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醫學免疫學實驗(第2版) 版權信息
- ISBN：9787030484857
- 條形碼：9787030484857 ; 978-7-03-048485-7
- 裝幀：一般膠版紙
- 冊數：暫無
- 重量：暫無
- 所屬分類：>>
醫學免疫學實驗(第2版) 內容簡介
本書共包括“基本實驗操作技術”、“基本性實驗”、“綜合性實驗”和“研究創新性實驗”共四篇，18章，53個實驗。所選實驗項目基本上是經過我們多年教學和科研實踐證明的、切實可行的實驗；編者是常年工作在教學和科研線、教學經驗豐富、科研功底扎實的中青年骨干教師，保障了新版實驗教材的內容與時俱進、方法優選實用。
醫學免疫學實驗(第2版) 目錄
目錄
**篇 基本實驗操作技術
**章 血液標本的采集 1
實驗一 人血液標本的采集 1
實驗二 動物血液標本的采集 3
第二章 免疫細胞分離與制備技術 7
實驗三 人外周血單個核細胞的分離 7
實驗四 T、B淋巴細胞的分離 9
實驗五 NK細胞的分離 12
實驗六 小鼠脾細胞的制備 14
實驗七 小鼠腹腔吞噬細胞的制備 15
實驗八 免疫磁珠法分離免疫細胞及亞群 19
第三章 細胞計數及活性測定 22
實驗九 細胞計數方法 22
實驗十 細胞活力測定 24
第四章 免疫原及佐劑的制備 26
實驗十一 顆粒性抗原的制備 26
實驗十二 可溶性抗原的制備 27
實驗十三 用半抗原制備免疫原 29
實驗十四 佐劑的制備 30
第二篇 基本性實驗
第五章 凝集反應 33
實驗十五 直接凝集反應 33
實驗十六 間接凝集反應 39
第六章 沉淀反應 43
實驗十七 凝膠內沉淀試驗 43
實驗十八 免疫電泳技術 46
實驗十九 液相內沉淀試驗 50
第七章 補體參與的免疫反應 52
實驗二十 溶血試驗 52
實驗二十一 補體活性測定 53
實驗二十二 補體依賴的細胞毒試驗 55
第八章 超敏反應試驗 58
實驗二十三 Ⅰ型超敏反應檢測 58
實驗二十四 Ⅱ型超敏反應檢測 62
實驗二十五 Ⅲ型超敏反應檢測 65
實驗二十六 Ⅳ型超敏反應檢測 67
第三篇 綜合性實驗
第九章 免疫標記技術 69
實驗二十七 免疫酶測定法 69
實驗二十八 免疫熒光技術 72
實驗二十九 化學發光酶免疫測定 75
實驗三十 膜載體免疫測定 76
實驗三十一 間接ABC-ELISA法檢測兔抗人Ig 79
第十章 細胞免疫學實驗 82
實驗三十二 E花環形成試驗 82
實驗三十三 T淋巴細胞增殖試驗 84
實驗三十四 白細胞移動抑制試驗 89
實驗三十五 CTL殺傷功能測定（51Cr釋放法）91
實驗三十六 NK細胞殺傷活性檢測 93
實驗三十七 吞噬細胞吞噬殺菌作用及溶菌酶的溶菌作用 95
實驗三十八 白細胞介素-2的活性測定 101
實驗三十九 腫瘤壞死因子的生物學活性測定 105
第十一章 體液免疫實驗 107
實驗四十 抗血清（多克隆抗體）的制備 107
實驗四十一 B淋巴細胞溶血空斑試驗 112
第十二章 細胞凋亡檢測 115
實驗四十二 凋亡細胞的形態學檢測 115
實驗四十三 凋亡細胞的生化特征檢測 116
實驗四十四 凋亡細胞的流式細胞術檢測 118
第四篇 研究創新性實驗
第十三章 單克隆抗體的制備 122
實驗四十五 單克隆抗體的制備與鑒定 122
第十四章 免疫印跡技術 133
實驗四十六 免疫印跡技術 133
第十五章 LAK細胞的制備 137
實驗四十七 LAK細胞的制備和活性檢測 137
