中圖網(wǎng)小程序
一鍵登錄
更方便
>
>>
醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)-(供基礎(chǔ).臨床.預(yù)防.口腔醫(yī)學(xué)類專業(yè)用)(第2版)
包郵 醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)-(供基礎(chǔ).臨床.預(yù)防.口腔醫(yī)學(xué)類專業(yè)用)(第2版)
作者：左囗
所屬叢書：
全國高等學(xué)校配套教材
開本：
16開
頁數(shù)：
77
本類榜單：醫(yī)學(xué)銷量榜
本類五星書更多>
-
>
中醫(yī)入門必背歌訣
-
>
醫(yī)驗(yàn)集要
-
>
尋回中醫(yī)失落的元神2:象之篇
-
>
補(bǔ)遺雷公炮制便覽 (一函2冊)
-
>
人體解剖學(xué)常用詞圖解(精裝)
-
>
神醫(yī)華佗(奇方妙治)
-
>
(精)河南古代醫(yī)家經(jīng)驗(yàn)輯
醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)-(供基礎(chǔ).臨床.預(yù)防.口腔醫(yī)學(xué)類專業(yè)用)(第2版) 版權(quán)信息
- ISBN：9787117101783
- 條形碼：9787117101783 ; 978-7-117-10178-3
- 裝幀：暫無
- 冊數(shù)：暫無
- 重量：暫無
- 所屬分類：>>
醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)-(供基礎(chǔ).臨床.預(yù)防.口腔醫(yī)學(xué)類專業(yè)用)(第2版) 節(jié)選
bsp; 前 言
盡管全國有許多醫(yī)學(xué)院校的各類醫(yī)學(xué)專業(yè)已開設(shè)了“醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)”課程，但相應(yīng)
的“醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)(或?qū)嵙?xí))課”卻顯得相對薄弱。一方面受現(xiàn)實(shí)條件的限制(包
括課時(shí)、學(xué)生數(shù)、實(shí)驗(yàn)室條件等等)，以至于不能滿足開設(shè)醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)(實(shí)習(xí))
的實(shí)際需要；另一方面醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)(實(shí)習(xí))所涉及的范圍廣泛(宏觀的內(nèi)容可涉
及人群或個(gè)體、微觀的內(nèi)容則可達(dá)細(xì)胞、分子)，這使其在一個(gè)具體的教學(xué)實(shí)驗(yàn)室不
易得到實(shí)施。然而其本身的性質(zhì)決定了實(shí)驗(yàn)(實(shí)習(xí))教學(xué)在醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)課程學(xué)習(xí)中具
有重要的意義，因此，在可能的情況下，我們提倡應(yīng)積極爭取實(shí)驗(yàn)課的開設(shè)。
作為橫跨基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床醫(yī)學(xué)的橋梁課程，“醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)”既帶有基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)
的性質(zhì)，也具有臨床醫(yī)學(xué)實(shí)習(xí)的特點(diǎn)，但我國絕大多數(shù)醫(yī)學(xué)院校的醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)教學(xué)是
由從事基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)教學(xué)和研究的老師擔(dān)任的，故無法實(shí)現(xiàn)醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)所具有臨床性質(zhì)的
教學(xué)。我們在編寫這本《醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》時(shí)，試圖兼顧基礎(chǔ)和臨床兩個(gè)方面，
意在鼓勵有條件的學(xué)校加強(qiáng)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床醫(yī)學(xué)老師的合作，使醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)教學(xué)走進(jìn)
病房、門診，走進(jìn)社區(qū)。
《醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》包括：遺傳病的家系分析、群體遺傳分析相關(guān)的實(shí)驗(yàn)、
染色體分析相關(guān)的實(shí)驗(yàn)、基因檢測相關(guān)的實(shí)驗(yàn)、醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)綜合實(shí)驗(yàn)和附錄等六章，
分別代表醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)的群體、家系、細(xì)胞、分子等四個(gè)層次和一個(gè)綜合性實(shí)驗(yàn)，
每一個(gè)層次又包括若干個(gè)具體的實(shí)驗(yàn)，在使用本教材時(shí)，可根據(jù)實(shí)際情況，選擇其中
的一些實(shí)驗(yàn)作為代表進(jìn)行教學(xué)。書后的附錄包括了一些醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)技術(shù)上的進(jìn)展，供
有興趣的使用者學(xué)習(xí)時(shí)參考。
對于某一個(gè)具體的實(shí)驗(yàn)而言，每一個(gè)實(shí)驗(yàn)室可能有其自己的方法，本教材中所提
供的只是一些基本的方法，在具體教學(xué)中，師生可根據(jù)自己的實(shí)際情況加以修改。
本教材作為全國高等醫(yī)藥規(guī)劃教材《醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)》(第5版)的配套教材，在編
寫過程中，得到了復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院的大力支持，謹(jǐn)表衷心感謝。對教材中所存在
的不當(dāng)之處，希望大家及時(shí)指出，以便改進(jìn)。
左伋
2008年3月
基因檢測相關(guān)的實(shí)驗(yàn)
人類基因組計(jì)劃的完成以及后基因組學(xué)研究的不斷深入，標(biāo)志著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)展
已逐步進(jìn)入“基因組醫(yī)學(xué)”的時(shí)代。疾病分子機(jī)制的研究也將為包括疾病的分子診
斷、分子治療在內(nèi)的“分子醫(yī)學(xué)”的發(fā)展提供動力。其中分子診斷技術(shù)已在許多臨床
領(lǐng)域得到運(yùn)用，這必將為二十一世紀(jì)人類醫(yī)療保健帶來福音。因此，從分子水平上了
解醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)相關(guān)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)對于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)教育與醫(yī)學(xué)實(shí)踐具有十分重要的意義。
實(shí)驗(yàn)4=1 人基因組DNA的提取
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?br />
1．了解提取DNA的原理。
2．掌握人外周血基因組DNA的提取方法。
二、實(shí)驗(yàn)原理
從不同組織細(xì)胞或血細(xì)胞中提取高質(zhì)量的DNA是進(jìn)行基因診斷的先決條件。制
備高質(zhì)量DNA的原則是：①將蛋白質(zhì)、脂類、糖類等物質(zhì)分離干凈；②盡可能保持
DNA分子的完整性。
在提取DNA的反應(yīng)體系中，蛋白酶K為廣譜蛋白酶，其主要特征是在十二烷基
磺酸鈉(SDS)和乙二胺四乙酸(EDTA)存在的情況下保持很高的活性，可將蛋白
質(zhì)降解成小的多肽和氨基酸。哺乳動物DNA的提取一般是在有EDTA及SDS一類
的去污劑存在下進(jìn)行的，SDS是離子型表面活性劑，主要作用是：①破壞細(xì)胞膜及
核膜；②解聚細(xì)胞中的核蛋白；③與蛋白質(zhì)結(jié)合，使蛋白質(zhì)變性而沉淀下來；④抑制
DNA酶活性，使DNA分子盡量完整地分離出來。經(jīng)典的提取的方法為酚一氯仿法，
該法提到的DNA純度較高，可用于Southern分析和構(gòu)建基因組DNA文庫。
三、實(shí)驗(yàn)用品和材料
(一)試劑
1．抗凝劑EDTA 2％(W／V)生理鹽水抗凝劑。稱取2g乙二胺四乙酸二鈉
0．85g NaCl，加雙蒸水至100ml。本試劑lml可抗10ml全血凝結(jié)。亦可用醫(yī)用ACD
抗凝劑抗凝。肝素能抑制限制性內(nèi)切酶活性，因此一般不用肝素抗凝。
2．TES溶液15 mmol／LTris-HCl(pH8．0)，15mmol／LEDTA(pH8．0)，
15mmol／L NaCl。用1mol／LTris-HCl(pH8．0)，0．5mmol／LEDTA(pH8．0)，
3mol／L NaCl稀釋成15mmol／LSTE溶液。
3．10％(W／V)SDS。
