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哺乳動物細(xì)胞重組蛋白工程 版權(quán)信息
- ISBN：9787122370167
- 條形碼：9787122370167 ; 978-7-122-37016-7
- 裝幀：一般膠版紙
- 冊數(shù)：暫無
- 重量：暫無
- 所屬分類：>>
哺乳動物細(xì)胞重組蛋白工程 內(nèi)容簡介
《哺乳動物細(xì)胞重組蛋白工程》圍繞建立哺乳動物細(xì)胞高效表達(dá)體系所需的關(guān)鍵技術(shù)，從哺乳動物細(xì)胞、基因工程、載體工程、細(xì)胞工程、培養(yǎng)基優(yōu)化、培養(yǎng)工藝和重組蛋白的分離及純化、分析鑒定、重組蛋白糖基化修飾與控制、重組抗體高效表達(dá)與質(zhì)量控制以及重組蛋白技術(shù)產(chǎn)品的研究開發(fā)與管理等方面詳細(xì)介紹了哺乳動物細(xì)胞重組蛋白工程相關(guān)的理論和技術(shù)。 本書內(nèi)容反映了近十年來哺乳動物細(xì)胞重組蛋白工程領(lǐng)域的近期新進(jìn)展，可作為生物制藥相關(guān)專業(yè)本科生、研究生及從事生物制藥的廣大科研工作人員的參考用書。
哺乳動物細(xì)胞重組蛋白工程 目錄
**章 適合重組蛋白表達(dá)的哺乳動物細(xì)胞 1
**節(jié) CHO細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng) 3
一、CHO細(xì)胞歷史與分類 3
二、CHO細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn) 10
三、CHO細(xì)胞培養(yǎng) 13
第二節(jié) HEK293細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng) 17
一、HEK293細(xì)胞的分類與優(yōu)點(diǎn) 17
二、HEK293細(xì)胞培養(yǎng)與鑒定 19
第三節(jié) 其他哺乳動物細(xì)胞 21
一、人源化細(xì)胞系 21
二、非人源化細(xì)胞系 23
參考文獻(xiàn) 24
第二章 基因工程 28
**節(jié) 基因工程簡介 28
一、基因工程概念 28
二、基因工程的發(fā)展史 29
三、基因工程的應(yīng)用和基因工程醫(yī)藥的前景 32
第二節(jié) 哺乳動物細(xì)胞基因工程 35
一、目的基因獲取 36
二、載體系統(tǒng) 37
三、DNA的體外重組 45
四、重組DNA的轉(zhuǎn)化 49
五、重組DNA的篩選與鑒定 49
六、目的基因的表達(dá) 50
參考文獻(xiàn) 52
第三章 載體工程 55
**節(jié) 表達(dá)載體元件的優(yōu)化 56
一、啟動子 56
二、增強(qiáng)子 66
三、多聚腺苷酸尾 67
四、內(nèi)含子 67
五、內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)和F2A 68
六、選擇標(biāo)記 69
七、翻譯與分泌優(yōu)化 69
第二節(jié) 染色質(zhì)調(diào)控元件 71
一、核基質(zhì)附著區(qū) 72
二、遍在染色質(zhì)開放元件 75
三、絕緣子 75
四、穩(wěn)定抗阻遏元件 76
第三節(jié) 靶基因整合 77
一、位點(diǎn)特異性重組系統(tǒng) 77
二、基于核酸酶和DNA修復(fù)途徑的位點(diǎn)特異性整合 79
第四節(jié) 非靶向轉(zhuǎn)基因整合 80
一、轉(zhuǎn)座子 80
二、慢病毒載體 80
參考文獻(xiàn) 81
第四章 轉(zhuǎn)染與篩選 87
**節(jié) 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 87
一、細(xì)胞轉(zhuǎn)染的原理 87
二、細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法 88
第二節(jié) 細(xì)胞轉(zhuǎn)染后的篩選 93
一、瞬時轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 93
二、穩(wěn)定細(xì)胞系的篩選 94
三、CHO細(xì)胞加壓篩選 99
四、HEK293細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng) 102
參考文獻(xiàn) 106
第五章 基因組編輯與細(xì)胞工程 108
**節(jié) 基因組編輯技術(shù) 109
一、概念 109
二、常用的基因組編輯技術(shù) 109
第二節(jié) CRISPR/Cas9技術(shù)在哺乳動物細(xì)胞中的應(yīng)用 117
