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醫學生物學與醫學細胞生物學實驗教程(第3版) 版權信息
- ISBN：9787030614698
- 條形碼：9787030614698 ; 978-7-03-061469-8
- 裝幀：一般膠版紙
- 冊數：暫無
- 重量：暫無
- 所屬分類：>>
醫學生物學與醫學細胞生物學實驗教程(第3版) 內容簡介
本書是"十二五"普通高等教育本科重量規劃教材《醫學細胞生物學》（第八版）和《醫學生物學》（第九版）的配套教材。全書共安排24個實驗內容，既有鞏固和強化基礎知識、基本理論和基本技能訓練的實驗，也有培養學生動手能力、科研思維能力的綜合性、探索性及創新性實驗。力求全面提升醫學類學生的生物學基本實驗技能。
醫學生物學與醫學細胞生物學實驗教程(第3版) 目錄
目錄
第三版前言
**版前言
實驗規則
實驗一 光學顯微鏡的構造及使用方法 1
實驗二 光學顯微鏡下的細胞形態結構觀察 10
實驗三 核酸成分的檢測 16
實驗四 細胞器及細胞骨架標本的制備與觀察 19
實驗五 小鼠腹腔巨噬細胞吞噬活動觀察 24
實驗六 細胞膜通透性的觀察 27
實驗七 細胞核的分離與鑒定 30
實驗八 細胞有絲分裂標本的制備與觀察 32
實驗九 細胞減數分裂標本的制備與觀察 36
實驗十 小鼠骨髓細胞染色體標本的制備與觀察 41
實驗十一 人外周血淋巴細胞染色體標本的制備與觀察 44
實驗十二 染色體G顯帶及SCE標本的制備與觀察 48
實驗十三 人體細胞染色體G顯帶核型分析 52
實驗十四 動物細胞的原代培養 58
實驗十五 培養細胞的傳代及凍存復蘇 63
實驗十六 培養細胞的活力測定 68
實驗十七 動物細胞融合 71
實驗十八 染色體提前凝聚的誘導與觀察 74
實驗十九 流式細胞術 78
實驗二十 細胞凋亡的誘導與檢測 84
實驗二十一 人類性染色質檢測及幾種遺傳性狀的分析 90
實驗二十二 腫瘤細胞特異性骨架蛋白的顯示 95
實驗二十三 細胞衰老的誘導及β-半乳糖苷酶的檢測 98
實驗二十四 人類遺傳病家系分析 102
實驗二十五 家兔解剖 106
附圖
第三版前言
**版前言
實驗規則
實驗一 光學顯微鏡的構造及使用方法 1
實驗二 光學顯微鏡下的細胞形態結構觀察 10
實驗三 核酸成分的檢測 16
實驗四 細胞器及細胞骨架標本的制備與觀察 19
實驗五 小鼠腹腔巨噬細胞吞噬活動觀察 24
實驗六 細胞膜通透性的觀察 27
實驗七 細胞核的分離與鑒定 30
實驗八 細胞有絲分裂標本的制備與觀察 32
實驗九 細胞減數分裂標本的制備與觀察 36
實驗十 小鼠骨髓細胞染色體標本的制備與觀察 41
實驗十一 人外周血淋巴細胞染色體標本的制備與觀察 44
實驗十二 染色體G顯帶及SCE標本的制備與觀察 48
實驗十三 人體細胞染色體G顯帶核型分析 52
實驗十四 動物細胞的原代培養 58
實驗十五 培養細胞的傳代及凍存復蘇 63
實驗十六 培養細胞的活力測定 68
實驗十七 動物細胞融合 71
實驗十八 染色體提前凝聚的誘導與觀察 74
實驗十九 流式細胞術 78
實驗二十 細胞凋亡的誘導與檢測 84
實驗二十一 人類性染色質檢測及幾種遺傳性狀的分析 90
實驗二十二 腫瘤細胞特異性骨架蛋白的顯示 95
實驗二十三 細胞衰老的誘導及β-半乳糖苷酶的檢測 98