4．15mmol／LTES飽和酚重蒸酚在熱水浴(100℃)中溶化后加人l／3體積的
15mmol／LTES溶液，充分混勻后，放冰箱中靜置6小時(shí)以上。酚層在下，水層在
上。吸掉上層多余的TES溶液，冰箱中避光保存?zhèn)溆谩榉乐狗颖谎趸赏杉?br />
少量8一羥基喹啉(2～5mmol／L）
5．氯仿／異戊醇(24：1，V／V)。現(xiàn)用現(xiàn)配。
6．蛋白酶K(]0mg／ml)。
7．TE溶液10mmol／LTris-HCl，1mmol／LEDTA(pH7．5)。用lmol／LTris-
HCl(pH7．5)，0．5mol／LEDTA(pH 7．5～8．0)稀釋配制。
(二)器材
Eppendorf管、離心管、吸管、加樣器、槍頭、離心機(jī)、水浴箱、紫外分光光度
計(jì)、電泳儀、電泳槽。
四、實(shí)驗(yàn)方法和步驟
(一)酚一氯仿法
1．白細(xì)胞的分離
(1)抗凝血用l～2倍的生理鹽水或磷酸緩沖的生理鹽水(PBS)稀釋，混合好。
(2)在50ml離心管中加入1倍體積淋巴細(xì)胞分離液，在上面仔細(xì)鋪一層兩倍體
積已稀釋的血液。
(3)在室溫以2000rpm離心15～20分鐘，紅細(xì)胞應(yīng)沉于管底，而白色的淋巴細(xì)
胞應(yīng)分布于上層血漿與下層淋巴細(xì)胞分離液的界面。
(4)吸棄血漿，小心吸取淋巴細(xì)胞層。直至把淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)移完全。
(5)用生理鹽水或PBS洗淋巴細(xì)胞兩次。
(6)*后得到的淋巴細(xì)胞沉淀，可立即用于DNA的提取，或凍存于超低溫冰箱
中，直至使用。
2．DNA的提取
(1)在5ml 15mol／LTES中懸浮白細(xì)胞，加蛋白酶K 250～3501ug(50～70μg／
ml)，10％SDS至終濃度0．5％(加260μ1左右)。
(2)充分混勻，放50。C水浴中保溫3～5小時(shí)。其間振搖2～3次。
(3)冷卻至4℃，加等體積15mol／LTES飽和酚。
(4)輕輕搖，使水相和酚層充分混勻。
(5)4℃ 5000～8000rpm離心15～20分鐘。此時(shí)DNA溶液在上層，酚位于下
層，中間是變性蛋白層。
(6)用吸管小心吸取上層黏稠溶液，移至另一離心管。注意盡量不要帶出中間蛋
白層。
(7)DNA溶液再加等體積15mol／LTES飽和酚抽提一次，按(5)、(6)離心并
吸至另一離心管。
(8)加等體積氯仿／異戊醇，按步驟(4)、(5)抽提。離心5分鐘。
(9)吸出DNA溶液后，再步驟(8)抽提一次。
(10)用吸管將DNA溶液移至Eppendorf管中，冰浴至0℃。
(11)加2．5倍體積95％冷乙醇。振搖，可見DNA白色沉淀析出。
(12)用75％冷乙醇清洗3～4次。
(13)室溫干燥或冷凍干燥DNA。
(14)加適量TE溶液溶解DNA。
(二)鹽析法
1．取2～3ml新鮮或凍存的EDTA抗凝血，置于10ml的離心管中。
2．加2～3倍體積的紅細(xì)胞裂解液(blood buffer)：0．01mol／L Tris-HCl
pH7．6、0．01mol／LNaCl、0．005mol／LMgCl2，劇烈振蕩15秒，冰浴15分鐘。
2000rpm離心10分鐘。
3．移棄上清液，約留0．5ml，再用同體積的紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞，2000rpm
離心1()分鐘。
4．重復(fù)步驟2，直到液體發(fā)白。
5．收集沉淀用生理鹽水洗滌2次，收集白細(xì)胞沉淀，并轉(zhuǎn)至1．5ml的Eppendorf
離心管中。
6．沉淀中加入300rd TE溶液混勻，再加15}tl 10％的SDS及蛋白酶K至終濃度
0．5mg／mI，37。C過夜消化。
7．加入l／3體積的過飽和NaCl，輕輕搖勻1分鐘，5000rpm，離心10分鐘，取
上清液移人一新的Eppendorf管中。
8．加入2～3倍體積的無水乙醇，沿管壁慢滴入，可見絮狀物析出(即DNA)。
9．挑出DNA，用75％酒精漂洗絮狀物，12000rpm離心3分鐘。
10．棄去酒精。室溫自然干燥后，加100btl無菌雙蒸水溶解DNA。
11．測定DNA的濃度或4℃冰箱保存。
(三)DNA的鑒定及定量
1．比色法取DNA溶液20μl，用蒸餾水稀釋至400μl。以蒸餾水做空白，在紫
外分光光度計(jì)上測定OD260、0D280、OD230三個(gè)數(shù)值。對于純DNA，1OD260＝50μg／
ml DNA，因此DNA含量應(yīng)為：50μg／ml×OI)26。×稀釋倍數(shù)。
按上述稀釋20倍樣品讀數(shù)，50μg／ml×20倍等于lmg／ml，因此所讀出的0D260
數(shù)值即為樣品稀釋前的濃度(mg／ml）。例如OD260數(shù)值為0．54，則DNA濃度為
0．54mg／ml。根據(jù)含量計(jì)算總DNA的量。
書友推薦
- >
月亮虎
- >
伯納黛特,你要去哪(2021新版)
- >
中國人在烏蘇里邊疆區(qū):歷史與人類學(xué)概述
- >
小考拉的故事-套裝共3冊
- >
名家?guī)阕x魯迅:朝花夕拾
- >
經(jīng)典常談
- >
李白與唐代文化
- >
我從未如此眷戀人間
本類暢銷
