、金沙江中段地衣放線菌 55
四、西雙版納、白茫雪山、波羅的海南岸地衣放線菌 56
五、幾個地區免培養和純培養地衣微生物比較研究 59
六、地衣放線菌資源的分布規律及特點 62
第五節 毒性植物內生放線菌資源 63
一、3種有毒植物的免培養、純培養研究 64
二、26種毒性植物純培養放線菌資源 67
三、生長在不同生境同種毒性植物的內生放線菌多樣性. 69
四、西雙版納熱帶雨林 90種中藥植物的內生放線菌資源 69
五、毒性植物內生放線菌的分布及其特點 70
第六節 部分海域的放線菌資源 71
一、北部灣茅尾海的放線菌 71
二、波羅的海基爾灣的放線菌 72
第七節 放線菌資源分布的規律和特點 73
主要參考文獻 76
第二章 放線菌資源藥用價值評估 81
**節 菌種快速鑒定 81
一、放線菌基因組小量提取方法 81
二、16S rRNA基因擴增及測序比對 82
三、菌種鑒定 82
第二節 抗菌活性 82
一、土壤放線菌的抗菌活性 83
二、動物糞便放線菌的抗菌活性 86
三、毒性植物內生放線菌的抗菌活性 88
四、地衣放線菌的抗菌活性 88
五、北部灣茅尾海放線菌的抗菌活性 91
第三節 抗腫瘤活性 93
第四節 酶活性 96
第五節 各類活性物質的合成基因 98
一、基因篩選的實驗方法 98
二、土壤放線菌基因篩選 100
三、動物糞便放線菌基因篩選 104
四、毒性植物內生放線菌基因篩選 106
五、地衣放線菌基因篩選 107
六、北部灣茅尾海放線菌基因篩選 110
第六節 全基因組分析及基因組挖掘 112
一、測序菌株 112
二、基因組測序流程 113
三、基因組挖掘舉例 113
第七節 超高壓液相色譜 -高分辨質譜-高分辨代謝組學分析 117
第八節 放線菌資源藥用價值綜合評估 119
主要參考文獻 120
第三章 放線菌產生的活性先導化合物 122
**節 動物糞便放線菌 122
一、巴芙洛霉素類成分抗真菌活性和作用機制 123
二、殼梭孢菌素二萜類化合物抗腫瘤作用研究 125
三、violacin A抗炎活性作用機制研究 125
四、borrelidin衍生物抗真菌活性的構效關系和機制研究. 126
第二節 地衣放線菌 128
一、地衣放線菌合成活性次級代謝產物的潛力 129
二、地衣放線菌活性代謝產物的發現 129
第三節 姜氏菌目放線菌 131
一、姜氏菌素的發現 132
二、姜氏菌素抗炎作用機制研究 133
主要參考文獻 134
第四章 放線菌活性物質發現的新方法 137
**節 宏基因組分析 137
一、宏基因組測序與分析 138
二、宏基因組的應用 139
三、利用宏基因組測序技術比較分析亞洲象糞便樣品中的微生物組 141
四、展望 144
第二節 全基因組分析及基因組挖掘 144
一、基于單個基因組的基因組挖掘 144
二、基于多個基因組的基因組挖掘 145
三、宏基因組挖掘 146
四、自動化的基因組挖掘 146
五、分子網絡和全基因組分析輔助天然產物發現 147
六、利用基因組挖掘技術開展部分菌株新化合物分離的實例 148
七、展望 150
第三節 基于生物合成途徑關鍵基因的天然產物產生菌高通量篩選 150
一、建立放線菌基因組 DNA庫. 151
二、基于生物合成途徑特異性探針高通量篩選基因組 DNA庫 151
三、基于生物合成途徑特異性引物實時熒光定量 PCR高通量篩選基因組 DNA庫 153
四、潛力菌株的進一步精選及基因組挖掘研究 153
五、對部分放線菌高通量篩選的研究進展 154
六、展望 156
第四節 激活沉默基因簇技術 156
一、異源表達 156
二、啟動子的引入 157
三、調控基因改造 158
四、高通量激發子篩選與成像質譜偶聯 159
五、表觀遺傳學調控 160
六、核糖體工程 160
七、展望 161
第五節 組合生物合成技術的應用 161
一、組合生物合成在藥物結構多樣性及功能上的應用 161
二、組合生物合成在傳統藥物生產工藝上的應用 162