實驗二十四 人類遺傳病家系分析 102
實驗二十五 家兔解剖 106
附圖
展開全部
醫學生物學與醫學細胞生物學實驗教程(第3版) 節選
實驗一 光學顯微鏡的構造及使用方法 實驗目的 1.掌握光學顯微鏡的基本結構和功能。 2.熟悉光學顯微鏡的正確使用方法。 3.了解光學顯微鏡的維護方法。 實驗用品 一、器材 普通光學顯微鏡、特殊光學顯微鏡、擦鏡紙。 二、材料 家兔肌肉、肝臟、腎臟或蛙鱗狀上皮等切片標本。 顯微鏡類型 一、光學顯微鏡 （一）普通光學顯微鏡 普通光學顯微鏡（ordinary light microscope，OLM)是目前應用*廣泛的顯微鏡，分辨率可達0.2pm，放大倍數多為500～1000倍。常用于觀察肉眼不能分辨的細微結構，如細胞的一般形態結構，可看到細胞核、核仁、線粒體、中心體、高爾基復合體及染色體等結構。 （二)暗視野顯微鏡 暗視野顯微鏡（dark field microscope)是在普通光學顯微鏡的基礎上改造而來，使用中央遮光板或暗視野集光器，使照明光線不能直接進人物鏡，只允許被標本反射和衍射的光線進人物鏡，故視野背景是暗的，物體邊緣是亮的。暗視野顯微鏡能觀察到4～200nm的微小粒子，一般用于觀察微小生物的運動、活細胞的結構及細胞內微粒的運動等。 （三）倒置顯微鏡 倒置顯微鏡（inverted microscope)的物鏡位于標本下方，光源位于標本上方。該種顯微鏡主要用于觀察培養細胞等活體標本。 （四）相差顯微鏡 相差顯微鏡（phase contrast microscope)是利用光的衍射和干涉原理，在光學系統中有一套特殊裝置（如環狀光圈和相板的物鏡等），能調整直射光或衍射光的相位，使觀察標本的各部分明暗反差增大，把人類肉眼看不到的相差變為明暗的振幅差，以利于觀察活體標本或未染色的細微結構。 （五）熒光顯微鏡 熒光顯微鏡（fluorescence microscope)是由熒光光源、熒光鏡組件、濾板系統、光學系統等部件組成。它利用高發光效率的點光源，經過濾色系統發出一定波長的光作為激發光，激發檢測標本內的熒光物質，通過物鏡和目鏡放大以觀察標本的熒光圖像。細胞內含有少量維生素、核黃素等天然熒光物質，同時也可以將細胞中的某些成分與酸性品紅、甲基綠、吖啶橙等熒光物質結合，以便觀察分析物質在細胞內的分布位置、細胞的結構及功能等。 （六）激光掃描共聚焦顯微鏡 激光掃描共聚焦顯微鏡（confocal laser scanning microscope，CLSM)是利用激光束經照明針孔形成點光源對標本內焦平面的每一點進行掃描，標本上的被照射點在探測針孔處成像，并迅速在計算機監視器屏幕上形成熒光圖像。同時，在顯微鏡載物臺上有微量步進馬達，根據需要可使載物臺（標本）步進移動，因此標本的各個橫斷面圖像均能清晰地顯示，通過計算機圖像信息處理可對標本三維重建，在亞細胞水平可觀察生理信號及細胞形態變化。激光掃描共聚焦顯微鏡可用于觀察活體胚胎，大腦皮層內微循環，細胞內的網絡結構如內膜系統、細胞骨架及原位染色體等。 （七）攝影顯微鏡 攝影顯微鏡（video microscope)又叫智能顯微鏡，它是將普通光學顯微鏡與彩色高分辨攝像頭、高保真錄像機及彩色監視器結合制成，使顯微鏡視野中所觀察的標本細微結構真實、有效地記錄下來，便于分析標本的動態變化過程。若配上彩色高分辨數碼相機、高清晰度彩色打印機，就可在觀察標本的同時得到高清晰度圖片。 