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生物化學與分子生物學實驗指導 版權信息
- ISBN：9787030724915
- 條形碼：9787030724915 ; 978-7-03-072491-5
- 裝幀：一般膠版紙
- 冊數：暫無
- 重量：暫無
- 所屬分類：>
生物化學與分子生物學實驗指導 本書特色
本實驗指導是依據普通高等醫藥院校的教學大綱要求及在長期的生物化學和分子生物學教學中積累的經驗編寫而成。
生物化學與分子生物學實驗指導 內容簡介
本教材根據普通高等醫藥院校生物化學與分子生物學教學大綱的要求，針對生物化學與分子生物學所涉及的主要內容進行編寫。全書共分四部分，**部分為基本實驗技術（含分光光度法、離心技術、電泳技術和層析技術），第二部分為生物化學實驗（含21個實驗），第三部分為分子生物學實驗（含7個實驗），第四部分為綜合性實驗和設計性實驗（含2個實驗）。每個實驗包括目的要求、實驗原理、主要材料與試劑、主要器材、操作步驟、注意事項、思考題七部分，具有較強的實用性和可操作性。
生物化學與分子生物學實驗指導 目錄
目錄
**篇 基本實驗技術 1
**章 常用儀器使用技術 1
第二章 分光光度法 7
第三章 離心技術 13
第四章 電泳技術 21
第五章 層析技術 29
第二篇 生物化學實驗 37
實驗須知 37
實驗一 蛋白質的沉淀反應 40
實驗二 蛋白質的等電點 44
實驗三 核糖核酸的提取及成分鑒定 46
實驗四 影響酶作用的因素 48
實驗五 麥芽淀粉酶的提取和鑒定 54
實驗六 維生素C的定量測定 56
實驗七 飽食、饑餓對肝糖原含量的影響 61
實驗八 血糖的測定 63
實驗九 胰島素和腎上腺素對血糖濃度的影響 71
實驗十 劇烈運動對尿中乳酸含量的影響 73
實驗十一 血清脂蛋白瓊脂糖凝膠電泳 77
實驗十二 脂肪酸β-氧化與酮體的生成和利用 79
實驗十三 血清蛋白乙酸纖維素薄膜電泳 83
實驗十四 血清丙氨酸轉氨酶活性的測定 86
實驗十五 血漿二氧化碳結合力測定 92
實驗十六 茯苓多糖、豬苓多糖的水解和鑒定 94
實驗十七 標準曲線及回收實驗 96
實驗十八 氨基酸的薄層層析法 98
實驗十九 胡蘿卜素的柱層析分離法 101
實驗二十 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE） 103
實驗二十一 兔血清白蛋白的提取與鑒定 111
第三篇 分子生物學實驗 113
實驗一 分子生物學實驗須知和基本操作技術 113
實驗二 真核生物基因組DNA的提取 115
實驗三 基因組DNA的酶切與鑒定 119
實驗四 聚合酶鏈反應（PCR） 123
實驗五 Southern印跡法 126
實驗六 Northern印跡法 129
實驗七 Western印跡法 133
第四篇 綜合性實驗和設計性實驗 138
實驗一 基于中醫“腎陽虛證”蛋白差異表達分析的虛擬仿真實驗 138
實驗二 瘦素基因的鑒定和分析 142
附表 實驗開題報告 145
**篇 基本實驗技術 1
**章 常用儀器使用技術 1
第二章 分光光度法 7
第三章 離心技術 13
第四章 電泳技術 21