三、利用組合生物合成方法設計和生產新藥 162
四、展望 163
主要參考文獻 163
第五章 放線菌生物活性物質的生物合成 166
**節 合成生物學的新進展 166
一、CRISPR基因編輯技術 166
二、宿主細胞遺傳改造 167
三、展望 169
第二節 自溶霉素的生物合成 169
一、自溶霉素和格爾德霉素類化合物的結構及活性. 169
二、自溶霉素類化合物的生物合成機制研究 170
三、對自溶霉素生物合成機制的進一步研究 173
四、小結 175
第三節 烯二炔類化合物的生物合成 176
一、烯二炔類化合物的結構及活性 176
二、烯二炔類化合物的生物合成機制 178
三、對烯二炔類化合物生物合成的研究 181
四、小結 182
第四節 AT-less typeⅠPKS化合物雷納霉素和放線酮的生物合成 182
一、雷納霉素 182
二、放線酮 185
三、小結 189
第五節 新型萜類化合物的生物合成 189
一、放線菌萜類化合物的生物合成基因簇 191
二、放線菌萜類化合物生物合成策略 193
三、關于萜類化合物生物合成工作的策略 195
四、總結與展望 197
主要參考文獻 199
第六章 防治三七土傳病害的復合放線菌肥 201
一、有效成分分析 201
二、毒性 201
三、提高保苗率 201
四、與19個單位的藥劑做的同田對比試驗 202
五、復合菌肥對產量的影響 203
六、其他試驗 204
主要參考文獻 204
第七章 微生物藥物研發新思維 206
一、中藥是中華文明的基石之一 206
二、西藥的長處和短處 207
三、微生物藥物開發新思維 207
主要參考文獻 209
支撐材料 210
S1-1 土壤放線菌的組成 210
S1-2 研究的 53種動物名錄 213
S1-3 53種動物糞便純培養放線菌的組成 213
S1-4 地衣內生放線菌的組成 215
S1-5 116種毒性植物和中藥植物內生放線菌及其他細菌的組成（黑體字為新屬） 217
S1-6 各種來源放線菌組成總表 218
S1-7 1991～2019年云南省微生物研究所發表的細菌屬以上新分類單元 223
S2-1 全基因組測序及基因組挖掘菌株信息 226
S3-1 動物糞便放線菌、地衣放線菌、姜氏菌代謝產物 227
本書資助項目明細 235
作者通訊錄 237
**章 放線菌資源 1
**節 放線菌分離方法的重要性 2
一、實驗樣品采集 2
二、樣品的預處理 2
三、分離培養基的選擇 2
四、抑制劑 3
第二節 土壤放線菌資源 3
一、云南西雙版納熱帶雨林自然保護區的土壤放線菌資源 3
二、怒江大峽谷的土壤放線菌資源 4
三、高黎貢山龍陵段的土壤放線菌資源 7
四、云南 3個特殊地質地貌地區的土壤放線菌資源 7
五、中國西南部分地區的土壤放線菌資源 26
六、新疆、青海鹽堿地區的土壤放線菌資源 29
七、土壤放線菌資源分布的規律及特點 31
第三節 動物放線菌資源 32
一、2種長臂猿 32
二、2種金絲猴 33
三、獼猴 33
四、3種虎 34
五、4種熊科動物 34
六、麝香貓 36
七、5種鹿 38
八、2種羊駝 39
九、2種犀牛 39
十、亞洲象 40
十一、9種鳥類 44
十二、中華竹鼠 46
十三、北海獅、髯海豹 46
十四、羅非魚 46
十五、云南土白蟻 46
十六、幾類高等動物糞便免培養微生物的比較 47
十七、動物糞便放線菌區系的特點 48
第四節 地衣放線菌資源 51
一、滇西南地區地衣放線菌 52
二、普洱地區地衣放線菌 55
三、金沙江中段地衣放線菌 55
四、西雙版納、白茫雪山、波羅的海南岸地衣放線菌 56
五、幾個地區免培養和純培養地衣微生物比較研究 59
六、地衣放線菌資源的分布規律及特點 62
第五節 毒性植物內生放線菌資源 63
一、3種有毒植物的免培養、純培養研究 64
二、26種毒性植物純培養放線菌資源 67
三、生長在不同生境同種毒性植物的內生放線菌多樣性. 69
四、西雙版納熱帶雨林 90種中藥植物的內生放線菌資源 69