二、電子顯微鏡 電子顯微鏡是一類根據電子光學原理，用電子束和電磁透鏡代替光束和光學透鏡，觀察物質的超微結構乃至原子圖像的儀器。1931年，德國科學家克諾爾和盧斯卡發明了**臺電子顯微鏡（electron microscope)。1939年，西門子公司制造出分辨率達3nm的世界上*早的實用電子顯微鏡。電子顯微鏡經過改進和發展，已成為生命科學、物理、化學和材料科學等領域的重要研究工具。目前*常用的是透射電子顯微鏡和掃描電子顯微鏡。 （一）透射電子顯微鏡 透射電子顯微鏡（transmission electron microscope，TEM)的光路與普通光學顯微鏡相仿，可以看到在光學顯微鏡下無法看清的小于0.2nm的細微結構，放大倍數可從幾十倍連續變化到幾十萬倍。透射電子顯微鏡是由電子槍發射的高速電子束經高壓加速和聚光透鏡的聚焦，然后穿過樣品再經過多級電磁透鏡（物鏡、中間鏡、投影鏡）放大，*后將高度放大的圖像顯示在熒光屏上或記錄在照相裝置中。透射電子顯微鏡樣品的制作較為關鍵，包括取材、固定、脫水、浸透、包埋聚合、超薄切片（一般厚度為50～80nm)、染色等步驟。 （二）掃描電子顯微鏡 掃描電子顯微鏡（scanning electron microscope，SEM)也是利用高能電子束充當光源的大型顯微分析設備。掃描電子顯微鏡的高速電子束并不穿過樣品，僅作用于樣品表面，在樣品表面進行逐點逐行的光柵掃描。掃描電子顯微鏡配有電子信息檢測器，可檢測樣品表面被電子探針激發的不同電子信號，在獲取到樣品表面結構形貌特征或化學組成信息后，經信號放大，呈現在顯像屏上。 掃描電子顯微鏡由電子光學系統、信號接收轉換系統、圖像顯示記錄系統組成。其樣品制備包括材料的表面清潔、固定、脫水、干燥、導電處理等步驟。因掃描電子顯微鏡注重樣品表面形貌觀察，具有很強的立體感和三維效果。 普通光學顯微鏡的基本結構和功能 普通光學顯微鏡是*常用的一種光學顯微儀器，在醫學教學、科研及臨床工作中使用的普通光學顯微鏡有直立式和傾斜式（圖1-1)兩類，均由機械部分、照明部分及光學部分組成。 一、機械部分 （一）鏡座 鏡座位于顯微鏡的*下方，是顯微鏡的基座，起支持和穩定鏡體的作用。 （—)鏡柱 鏡柱是與鏡座和鏡臂相連的垂直結構，其上裝有調焦裝置。 （三）調焦裝置 調焦裝置位于鏡柱上，呈同心圓式排列，包括粗調焦旋鈕和細調焦旋鈕。調焦裝置的功能是調節焦距，粗調焦旋鈕可使鏡臺較快速度地升降，旋轉一圈可使載物臺升降10mm，適用于低倍鏡調焦；細調焦旋鈕可使鏡臺緩慢升降，旋轉一圈可使載物臺升降0.1mm，用作較精細的調節，適用于高倍鏡、油鏡和分辨物像清晰度調焦。 （四）鏡臂 鏡臂支撐鏡筒和載物臺，是手握提顯微鏡的結構，位于鏡柱上方，略呈弓形。 （五）鏡筒 鏡筒是位于鏡臂上方的圓筒，上端安裝目鏡，下端連接物鏡轉換器。光鏡鏡筒分單筒式（可分直立式和傾斜式）和雙筒式兩種，目前多為傾斜式雙筒式鏡筒。國際上顯微鏡標準鏡筒長度為160mm。 （六）物鏡轉換器 物鏡轉換器裝在鏡筒下方，呈圓盤狀，有3～4個物鏡螺旋口，可安裝不同放大倍數的物鏡。物鏡應按放大倍數高低順序依次排列，旋轉物鏡轉換器時，不應用手指推動物鏡，因為長時間推動物鏡容易使光軸歪斜，影響成像質量。 （七）載物臺 載物臺是位于鏡臂前方的方形或圓形平臺，用以放置玻片標本。