第五章 層析技術 29
第二篇 生物化學實驗 37
實驗須知 37
實驗一 蛋白質的沉淀反應 40
實驗二 蛋白質的等電點 44
實驗三 核糖核酸的提取及成分鑒定 46
實驗四 影響酶作用的因素 48
實驗五 麥芽淀粉酶的提取和鑒定 54
實驗六 維生素C的定量測定 56
實驗七 飽食、饑餓對肝糖原含量的影響 61
實驗八 血糖的測定 63
實驗九 胰島素和腎上腺素對血糖濃度的影響 71
實驗十 劇烈運動對尿中乳酸含量的影響 73
實驗十一 血清脂蛋白瓊脂糖凝膠電泳 77
實驗十二 脂肪酸β-氧化與酮體的生成和利用 79
實驗十三 血清蛋白乙酸纖維素薄膜電泳 83
實驗十四 血清丙氨酸轉氨酶活性的測定 86
實驗十五 血漿二氧化碳結合力測定 92
實驗十六 茯苓多糖、豬苓多糖的水解和鑒定 94
實驗十七 標準曲線及回收實驗 96
實驗十八 氨基酸的薄層層析法 98
實驗十九 胡蘿卜素的柱層析分離法 101
實驗二十 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE） 103
實驗二十一 兔血清白蛋白的提取與鑒定 111
第三篇 分子生物學實驗 113
實驗一 分子生物學實驗須知和基本操作技術 113
實驗二 真核生物基因組DNA的提取 115
實驗三 基因組DNA的酶切與鑒定 119
實驗四 聚合酶鏈反應（PCR） 123
實驗五 Southern印跡法 126
實驗六 Northern印跡法 129
實驗七 Western印跡法 133
第四篇 綜合性實驗和設計性實驗 138
實驗一 基于中醫“腎陽虛證”蛋白差異表達分析的虛擬仿真實驗 138
實驗二 瘦素基因的鑒定和分析 142
附表 實驗開題報告 145
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生物化學與分子生物學實驗指導 節選
**篇 基本實驗技術 **章 常用儀器使用技術 一、常用玻璃儀器的洗滌 生物化學實驗中，常由于玻璃儀器或瓷器表面存在污漬或雜質而影響結果的準確性，因此玻璃儀器的正確洗滌非常重要。 在洗滌玻璃儀器時，需根據實驗項目對玻璃儀器的潔凈要求，采用適宜的潔凈劑和洗滌方法。實驗室常用的潔凈劑包括肥皂、洗衣粉、去污粉、洗液、有機溶劑等。量杯、量筒、燒杯、試劑瓶、三角燒瓶等玻璃儀器上一般污漬可用肥皂、洗衣粉、去污粉直接刷洗。如需清洗結垢或移液管、滴定管、培養瓶等不便刷洗的玻璃儀器，則可選用洗液。甲苯、二甲苯等有機溶劑主要用于清除油污。乙醇、丙酮等有機溶劑具備易于揮發的特點，故可用于潔凈玻璃儀器的快速干燥。清洗含放射性元素的器皿，必須選用特殊的清洗液。 （一）常用洗液的配制及使用方法 1.強酸氧化劑洗液 實驗室常用的強酸氧化劑洗液為鉻酸洗液，有特別強的清除有機物和油污的能力，又不會腐蝕玻璃儀器。因此，實驗室中鉻酸洗液的使用*廣泛。 （1）鉻酸洗液的清洗原理：鉻酸洗液由重鉻酸鉀（K2Cr2O7）和濃硫酸配制而成。重鉻酸鉀與濃硫酸反應，生成不穩定的鉻酸，鉻酸進一步生成暗紅色的鉻酸酐（CrO3），鉻酸酐具有很強的氧化性，和濃硫酸中的三氧化硫共同發揮清潔效力。但當鉻酸酐分解為綠色的三氧化二鉻時，失去清潔效力，則洗液不宜再使用。 （2）鉻酸洗液的配制：按重鉻酸鉀∶水∶濃硫酸 =1∶ 2∶20 的比例配制。如稱取研細的重鉻酸鉀 10g，60℃條件下溶解于 20ml 蒸餾水中，然后少量多次加入濃硫酸 180ml，使洗液終體積達到 200ml。待暗紅色澄清溶液冷卻后儲存于有蓋的磨口瓶內，貼上標簽。加入濃硫酸時應沿燒杯壁緩慢加入，邊加邊攪拌，避免局部熱量猛增引發爆炸，也可防止暗紅色鉻酸酐析出結晶。此外，配液過程中務必注意安全，需穿戴好耐酸堿乳膠手套和皮圍裙，防止洗液濺到皮膚或衣物上，萬一不慎濺到皮膚上應立即用大量清水沖洗。 （3）鉻酸洗液的使用：使用洗液前需將玻璃儀器用自來水沖洗數次，并將儀器上的水分盡量除去再放洗液中浸泡，以免洗液被儀器上的水分稀釋，降低清潔效力。儀器浸泡數小時后取出，先用少量自來水沖洗儀器，收集沖洗液作廢水處理，再用大量自來水充分清洗至儀器無水珠倒掛為止，*后用少量蒸餾水沖洗數次，晾干備用。 （4）鉻酸洗液使用注意事項：浸泡儀器時，應避免洗液飛濺到皮膚或衣物上，防止灼傷皮膚或損壞衣物。從洗液缸中取出浸泡儀器前，需穿戴好耐酸堿乳膠手套和皮圍裙。**次沖洗儀器的自來水不能直接倒入下水道，長久會腐蝕下水道，應倒入酸性廢液缸，再用硫酸亞鐵和廢堿液處理。 （5）廢液的處置：廢液的主要成分是硫酸鉻、硫酸等。當鉻酸洗液由紅棕色變為黑綠色時，說明被還原，此時洗液已失去洗滌效能。為避免造成環境污染，首先在廢液中加入硫酸亞鐵，將殘留有毒的六價鉻還原成無毒的三價鉻，再加入廢堿液使三價鉻轉化為Cr（OH）3沉淀，棄入指定廢物桶。 2.其他洗滌液的使用方法 （1）濃鹽酸：可洗去水垢或某些無機鹽沉淀。 （2）5%～10%磷酸鈉溶液：可洗滌油污物。 （3）30% 硝酸溶液：洗滌二氧化碳測定儀及微量滴管。 （4）5%～10%乙二胺四乙酸二鈉溶液：加熱煮沸可洗脫玻璃儀器內壁的白色沉淀物。 （5）尿素洗滌液：為蛋白質的良好溶劑，適用于洗滌盛裝過蛋白質制劑及血樣的容器。 （6）有機溶劑：如丙酮、乙醚、乙醇等可用于洗脫油脂、脂溶性染料污痕等，二甲苯可洗脫油漆污垢。 （7）含氫氧化鉀的乙醇溶液和含有高錳酸鉀的氫氧化鈉溶液：是兩種強堿性的洗滌液，對玻璃儀器的侵蝕性很強，可清除容器內壁污垢，洗滌時間不宜過長，使用時應小心操作，必要時佩戴護具。 （二）玻璃儀器的洗滌 全新玻璃儀器表面附著有游離堿質，可先用肥皂水刷洗，再用流水沖洗，浸泡于1%～2%HCl溶液中過夜，取出后再用流水沖洗，*后用蒸餾水沖洗2～3次，于干燥箱中烤干或自然晾干備用。 使用過的玻璃器皿表面可能存在油污、蛋白質污漬和雜質等，其洗滌方法很多，應根據實驗要求、儀器類型、污物的性質、沾污程度來選擇。常用的洗滌方法如下。 1.一般玻璃儀器洗滌 一般玻璃儀器如燒杯、三角燒杯、試劑瓶、試管等，可用特制的毛刷仔細洗滌儀器的內外部，如儀器壁上有油污或其他雜質未洗掉，則可用肥皂或碳酸鈉溶液洗滌，再用自來水及少量蒸餾水將儀器沖洗干凈，洗至容器內壁光潔不掛水珠為止，*后用蒸餾水沖洗2～3次，晾干備用。 2.容量儀器洗滌 容量儀器如吸量管、容量瓶、滴定管等即用即洗，勿使污漬干涸，用流水或洗衣粉水沖洗，干燥后放入鉻酸洗液中浸泡數小時，然后用自來水反復沖洗，將洗液完全洗去，*后用蒸餾水沖洗2～3次，晾干或烘干備用。 3.