第十六章 HLA分型技術 139
實驗四十八 HLA的血清學分型法 139
實驗四十九 HLA的細胞學分型法 141
實驗五十 HLA的DNA分型法 144
實驗五十一 骨髓移植的HLA配型 147
第十七章 樹突狀細胞的誘生與鑒定 149
實驗五十二 樹突狀細胞的誘生與鑒定 149
第十八章 流式細胞術 151
實驗五十三 流式細胞術檢測小鼠胸腺細胞表面CD4及CD8分子 151
參考文獻 155
附錄 免疫學實驗常用試劑及配制方法 156
彩圖
**篇 基本實驗操作技術
**章 血液標本的采集 1
實驗一 人血液標本的采集 1
實驗二 動物血液標本的采集 3
第二章 免疫細胞分離與制備技術 7
實驗三 人外周血單個核細胞的分離 7
實驗四 T、B淋巴細胞的分離 9
實驗五 NK細胞的分離 12
實驗六 小鼠脾細胞的制備 14
實驗七 小鼠腹腔吞噬細胞的制備 15
實驗八 免疫磁珠法分離免疫細胞及亞群 19
第三章 細胞計數及活性測定 22
實驗九 細胞計數方法 22
實驗十 細胞活力測定 24
第四章 免疫原及佐劑的制備 26
實驗十一 顆粒性抗原的制備 26
實驗十二 可溶性抗原的制備 27
實驗十三 用半抗原制備免疫原 29
實驗十四 佐劑的制備 30
第二篇 基本性實驗
第五章 凝集反應 33
實驗十五 直接凝集反應 33
實驗十六 間接凝集反應 39
第六章 沉淀反應 43
實驗十七 凝膠內沉淀試驗 43
實驗十八 免疫電泳技術 46
實驗十九 液相內沉淀試驗 50
第七章 補體參與的免疫反應 52
實驗二十 溶血試驗 52
實驗二十一 補體活性測定 53
實驗二十二 補體依賴的細胞毒試驗 55
第八章 超敏反應試驗 58
實驗二十三 Ⅰ型超敏反應檢測 58
實驗二十四 Ⅱ型超敏反應檢測 62
實驗二十五 Ⅲ型超敏反應檢測 65
實驗二十六 Ⅳ型超敏反應檢測 67
第三篇 綜合性實驗
第九章 免疫標記技術 69
實驗二十七 免疫酶測定法 69
實驗二十八 免疫熒光技術 72
實驗二十九 化學發光酶免疫測定 75
實驗三十 膜載體免疫測定 76
實驗三十一 間接ABC-ELISA法檢測兔抗人Ig 79
第十章 細胞免疫學實驗 82
實驗三十二 E花環形成試驗 82
實驗三十三 T淋巴細胞增殖試驗 84
實驗三十四 白細胞移動抑制試驗 89
實驗三十五 CTL殺傷功能測定（51Cr釋放法）91
實驗三十六 NK細胞殺傷活性檢測 93
實驗三十七 吞噬細胞吞噬殺菌作用及溶菌酶的溶菌作用 95
實驗三十八 白細胞介素-2的活性測定 101
實驗三十九 腫瘤壞死因子的生物學活性測定 105
第十一章 體液免疫實驗 107
實驗四十 抗血清（多克隆抗體）的制備 107
實驗四十一 B淋巴細胞溶血空斑試驗 112
第十二章 細胞凋亡檢測 115
實驗四十二 凋亡細胞的形態學檢測 115
實驗四十三 凋亡細胞的生化特征檢測 116
實驗四十四 凋亡細胞的流式細胞術檢測 118
第四篇 研究創新性實驗
第十三章 單克隆抗體的制備 122
實驗四十五 單克隆抗體的制備與鑒定 122
第十四章 免疫印跡技術 133
實驗四十六 免疫印跡技術 133
第十五章 LAK細胞的制備 137
實驗四十七 LAK細胞的制備和活性檢測 137
第十六章 HLA分型技術 139
實驗四十八 HLA的血清學分型法 139
實驗四十九 HLA的細胞學分型法 141
實驗五十 HLA的DNA分型法 144
實驗五十一 骨髓移植的HLA配型 147
第十七章 樹突狀細胞的誘生與鑒定 149
實驗五十二 樹突狀細胞的誘生與鑒定 149