一、基因的破壞 119
二、位點(diǎn)特異性基因整合 120
三、基因激活或抑制 120
四、基因組水平目的基因敲除的篩選 121
五、基因編輯應(yīng)用實(shí)驗(yàn)設(shè)計 121
六、脫靶分析 124
第三節(jié) CHO細(xì)胞工程 125
一、目的基因 126
二、細(xì)胞工程常用技術(shù) 131
三、抗凋亡工程 134
四、代謝工程調(diào)控 135
五、細(xì)胞骨架與細(xì)胞周期工程 136
六、蛋白質(zhì)翻譯后修飾工程 136
七、蛋白質(zhì)合成工程 138
參考文獻(xiàn) 139
第六章 動物細(xì)胞培養(yǎng)基及其優(yōu)化 144
**節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)基 145
一、細(xì)胞培養(yǎng)基簡介 145
二、動物細(xì)胞培養(yǎng)基的分類 146
三、細(xì)胞培養(yǎng)基的相關(guān)政策與標(biāo)準(zhǔn) 151
四、細(xì)胞培養(yǎng)基的主要成分 162
五、細(xì)胞培養(yǎng)基的理化性質(zhì) 170
六、細(xì)胞培養(yǎng)基的滅菌及儲存 171
七、細(xì)胞培養(yǎng)基的配制 173
第二節(jié) CHO細(xì)胞培養(yǎng)基 177
一、CHO細(xì)胞培養(yǎng)基概況 177
二、CHO細(xì)胞無血清培養(yǎng)基的成分組成及優(yōu)化 179
第三節(jié) 其他細(xì)胞系培養(yǎng)基 182
一、HEK293細(xì)胞系培養(yǎng)基 182
二、HeLa細(xì)胞系培養(yǎng)基 183
參考文獻(xiàn) 184
第七章 培養(yǎng)工藝與大規(guī)模培養(yǎng) 188
**節(jié) 動物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)參數(shù) 189
一、溫度 189
二、通氣 189
三、pH 190
四、滲透壓 190
五、攪拌 190
六、防止污染 190
第二節(jié) 動物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng) 191
一、動物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)反應(yīng)器 191
二、動物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)操作方式 194
參考文獻(xiàn) 231
第八章 哺乳動物細(xì)胞重組蛋白的分離及純化 234
**節(jié) 重組蛋白樣品的預(yù)處理 234
一、透析法 235
二、超濾法 235
三、冷凍干燥法 236
四、雙水相萃取法 236
第二節(jié) 重組蛋白分離純化的原理及方法 237
一、蛋白質(zhì)沉淀 237
二、親和色譜 242
三、高效液相色譜 247
四、分子篩色譜 254
五、離子交換色譜 256
六、其他純化技術(shù) 267
參考文獻(xiàn) 269
第九章 重組蛋白分析與鑒定 271
**節(jié) 重組蛋白理化性質(zhì)分析 272
一、重組蛋白的電荷異質(zhì)性分析 272
二、重組蛋白分子量測定 275
三、重組蛋白的其他性質(zhì) 277
第二節(jié) 重組蛋白定量分析技術(shù) 278
一、標(biāo)準(zhǔn)定量法 279
二、比色分析法 280
三、紫外吸收法 282
四、ELISA測定 282
五、蛋白質(zhì)印跡法 283
第三節(jié) 空間結(jié)構(gòu)分析 283
一、蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu) 284
二、X射線衍射晶體分析 285
三、核磁共振 287
四、生物質(zhì)譜技術(shù) 290
參考文獻(xiàn) 292
第十章 重組蛋白糖基化修飾與控制 295
**節(jié) 糖基化修飾類型及其作用 295
一、糖基化及其修飾類型 295
二、糖基化修飾的生物學(xué)作用 297
第二節(jié) 重組蛋白糖基化工程及其應(yīng)用 299
一、重組蛋白糖基化工程 299
二、重組蛋白糖基化修飾改造策略 299
三、重組蛋白糖基化工程的應(yīng)用 301
第三節(jié) 重組蛋白糖基化控制 302
一、基因組學(xué)水平 302
二、系統(tǒng)生物學(xué)水平 305
三、質(zhì)量控制與評價 306
參考文獻(xiàn) 308
第十一章 重組抗體質(zhì)量控制 311
**節(jié) 重組抗體生產(chǎn)細(xì)胞的質(zhì)量控制 312
一、建構(gòu)工程細(xì)胞和細(xì)胞庫 312