吸收池洗滌 吸收池用畢立即用自來水反復沖洗干凈，如不干凈可用 HCl 溶液或適當溶劑沖洗（避免用較強的堿液或強氧化劑清洗），再用自來水沖洗干凈。切忌用試管刷或粗糙的布或紙擦洗，以保護吸收池透光性，沖洗后倒置晾干備用。 （三）玻璃儀器的干燥 可根據實驗的不同要求，采用以下方法干燥洗凈的玻璃儀器。 1.自然晾干 不急用的儀器在洗凈后，可倒置在干凈的實驗柜內或儀器架上任其自然干燥。 2.烘干 放入烘箱前要先把水瀝干，放置儀器時，儀器口應朝下。 3.熱（冷）風吹干 急于干燥的儀器可先用少量乙醇、丙酮搖洗，再用電吹風或氣流烘干器吹干，即可快速干燥。不能高溫烘干的儀器也可采用吹干的方法。 二、基本度量儀器的使用 生物化學與分子生物學實驗使用的度量儀器主要包括計量液體體積的玻璃器皿，如量筒、容量瓶、滴定管、刻度吸量管、刻度離心管等，以及定量轉移液體的移液器或移液管。 （一）量筒 量筒是度量液體體積的基本儀器之一。量取液體時，如準確度要求不嚴格，則可用量筒。常見量筒的容量有 10ml、20ml、50ml、100ml、500ml 等，可根據需要來選用。 用量筒量取液體，讀數的準確尤為重要。讀取刻度時，應讓量筒垂直，通常應使視線與量筒內液面的弧形*低點處于同一水平面上，偏高或偏低都會產生誤差。量筒既不能作反應器用，也不能盛裝熱的液體。 （二）容量瓶 容量瓶用于配制一定濃度的標準溶液或試樣溶液。頸上刻有標線，表示在20℃條件下，溶液盛裝至標線的容積。有10ml、25ml、50ml、100ml、250ml、500ml、1000ml、2000ml幾種規格，并有白色、棕色兩種顏色。容量瓶使用前應先檢查容量瓶的瓶塞是否漏水，瓶塞應系在瓶頸上，不得任意更換。瓶內壁不得掛有水珠，所稱量的任何固體物質都必須先在小燒杯中溶解或加熱溶解，待冷卻至室溫后，才能轉移到容量瓶中。 （三）移液器 移液器是移取溶液時所用工具。生物化學與分子生物學實驗中常用的是空氣置換式移液器，其工作原理是通過彈簧的伸縮控制活塞的上下運動，以完成取液和放液的操作。 下壓活塞推動部分空氣從移液器下端排出，放開彈簧，在大氣壓和溶液靜壓的共同作用下，一定量的溶液進入吸頭，再下壓活塞推動空氣排出溶液。 1.移液器的分類 根據量程設定的方式不同，移液器可分為固定量程移液器和可調式移液器。其中可調式移液器應用較為廣泛，其規格包括0.5～10μl、2～20μl、10～100μl、20～200μl、100～1000μl、1000～5000μl等。此外，為提高實驗效率，還可選擇多通道移液器實現多個樣本的同時轉移，也可選擇吸頭間距可調的多通道移液器在不同容器類型（如離心管和工作板）之間轉移樣品。 2.移液器使用方法 （1）選擇合適量程的移液器。 （2）轉動旋鈕調節量程，注意避免移液器顯示容量值超過移液器的可調范圍。 （3）采用旋轉安裝法裝配吸頭，檢查移液器氣密性，使用新吸頭時需預洗。 （4）取液前，液體需在室溫條件下平衡一段時間。正向取液時將按鈕壓至**停點，將移液器垂直伸入液面下，控制好深度，然后緩慢勻速地松開按鈕，吸入液體，稍作停留，再將吸頭提離液面，貼壁停留2～3s，使吸頭尖端外側的液滴滑落。血液等較黏稠的液體則需進行反向取液，即將按鈕壓至第二停點，按上述方法取液（圖1-1-1）。 （5）放液時，將吸頭尖端貼壁。