五、毒性植物內生放線菌的分布及其特點 70
第六節 部分海域的放線菌資源 71
一、北部灣茅尾海的放線菌 71
二、波羅的海基爾灣的放線菌 72
第七節 放線菌資源分布的規律和特點 73
主要參考文獻 76
第二章 放線菌資源藥用價值評估 81
**節 菌種快速鑒定 81
一、放線菌基因組小量提取方法 81
二、16S rRNA基因擴增及測序比對 82
三、菌種鑒定 82
第二節 抗菌活性 82
一、土壤放線菌的抗菌活性 83
二、動物糞便放線菌的抗菌活性 86
三、毒性植物內生放線菌的抗菌活性 88
四、地衣放線菌的抗菌活性 88
五、北部灣茅尾海放線菌的抗菌活性 91
第三節 抗腫瘤活性 93
第四節 酶活性 96
第五節 各類活性物質的合成基因 98
一、基因篩選的實驗方法 98
二、土壤放線菌基因篩選 100
三、動物糞便放線菌基因篩選 104
四、毒性植物內生放線菌基因篩選 106
五、地衣放線菌基因篩選 107
六、北部灣茅尾海放線菌基因篩選 110
第六節 全基因組分析及基因組挖掘 112
一、測序菌株 112
二、基因組測序流程 113
三、基因組挖掘舉例 113
第七節 超高壓液相色譜 -高分辨質譜-高分辨代謝組學分析 117
第八節 放線菌資源藥用價值綜合評估 119
主要參考文獻 120
第三章 放線菌產生的活性先導化合物 122
**節 動物糞便放線菌 122
一、巴芙洛霉素類成分抗真菌活性和作用機制 123
二、殼梭孢菌素二萜類化合物抗腫瘤作用研究 125
三、violacin A抗炎活性作用機制研究 125
四、borrelidin衍生物抗真菌活性的構效關系和機制研究. 126
第二節 地衣放線菌 128
一、地衣放線菌合成活性次級代謝產物的潛力 129
二、地衣放線菌活性代謝產物的發現 129
第三節 姜氏菌目放線菌 131
一、姜氏菌素的發現 132
二、姜氏菌素抗炎作用機制研究 133
主要參考文獻 134
第四章 放線菌活性物質發現的新方法 137
**節 宏基因組分析 137
一、宏基因組測序與分析 138
二、宏基因組的應用 139
三、利用宏基因組測序技術比較分析亞洲象糞便樣品中的微生物組 141
四、展望 144
第二節 全基因組分析及基因組挖掘 144
一、基于單個基因組的基因組挖掘 144
二、基于多個基因組的基因組挖掘 145
三、宏基因組挖掘 146
四、自動化的基因組挖掘 146
五、分子網絡和全基因組分析輔助天然產物發現 147
六、利用基因組挖掘技術開展部分菌株新化合物分離的實例 148
七、展望 150
第三節 基于生物合成途徑關鍵基因的天然產物產生菌高通量篩選 150
一、建立放線菌基因組 DNA庫. 151
二、基于生物合成途徑特異性探針高通量篩選基因組 DNA庫 151
三、基于生物合成途徑特異性引物實時熒光定量 PCR高通量篩選基因組 DNA庫 153
四、潛力菌株的進一步精選及基因組挖掘研究 153
五、對部分放線菌高通量篩選的研究進展 154
六、展望 156
第四節 激活沉默基因簇技術 156
一、異源表達 156
二、啟動子的引入 157
三、調控基因改造 158
四、高通量激發子篩選與成像質譜偶聯 159
五、表觀遺傳學調控 160
六、核糖體工程 160
七、展望 161
第五節 組合生物合成技術的應用 161
一、組合生物合成在藥物結構多樣性及功能上的應用 161
二、組合生物合成在傳統藥物生產工藝上的應用 162
三、利用組合生物合成方法設計和生產新藥 162
四、展望 163
主要參考文獻 163
第五章 放線菌生物活性物質的生物合成 166
**節 合成生物學的新進展 166
一、CRISPR基因編輯技術 166
二、宿主細胞遺傳改造 167
三、展望 169
第二節 自溶霉素的生物合成 169
一、自溶霉素和格爾德霉素類化合物的結構及活性. 169
二、自溶霉素類化合物的生物合成機制研究 170
三、對自溶霉素生物合成機制的進一步研究 173