二、細(xì)胞質(zhì)控 313
第二節(jié) 重組抗體的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 313
一、理化對照品的結(jié)構(gòu)驗(yàn)證 313
二、活性標(biāo)準(zhǔn)品的協(xié)作標(biāo)定 314
第三節(jié) 重組抗體生產(chǎn)產(chǎn)品的質(zhì)量控制 315
一、產(chǎn)品質(zhì)量一致性分析 315
二、生物學(xué)活性測定 317
三、蛋白質(zhì)含量及純度測定 318
四、殘留雜質(zhì)分析 319
五、安全性和其他檢測項目 319
第四節(jié) 重組抗體生產(chǎn)實(shí)例——質(zhì)量屬性評價 319
一、還原型毛細(xì)管凝膠電泳測定重組抗體的純度及雜質(zhì) 319
二、分子排阻高效液相色譜測定重組抗體的純度及雜質(zhì) 319
三、分子排阻色譜分離靜態(tài)光散射測定聚體的分子量 320
四、成像毛細(xì)管等電聚焦電泳檢測電荷異質(zhì)性 320
五、圓二色譜分析抗體分子的結(jié)構(gòu) 320
參考文獻(xiàn) 321
第十二章 重組蛋白藥物的研究開發(fā)與管理 322
**節(jié) 重組蛋白藥物研究開發(fā)的一般過程 322
一、上游研究 323
二、中試研究 324
三、臨床前研究 326
四、臨床研究 328
五、新藥臨床研究與生產(chǎn)的申報和審批 330
第二節(jié) 重組蛋白藥物研究開發(fā)的相關(guān)法規(guī) 333
一、重組蛋白技術(shù)產(chǎn)品研究開發(fā)相關(guān)法規(guī)的主要內(nèi)容 333
二、研發(fā)各個環(huán)節(jié)的質(zhì)量管理規(guī)范 337
第三節(jié) 重組蛋白技術(shù)產(chǎn)品的生物安全問題 339
一、重組蛋白技術(shù)產(chǎn)品及其產(chǎn)品生物安全問題的范圍 340
二、重組蛋白技術(shù)產(chǎn)品及其產(chǎn)品生物安全問題的預(yù)防和控制 341
三、生物安全性評價 342
參考文獻(xiàn) 344
附錄 中英文詞匯表 347
**節(jié) CHO細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng) 3
一、CHO細(xì)胞歷史與分類 3
二、CHO細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn) 10
三、CHO細(xì)胞培養(yǎng) 13
第二節(jié) HEK293細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng) 17
一、HEK293細(xì)胞的分類與優(yōu)點(diǎn) 17
二、HEK293細(xì)胞培養(yǎng)與鑒定 19
第三節(jié) 其他哺乳動物細(xì)胞 21
一、人源化細(xì)胞系 21
二、非人源化細(xì)胞系 23
參考文獻(xiàn) 24
第二章 基因工程 28
**節(jié) 基因工程簡介 28
一、基因工程概念 28
二、基因工程的發(fā)展史 29
三、基因工程的應(yīng)用和基因工程醫(yī)藥的前景 32
第二節(jié) 哺乳動物細(xì)胞基因工程 35
一、目的基因獲取 36
二、載體系統(tǒng) 37
三、DNA的體外重組 45
四、重組DNA的轉(zhuǎn)化 49
五、重組DNA的篩選與鑒定 49
六、目的基因的表達(dá) 50
參考文獻(xiàn) 52
第三章 載體工程 55
**節(jié) 表達(dá)載體元件的優(yōu)化 56
一、啟動子 56
二、增強(qiáng)子 66
三、多聚腺苷酸尾 67
四、內(nèi)含子 67
五、內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)和F2A 68
六、選擇標(biāo)記 69
七、翻譯與分泌優(yōu)化 69
第二節(jié) 染色質(zhì)調(diào)控元件 71
一、核基質(zhì)附著區(qū) 72
二、遍在染色質(zhì)開放元件 75
三、絕緣子 75
四、穩(wěn)定抗阻遏元件 76
第三節(jié) 靶基因整合 77
一、位點(diǎn)特異性重組系統(tǒng) 77
二、基于核酸酶和DNA修復(fù)途徑的位點(diǎn)特異性整合 79
第四節(jié) 非靶向轉(zhuǎn)基因整合 80
一、轉(zhuǎn)座子 80
二、慢病毒載體 80
參考文獻(xiàn) 81
第四章 轉(zhuǎn)染與篩選 87
**節(jié) 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 87
一、細(xì)胞轉(zhuǎn)染的原理 87