如取液時采用正向取液，先將按鈕壓至**停點，稍作停頓，再將按鈕壓至第二停點，檢查吸頭是否有殘留液體。如取液時采取反向取液，則勻速地將按鈕推至**停點即可。 （6）取液結束后，需將刻度調至*大，讓彈簧回復以延長移液器使用壽命。 （四）移液管、吸量管 移液管和吸量管為玻璃儀器，可準確移取一定體積的溶液。 1.分類 （1）奧氏吸量管：移液管中間膨大者，又稱為胖肚移液管。供準確量取0.5ml、1ml、2ml液體時用。每根奧氏吸量管上只有一個刻度，放液時必須吹出殘留在吸量管尖端的液體，主要用于量取黏滯系數大的液體。 （2）移液管：又稱單標線吸量管，供準確量取5ml、10ml、25ml等較多體積液體時用。 每根吸量管上只有一個刻度，放液后，將吸量管管尖在容器內壁上繼續停留15s，注意不要吹出尖端*后的部分。 （3）分度吸量管：直型移液管，管上有刻度，規格包括1ml、2ml、5ml、10ml等。 供移取刻度范圍內任意體積的液體時用，分為全流出式與不完全流出式。全流出式一般包括尖端部分，欲將所量取液體全部放出時，須將殘留管尖的液體吹出。此類吸量管的上端常標有“吹”字。若吸量管上端未標有“吹”字樣則為不完全流出式，其刻度不包括吸量管的*后一部分，殘留管尖的液體不必吹出。 2.使用方法 （1）選擇：使用前先根據需要選擇適當的移液管，分度吸量管的總容量*好等于或稍大于*大取液量。臨用前要看清容量和刻度。 （2）執管：用拇指和中指（輔以環指）持移液管上部，用示指堵住上口并控制液體流速，刻度數字要對向自己。 （3）取液：將移液管插入液體內（不得懸空，以免液體吸入橡皮球內），用另一只手捏壓橡皮球，用橡皮球將液體吸至*高刻度上端1～2cm處，然后迅速用示指按緊管上口，使液體不至于從管下口流出。 （4）調整刻度：將移液管提出液面，然后用示指控制液體緩慢下降至所需刻度（通常情況下，此時液體凹面、視線和刻度應在同一水平線上），并立即按緊移液管上口。 （5）放液：將移液管轉入接收容器，放松示指，使液體自然流入接收容器內（移取黏性較大的液體，如全血、血清、血漿時，先用濾紙擦干管尖外壁再行放液）。放液時，管尖*好接觸接收容器內壁。但不要插入接收容器內原有的液體中，以免污染移液管和原有液體。 （6）洗滌：移取血液、血清等黏稠液體及標本（如尿液）的移液管，使用后要及時用自來水沖洗干凈。移取一般試劑的移液管可不必馬上沖洗，待實驗完畢后再沖洗。沖洗干凈后，*后用蒸餾水沖洗，晾干備用。 （五）滴定管 滴定管分為常量滴定管與微量滴定管。常量滴定管又分為酸式與堿式兩種，各有白色、棕色之分。酸式滴定管用于盛裝酸性、氧化性以及鹽類的稀溶液。堿式滴定管用來盛裝堿性溶液。棕色滴定管用于盛裝見光易分解的溶液。常量滴定管的容積有20ml、25ml、50ml、100ml 等規格。微量滴定管分為一般微量滴定管和自動微量滴定管，容積有1ml、2ml 等規格，刻度精度因規格不同而異。 滴定管主要用于滴定分析。它能準確讀取試液用量，操作比較方便。一般是左手握塞，右手持瓶；左手滴液體，右手搖動錐形瓶。在滴定臺上襯以白紙或者白瓷板，以便觀察錐形瓶內的顏色變化。滴定速度以10ml/min，即每秒3～4滴為宜。接近終點
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