四、小結 175
第三節 烯二炔類化合物的生物合成 176
一、烯二炔類化合物的結構及活性 176
二、烯二炔類化合物的生物合成機制 178
三、對烯二炔類化合物生物合成的研究 181
四、小結 182
第四節 AT-less typeⅠPKS化合物雷納霉素和放線酮的生物合成 182
一、雷納霉素 182
二、放線酮 185
三、小結 189
第五節 新型萜類化合物的生物合成 189
一、放線菌萜類化合物的生物合成基因簇 191
二、放線菌萜類化合物生物合成策略 193
三、關于萜類化合物生物合成工作的策略 195
四、總結與展望 197
主要參考文獻 199
第六章 防治三七土傳病害的復合放線菌肥 201
一、有效成分分析 201
二、毒性 201
三、提高保苗率 201
四、與19個單位的藥劑做的同田對比試驗 202
五、復合菌肥對產量的影響 203
六、其他試驗 204
主要參考文獻 204
第七章 微生物藥物研發新思維 206
一、中藥是中華文明的基石之一 206
二、西藥的長處和短處 207
三、微生物藥物開發新思維 207
主要參考文獻 209
支撐材料 210
S1-1 土壤放線菌的組成 210
S1-2 研究的 53種動物名錄 213
S1-3 53種動物糞便純培養放線菌的組成 213
S1-4 地衣內生放線菌的組成 215
S1-5 116種毒性植物和中藥植物內生放線菌及其他細菌的組成（黑體字為新屬） 217
S1-6 各種來源放線菌組成總表 218
S1-7 1991～2019年云南省微生物研究所發表的細菌屬以上新分類單元 223
S2-1 全基因組測序及基因組挖掘菌株信息 226
S3-1 動物糞便放線菌、地衣放線菌、姜氏菌代謝產物 227
本書資助項目明細 235
作者通訊錄 237
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放線菌資源及藥物發現 節選
**章放線菌資源 放線菌是自然生態系統的重要組成部分，其生態作用主要有兩方面，一是產生各種各樣的酶（纖維素酶、糖苷酶、蛋白酶、幾丁質酶等），分解難分解的物質；二是產生各種各樣的抗菌物質，維持生態系統的平衡。這兩類物質都可被人類利用。 放線菌是用于生產抗生素等藥物*多的一類微生物。美國科學家賽爾曼 A.瓦克斯曼（Selman Abraham Waksman）因從土壤放線菌中發現了鏈霉素于 1952年獲得諾貝爾生理學或醫學獎，之后大約 20年的時間里，大量抗生素被發現和應用，抗生素研發處于黃金期。在這之后 63年（2015年），日本科學家大村智（Satoshi ōmura）因其從放線菌中發現的阿維菌素等可作為殺蟲劑在全世界大面積應用而獲諾貝爾生理學或醫學獎，因此有學者認為，這將迎來抗生素開發的又一個黃金期？股貙θ祟惤】岛娃r業、畜牧業的貢獻無論怎樣評價都不為過。放線菌仍然是當今藥物開發中*重要的資源之一。 但是，抗生素等微生物藥物的開發越來越困難。投資大、周期長、風險高，需要多學科密切配合，這些都成為企業難以承受的沉重負擔。新上市的微生物新藥越來越少。有的新藥上市很短時間就產生抗藥性。這些都是微生物藥物開發面臨的困境。 當今，放線菌藥物開發正處于以代謝組學-超高壓高分辨質譜分析為核心，全面利用現代新技術，開拓動物、海洋、沙漠及其他原始環境放線菌研究新領域，發現新藥的時期（圖 1-1）。 圖 1-1 放線菌天然藥物研究的歷程（Polpass and Bhavanath，2016） 研究放線菌資源的分布規律，發現新的放線菌資源，是開發利用相關藥物的重要組成部分及必要前提之一。 云南是我國生物多樣性*豐富的地區之一，位于我國西南邊陲，東連貴州高原及桂西丘陵，南鄰越南、老撾北部低緩丘陵，西接緬甸伊洛瓦底江平原，西北接青藏高原，域內地勢由西北向東南呈階梯式遞降，西北的卡格博峰 6740m，而東南邊境的河口僅 76m。山脈走向、河流分布等差異極大，我國獨特的北南走向山脈橫斷山就在云南西部，堪稱“地質博物館”。