二、細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法 88
第二節(jié) 細(xì)胞轉(zhuǎn)染后的篩選 93
一、瞬時轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 93
二、穩(wěn)定細(xì)胞系的篩選 94
三、CHO細(xì)胞加壓篩選 99
四、HEK293細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng) 102
參考文獻(xiàn) 106
第五章 基因組編輯與細(xì)胞工程 108
**節(jié) 基因組編輯技術(shù) 109
一、概念 109
二、常用的基因組編輯技術(shù) 109
第二節(jié) CRISPR/Cas9技術(shù)在哺乳動物細(xì)胞中的應(yīng)用 117
一、基因的破壞 119
二、位點(diǎn)特異性基因整合 120
三、基因激活或抑制 120
四、基因組水平目的基因敲除的篩選 121
五、基因編輯應(yīng)用實(shí)驗(yàn)設(shè)計 121
六、脫靶分析 124
第三節(jié) CHO細(xì)胞工程 125
一、目的基因 126
二、細(xì)胞工程常用技術(shù) 131
三、抗凋亡工程 134
四、代謝工程調(diào)控 135
五、細(xì)胞骨架與細(xì)胞周期工程 136
六、蛋白質(zhì)翻譯后修飾工程 136
七、蛋白質(zhì)合成工程 138
參考文獻(xiàn) 139
第六章 動物細(xì)胞培養(yǎng)基及其優(yōu)化 144
**節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)基 145
一、細(xì)胞培養(yǎng)基簡介 145
二、動物細(xì)胞培養(yǎng)基的分類 146
三、細(xì)胞培養(yǎng)基的相關(guān)政策與標(biāo)準(zhǔn) 151
四、細(xì)胞培養(yǎng)基的主要成分 162
五、細(xì)胞培養(yǎng)基的理化性質(zhì) 170
六、細(xì)胞培養(yǎng)基的滅菌及儲存 171
七、細(xì)胞培養(yǎng)基的配制 173
第二節(jié) CHO細(xì)胞培養(yǎng)基 177
一、CHO細(xì)胞培養(yǎng)基概況 177
二、CHO細(xì)胞無血清培養(yǎng)基的成分組成及優(yōu)化 179
第三節(jié) 其他細(xì)胞系培養(yǎng)基 182
一、HEK293細(xì)胞系培養(yǎng)基 182
二、HeLa細(xì)胞系培養(yǎng)基 183
參考文獻(xiàn) 184
第七章 培養(yǎng)工藝與大規(guī)模培養(yǎng) 188
**節(jié) 動物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)參數(shù) 189
一、溫度 189
二、通氣 189
三、pH 190
四、滲透壓 190
五、攪拌 190
六、防止污染 190
第二節(jié) 動物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng) 191
一、動物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)反應(yīng)器 191
二、動物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)操作方式 194
參考文獻(xiàn) 231
第八章 哺乳動物細(xì)胞重組蛋白的分離及純化 234
**節(jié) 重組蛋白樣品的預(yù)處理 234
一、透析法 235
二、超濾法 235
三、冷凍干燥法 236
四、雙水相萃取法 236
第二節(jié) 重組蛋白分離純化的原理及方法 237
一、蛋白質(zhì)沉淀 237
二、親和色譜 242
三、高效液相色譜 247
四、分子篩色譜 254
五、離子交換色譜 256
六、其他純化技術(shù) 267
參考文獻(xiàn) 269
第九章 重組蛋白分析與鑒定 271
**節(jié) 重組蛋白理化性質(zhì)分析 272
一、重組蛋白的電荷異質(zhì)性分析 272
二、重組蛋白分子量測定 275
三、重組蛋白的其他性質(zhì) 277
第二節(jié) 重組蛋白定量分析技術(shù) 278
一、標(biāo)準(zhǔn)定量法 279
二、比色分析法 280
三、紫外吸收法 282
四、ELISA測定 282
五、蛋白質(zhì)印跡法 283
第三節(jié) 空間結(jié)構(gòu)分析 283
一、蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu) 284
二、X射線衍射晶體分析 285
三、核磁共振 287
四、生物質(zhì)譜技術(shù) 290
參考文獻(xiàn) 292