方形載物臺面積一般為120mm×110mm，中央有一通光孔，載物臺上裝有標本夾和推片器，既可固定標本又可前后左右移動，推片器上有縱橫游標尺，可利用游標尺上的刻度作為標記，以便尋找物像，也可用于測量標本的大小。 二、照明部分 顯微鏡的照明裝置由光源、反光鏡、聚光器和光圈等部分組成。 （一）光源 顯微鏡有自帶光源和不帶光源兩種。前者采用電光源照明，電光源燈一般裝在鏡座內或鏡座后的燈殼中，可以使用鏡座側面的調光旋鈕調節光源強度；后者采用自然光源或人工外光源照明。 （—)反光鏡 反光鏡（mirror)裝在鏡座上，可向各個方向轉動，是一個可隨意轉動的雙面鏡，把光線反射入聚光鏡。反光鏡的一面是平面鏡，另一面是凹面鏡。平面鏡具有反射光線能力，一般在較強光線時使用。凹面鏡既有反光作用也有聚光能力，適用于較弱光和散射光。內置光源的光學顯微鏡不需要反光鏡。 （三）聚光器 聚光器位于通光孔下方的聚光器支架上，由一組透鏡組成，可使反光鏡反射的光線或內置光源發出來的光線集中于標本上，起匯聚光線的作用。在鏡柱的左側面有一聚光器升降螺旋，可使聚光器升降。聚光器上升時光線增強，下降時光線減弱。一般聚光鏡的焦點在其上方1.25mm處。 （四）光圈 光圈（diaphragm)又叫可變光闌，位于聚光器下方，由十幾張金屬薄片組成，中心部分形成圓孔，可調節光強度，使聚光鏡的數值孔徑與物鏡的數值孔徑相適應。側面有一光闌小柄，撥動小柄可使光圈擴大或縮小，以調節進光量。 三、光學部分 （一）目鏡 目鏡（ocular)安裝在鏡筒的上端，由上下兩組透鏡組成。目鏡上刻有5×、10×、40×等符號，表示其放大倍數。有的目鏡筒內安置有一指針，用于指示視野中觀察物像的部位，以利示教和提問。 （二）物鏡 物鏡（objective)裝在物鏡轉換器下方，是決定顯微鏡性能的重要部件，根據物鏡與被檢標本之間的介質不同可分為干燥物鏡、浸液物鏡，依放大倍數不同分為低倍鏡、高倍鏡和油鏡。低倍鏡短，數值孔徑一般為0.25，放大倍數一般為10×;高倍鏡較長，數值孔徑一般為0.65，放大倍數為40×、45X或60×;油鏡*長，數值孔徑一般為1.25，放大倍數為100X。通常在物鏡上刻有相應的標記，如在10倍的物鏡上刻有10/0.25和160/0.17。10表示物鏡放大倍數，0.25表示鏡口率，160表示鏡筒長度，0.17表示蓋玻片厚度，兩者的單位均為毫米。 鏡口率又稱數值孔徑（numerical aperture，NA)，可反映物鏡分辨力的大小，數字越大表示分辨力越高，一般10X物鏡的NA為0.25，40X物鏡的NA為0.65，100X物鏡的NA為1.25（NA＝n sinθ，其中n為介質的折射率，sinθ為透鏡視錐半頂角的正弦值)。 顯微鏡的總放大倍數等于目鏡和物鏡放大倍數的乘積。如目鏡10×、物鏡100×，則放大倍數為10×100=1000倍。 光學顯微鏡的使用方法 在使用顯微鏡時，應右手握鏡臂左手托鏡座，從鏡盒中取出顯微鏡輕放在自己座位左前方的實驗臺上，距離實驗臺邊緣6～10cm處為宜。直立式顯微鏡可使用傾斜關節，讓鏡筒略向自己傾斜（不能超過45°)以便觀察。 一、低倍鏡的使用 （一）對光 先轉動粗調焦旋鈕使鏡筒升高，再旋轉物鏡轉換器使低倍鏡對準通光孔（可聽到輕微的咔噠聲)。然后打開光圈，上升聚光器，雙眼睜開，左眼對準目鏡觀察，雙手并用，左手調焦，右手移片或繪圖。轉動反光鏡，直到視野內光線明亮均勻。
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