地質地貌和氣候植被的復雜性也造就了云南土壤類型的多樣性，磚紅壤、山地紅壤、紅棕壤、山地黃棕壤、山地棕壤、棕色暗針葉土、高山草甸土、荒漠土（極少）等不同類型的土壤分布于不同海拔和地區。***自然保護區面積很大。這些得天獨厚的自然地理環境使得云南土壤微生物資源的分布也錯綜復雜，為天然產物的開發提供了極其豐富的菌種資源庫。 本實驗室（云南大學云南省微生物研究所放線菌實驗室）自 20世紀七八十年代開始對云南不同生態環境的放線菌資源進行研究。近 10年來，綜合運用各種現代技術，研究了云南西雙版納熱帶雨林地區、滇南熱帶常綠闊葉林地區、云南部分河流干熱河谷地區及我國西部地區的土壤放線菌資源；開拓了動物、地衣、有毒植物放線菌資源研究的新領域；還研究了中國南海北部灣海洋放線菌資源，建立了含 6萬多株放線菌資源的菌種庫，F報告部分研究進展。 **節放線菌分離方法的重要性 要開發利用放線菌資源，從中發現具有利用價值的生物活性物質，發現新資源是重要前提之一。對放線菌資源研究的主要方向有兩個：一是特定來源地放線菌的多樣性；二是獲得盡可能多的有藥用價值的未知放線菌資源。為此，分離方法必須從樣品來源、預處理、培養基的設計、抑制劑的選擇和用量、培養時間等綜合配套，以獲得盡可能多樣的未知放線菌為中心，以實驗樣品的采集和分離方法為重點。本節敘述如下相關問題。 一、實驗樣品采集 圍繞探索放線菌的多樣性和獲得盡可能多的未知放線菌的目的，根據我們 50年的經驗，實驗樣品的采集要掌握 3個原則：一是盡可能從原始環境采集樣品，特別是原始森林，其放線菌種類非常豐富；極端環境（極端鹽、堿、酸，高溫、干旱、沙漠、極地、深海等）的未知菌種類也豐富，但難于培養。二是從未研究過的環境或對象（如動物、有毒植物、地衣等）取樣。三是增加樣品來源生態環境的多樣性，植被（植物種類等）、土壤、小氣候、濕度、海拔、坡度、光照、陰坡、陽坡等盡量不同，盡量多點混合。樣品應放在無菌容器中，運輸過程和長期保存應置于 4℃冰箱中。 二、樣品的預處理 預處理的目的在于分離純培養放線菌時減少非放線菌（尤其是樣品中廣泛存在的革蘭氏陰性菌和真菌）的干擾，同時又要保護放線菌？刹捎靡韵路椒。 （1）糞便樣品要用無菌竹簽鋪一薄層于無菌培養皿表面，防止長霉；土樣及其他樣品用無菌紙分裝，均于 25～35℃陰干，可以消除多種細菌干擾。 （2）80～120℃干熱處理 1h；或將稀釋 10倍的樣品提取液 55℃水浴 6min；或將樣品提取液用超聲波（160W，59kHz）處理 40s。減少細菌干擾，增加放線菌出菌率。 （3）樣品提取液也可以用 1.5%苯酚 30℃處理 10min。 三、分離培養基的選擇 放線菌分離培養基的選擇至少要考慮以下幾點。 **，為了從特殊環境、特殊來源的樣品分離到特殊放線菌，培養基的設計要與之相適應，要突出與目的菌有關的因素，如溫度、 pH、鹽濃度及組成。例如，為了分離嗜鹽放線菌，必須在培養基中加 20%以上的各種鹽類，還得考慮培養基成分的可溶性、拮抗性等。 第二，為了分離特定類群的放線菌，例如，分離游動放線菌，可以在培養基中加入甲殼素類物質，或用花粉“誘捕”。 第三，線菌對其產生的抗生素有抗性，所以加入大量抗生素，可以選擇性分離耐受這種抗生素的菌種。 第四，為了增加放線菌的多樣性，尤其是增加稀有放線菌的出菌率，一般應采用多種成分差異較大的培養基，如本室設計的 YIM 7、YIM 212、YIM 91號培養基等。 第五，放線菌的生長較慢，通常情況下，要采用所謂的貧營養培養基。 四、抑制劑 妙用抑制劑是分離放線菌的關鍵之一。一般可用 50～75mg/L的重鉻酸鉀，或制霉菌素 100mg/L、放線酮 50mg/L、萘啶酸 25～40mg/L。為了分離特定類群的放線菌，可以在培養基中加入對目的菌有抗性的抑制劑。例如，分離鏈孢囊放線菌和馬杜拉放線菌時，可加入過量的慶大霉素。 第二節土壤放線菌資源 土壤是放線菌的主要棲息地之一，國際上對土壤放線菌研究的時間*長，成果*豐富。 