第十章 重組蛋白糖基化修飾與控制 295
**節(jié) 糖基化修飾類型及其作用 295
一、糖基化及其修飾類型 295
二、糖基化修飾的生物學(xué)作用 297
第二節(jié) 重組蛋白糖基化工程及其應(yīng)用 299
一、重組蛋白糖基化工程 299
二、重組蛋白糖基化修飾改造策略 299
三、重組蛋白糖基化工程的應(yīng)用 301
第三節(jié) 重組蛋白糖基化控制 302
一、基因組學(xué)水平 302
二、系統(tǒng)生物學(xué)水平 305
三、質(zhì)量控制與評價 306
參考文獻(xiàn) 308
第十一章 重組抗體質(zhì)量控制 311
**節(jié) 重組抗體生產(chǎn)細(xì)胞的質(zhì)量控制 312
一、建構(gòu)工程細(xì)胞和細(xì)胞庫 312
二、細(xì)胞質(zhì)控 313
第二節(jié) 重組抗體的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 313
一、理化對照品的結(jié)構(gòu)驗(yàn)證 313
二、活性標(biāo)準(zhǔn)品的協(xié)作標(biāo)定 314
第三節(jié) 重組抗體生產(chǎn)產(chǎn)品的質(zhì)量控制 315
一、產(chǎn)品質(zhì)量一致性分析 315
二、生物學(xué)活性測定 317
三、蛋白質(zhì)含量及純度測定 318
四、殘留雜質(zhì)分析 319
五、安全性和其他檢測項目 319
第四節(jié) 重組抗體生產(chǎn)實(shí)例——質(zhì)量屬性評價 319
一、還原型毛細(xì)管凝膠電泳測定重組抗體的純度及雜質(zhì) 319
二、分子排阻高效液相色譜測定重組抗體的純度及雜質(zhì) 319
三、分子排阻色譜分離靜態(tài)光散射測定聚體的分子量 320
四、成像毛細(xì)管等電聚焦電泳檢測電荷異質(zhì)性 320
五、圓二色譜分析抗體分子的結(jié)構(gòu) 320
參考文獻(xiàn) 321
第十二章 重組蛋白藥物的研究開發(fā)與管理 322
**節(jié) 重組蛋白藥物研究開發(fā)的一般過程 322
一、上游研究 323
二、中試研究 324
三、臨床前研究 326
四、臨床研究 328
五、新藥臨床研究與生產(chǎn)的申報和審批 330
第二節(jié) 重組蛋白藥物研究開發(fā)的相關(guān)法規(guī) 333
一、重組蛋白技術(shù)產(chǎn)品研究開發(fā)相關(guān)法規(guī)的主要內(nèi)容 333
二、研發(fā)各個環(huán)節(jié)的質(zhì)量管理規(guī)范 337
第三節(jié) 重組蛋白技術(shù)產(chǎn)品的生物安全問題 339
一、重組蛋白技術(shù)產(chǎn)品及其產(chǎn)品生物安全問題的范圍 340
二、重組蛋白技術(shù)產(chǎn)品及其產(chǎn)品生物安全問題的預(yù)防和控制 341
三、生物安全性評價 342
參考文獻(xiàn) 344
附錄 中英文詞匯表 347
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哺乳動物細(xì)胞重組蛋白工程 作者簡介
王天云，博士，教授，博士生導(dǎo)師。新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院“太行學(xué)者”特聘教授。河南省重組藥物蛋白表達(dá)系統(tǒng)國際聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室及生物創(chuàng)新藥物工程技術(shù)研究中心主任，中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)會理事，河南省生物化學(xué)與分子生物學(xué)會理事長，教育部“長江學(xué)者”，國家科技進(jìn)步獎評審專家。主持國家自然科學(xué)基金4項，省重大科技專項1項，創(chuàng)新杰出人才項目1項；參與國家“863”課題、國家重大科技專項各1項。獲省科技進(jìn)步二等獎2項、三等獎1項。申請國家發(fā)明專利35項，已授權(quán)16項。發(fā)表研究論文86篇，其中SCI收錄53篇，被引1076次。長期從事哺乳動物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的研究，建立了國際水平的哺乳細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)，包括高效表達(dá)載體、細(xì)胞系及培養(yǎng)基。已實(shí)現(xiàn)技術(shù)轉(zhuǎn)移2項，專利轉(zhuǎn)化8項。
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