近10年來，本實驗室利用各種現代技術，對云南代表性地區及海南島至新疆（與胡煥庸線的交叉線）不同生態環境的土壤放線菌資源進行了深入研究（圖 1-2），探索放線菌資源分布的特點和規律，分離、鑒定、保存了近兩萬株土壤放線菌及其 DNA。利用各種現代技術對其利用價值進行評估，獲得了大批值得開發的菌株。以下重點敘述近10年的部分研究成果。 圖 1-2 采樣地區（彩圖請掃封底二維碼） 一、云南西雙版納熱帶雨林自然保護區的土壤放線菌資源 西雙版納位于云南南部，北緯 21°10′～22°24′和東經 101°10′～101°50′，屬橫斷山脈的南延部分。年平均氣溫 23.8℃，年平均降雨量 1500mm。西雙版納熱帶雨林自然保護區，總面積約 24.2萬 hm2，是我國生物多樣性*為豐富的地區之一。熱帶雨林的顯著特點是多板根，多附生植物，多老莖生花結果植物。典型物種有望天樹、篦齒蘇鐵、云南蘇鐵、藤棗、四數木、山桂花、紅椿、土沉香等非常珍貴的植物及亞洲象、鼷鹿、印度野牛、蘇門羚、豹、蜂猴、灰葉猴、綠孔雀、白鷴、犀鳥等珍稀野生動物。采樣的望天樹保護區、勐養保護區、尚勇保護區屬于西雙版納***自然保護區的核心區，植被保存完好（圖 1-3）。從這 3個熱帶雨林采集土壤樣品 150份，共分離放線菌 1158株，用 16S rDNA序列對比，鑒定到屬、種，共獲得純培養放線菌 9目 15科 36屬（表 1-1）。其中游動孢囊菌屬（ Planosporangium）、球孢囊菌屬（ Sphaerisporangium）是非常罕見的放線菌。根據現行共識（與已知種的相似性在 98.8%以下的菌株可能是新種），有多達 36%的菌株是潛在新種，發表新種 6個，可見西雙版納熱帶雨林蘊藏著大量未知放線菌資源。這個地區放線菌分布的顯著特點是多樣性很豐富，未知菌很多。 圖 1-3 西雙版納熱帶雨林（彩圖請掃封底二維碼） 表 1-1 西雙版納熱帶雨林土壤放線菌的組成 二、怒江大峽谷的土壤放線菌資源 怒江大峽谷位于云南西北部怒江傈僳族自治州，是由巍峨高聳的碧羅雪山、高黎貢山、擔當力卡山與奔騰的怒江、獨龍江相間構成的深切割裂大峽谷。怒江大峽谷，在云南省內自北向南超過 300km，平 均深度為 2000m，*深處在貢山丙中洛一帶，達 3500m，被稱為“東方大峽谷”。高山峽谷和溫暖潮濕的 亞熱帶山地氣候極利于動植物的生存繁衍。森林覆蓋率為 44%，有大量珍稀名貴樹種。其中僅中草藥就 有 356種，蘭花多達 140多種，野生動物 474種，如齒蟾、戴帽葉猴、灰腹角雉，只棲息該地。 本研究從怒江大峽谷怒江傈僳族自治州段選取 4組樣區（即丙中洛、石月亮—貢山、福貢—瀘水、瀘水）（圖 1-4）采集土壤樣品，用 9種培養基分離、鑒定放線菌 351株。它們屬于 8目 14科 27屬（表 1-2），其中 Microterricola、Paenarthrobacter、Terrabacter、Williamsia是罕見的種類。 351株放線菌 中有 13株（約占 4%）是潛在新種，潛在新種的比例相對較低。 圖 1-4 怒江大峽谷取樣地區（彩圖請掃封底二維碼） 表 1-2 怒江大峽谷土壤放線菌的組成 純培養和免培養兩種方法的研究結果顯示，研究的地段至少有 75屬的放線菌存在，有36%（27屬）獲得了純培養（圖 1-5和圖 1-6，表 1-3）。還有 11個純培養得到的屬，在高通量（免培養）方法中卻沒有檢測到。為什么約有 10%的放線菌通過純培養都能獲得，免培養法反而檢測不到？*可能的原因是目前高通量測定 16S rDNA個別區段的方法分辨率不夠。 圖 1-5 不同樣品間在屬水平上放線菌的相對豐度（彩圖請掃封底二維碼） 圖 1-6 利用維恩圖比較免培養（獲得 75屬）、純培養方法（27屬）研究結果，其中 16屬在 2種方法的分析中都有發現 表 1-3 用免培養、純培養方法研究怒江大峽谷地區土壤微生物的對照表
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