第十八章 流式細胞術 151
實驗五十三 流式細胞術檢測小鼠胸腺細胞表面CD4及CD8分子 151
參考文獻 155
附錄 免疫學實驗常用試劑及配制方法 156
彩圖
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醫學免疫學實驗(第2版) 節選
**篇 基本實驗操作技術 **章 血液標本的采集 在免疫學實驗中，常常需要采集人或實驗動物的血液進行研究。正確采集血液標本是免疫學*基本的實驗操作技術，也是獲得準確、可靠實驗結果的前提。血液采集技術和方法均要求保持血液標本的完整性和代表性，血液標本采集前，應根據實驗目的選擇合適的采血方法和合適的抗凝劑。本章主要介紹人和實驗動物血液標本的采集。 實驗一 人血液標本的采集 【實驗目的】 掌握靜脈采血法，熟悉皮膚采血法。 【血液標本的類型】 血液標本主要分為全血、血漿及血清等。 1. 全血 保留血液的全部成分，由血細胞和血漿組成。血液經抗凝處理后的全部血液稱為抗凝全血，常用于免疫細胞的分離和血細胞的檢查等。 2. 血漿 全血抗凝之后經離心除去血細胞后的成分，為淡黃色液體，用于血漿生理性和病理性化學成分的測定。血漿除因子Ⅳ外，含有其他全部凝血因子，特別適合于血栓與止血的檢查。 3. 血清 血液離體后不經抗凝處理、自然凝固后析出的液體部分，除纖維蛋白原等凝血因子在凝血時被消耗外，其他成分與血漿基本相同，更適用于多數臨床化學和臨床免疫學檢查。 4. 分離或濃集的細胞成分 有些臨床實驗特別是近年來新出現的一些醫學檢驗項目，要求采集特定的細胞成分，如相對濃集的粒細胞、純化的淋巴細胞、分離的單個核細胞、富集的血小板、濃集的白血病細胞等。 【實驗器材】 真空采血管（普通血清管、枸櫞酸鈉或肝素抗凝管）、一次性使用靜脈采血針、止血帶、一次性專用采血針、絡合碘、無菌干棉簽、無菌干棉球等。 【實驗方法】 血液標本的采集分為靜脈采血法、皮膚毛細血管采血法和動脈采血法。動脈采血法因其風險性較高，在臨床上一般很少使用。 1. 靜脈采血法 當檢查項目使用血量較多時通常采用靜脈采血法（venipuncture for blood collection）。靜脈血能準確反映全身血液的真實情況，且不易受氣溫和末梢循環的干擾，更具代表性。位于體表的淺靜脈均可作為采血部位，通常采用肘部靜脈。如果肘部靜脈不明顯，還可用手背靜脈或內踝部靜脈。嬰幼兒由于肘部靜脈較細和配合性差，可從股靜脈或頸外靜脈采血，但要準備充分，注意其風險性。 負壓采血法：又稱封閉式采血法（tube for blood collection），是近年來在傳統的靜脈采血法基礎上進一步發展和完善的一種新的、簡便易行的靜脈采血法。其原理是封閉的試管內有定量的負壓，使血液定量進入試管內（圖1-1-1，圖1-1-2，見文后彩圖1，彩圖2）。 圖1-1-1 負壓采血法器具 圖1-1-2 負壓采血法 常選擇肘正中靜脈或貴要靜脈處采集靜脈血，在穿刺點上方約6cm處系止血帶，消毒，囑被采血者握拳使靜脈充盈。將一次性采血針一頭膠套取下，以15°～30°角度刺入血管，見回血后，固定針柄；將雙向采血針另一端針頭刺入真空采血管的管蓋，使血液順著壓力差流入真空采血管內。待血液停止流動后，固定針頭不動，取下該真空采血管，將其余備好的真空采血管依次推入、取出，完畢松止血帶，*后拔出穿刺針，用無菌干棉簽按壓針眼處片刻以止血。 負壓采血法的優點如下所述。 （1）血樣無容器之間的轉移，減少了溶血現象而有效保護了血液有形成分。 （2）減少了二次污染機會，保證待檢血液標本原始性狀的完整性，使檢驗結果更為真實。 （3）如果使用血量或檢查項目較多時，只要更換封閉的負壓試管就可連續采血。 （4）采集的血液標本轉運方便，特別適用于病房和野外流動采血，能避免對醫護人員的感染和患者血液標本間的交叉污染。 2. 皮膚毛細血管采血法（skin puncture for blood collection） 皮膚毛細血管采血法主要用于需血量微小的檢查項目，所得到的末梢血不單純是毛細血管血，實際是微動脈、微靜脈和毛細血管的混合血，并依采血時擠壓的力度不同含有少量細胞間質和細胞內液。 采血部位：成人常用手指或耳垂采血。耳垂采血痛感較輕，操作方便，但血循環較差，受氣溫影響較大，檢查結果不夠恒定，現在不提倡使用。手指采血操作方便，可獲相對較多血量，檢查結果也比較恒定。世界衛生組織（WHO）曾推薦必要時可用左手環指指端內側血做血液一般檢驗。嬰幼兒因手指太小可用腳大趾或足跟部位采血。嚴重燒傷患者，應選擇皮膚完整處采血。 采血器：采用特制三棱針或專用“采血針”，特別是后者有利于采血技術的質量控制，嚴禁用注射針頭代替采血針。為避免交叉感染，必須嚴格實行一人一針一管（毛細吸管）。 采血方法：輕輕按摩采血部位，使局部組織自然充血，消毒皮膚。干燥后，緊捏采血部位兩側，右手持一次性消毒采血針迅速刺入，深度以2～3mm 為宜，稍加擠壓血液自動流出。第1滴血液因混入組織液相對較多，常棄去不用。用微量吸管吸取血液至所要求的刻度，然后用無菌干棉球壓住針刺點以止血。 【注意事項】 （1）采血前患者應保持平靜，一般應在清晨時間空腹取血。 （2）靜脈采血時，止血帶壓迫時間應小于1min。壓迫時間過長（超過2min），大靜脈血流受阻而使毛細血管內壓上升，可能會使血管內液與組織液交流，致使分子量小于5KDa的物質溢入組織液；而且隨著壓迫時間延長，局部組織可能發生缺氧而引起血液成分的變化增大。 （3）負壓采血時，若遇到血液不能順暢地流入真空管，可能是因為真空管的真空度不夠，更換真空管即可解決這一問題。 （4）如遇患者采血后發生暈厥，可讓其迅速平臥休息片刻，一般可很快恢復。必要時可嗅芳香氨酊，針刺或指掐人中、合谷等穴位。 （5）皮膚采血應避開有炎癥、化膿、凍傷等皮膚損害部位。皮膚出汗應先用干棉球擦干，以免稀釋血液。采血時切忌用力擠壓，以免混入組織液，影響檢驗結果。 （6）采集血漿或血清標本時要注意防止溶血。注射器和容器必須保持干燥，靜脈采血完畢應先拔針頭，然后將血液徐徐注入標本容器，避免沖擊力過大而致溶血。發生溶血的主要原因有容器不清潔、接觸水或化學溶劑、強力振蕩和分離血細胞時操作不慎等。一旦由于某種原因發生了溶血，應重新采血，不能勉強和湊合使用，以免影響檢驗結果。 【思考題】 1. 負壓采血法的主要優點有哪些？ 2. 靜脈采血法和皮膚毛細血管采血法各適合于什么情況？ 實驗二 動物血液標本的采集 動物經免疫3～5次后，可取血測定抗體效價，若鑒定合格，應在末次免疫后5～7d及時采血；若抗體效價不理想，可追加免疫1～2次后再行采血。 【實驗目的】 熟悉免疫學試驗中常用動物的血液采集方法。 常用實驗動物：小鼠、大鼠、家兔和犬。 【實驗器材】 1. 器材 兔箱、兔固定臺、犬固定臺、鼠固定板、剪刀、手術刀、注射器、玻璃毛細管、血色素吸管、止血帶等。 2. 試劑 1%肝素生理鹽水溶液、飽和草酸鉀溶液、3.8%的枸櫞酸鈉溶液、生理鹽水。 【實驗方法】 實驗動物的采血方法較多，按采血部位不同可分為穿刺采血法（含剪、割法）、斷頭采血法、心臟采血法、頸動（靜）脈采血法、腹主動脈采血法、股動脈采血法、耳靜脈采血法、尾靜脈采血法等。 1. 大鼠與小鼠的采血方法 （1）尾靜脈采血法：適用于所需采血量很少時。固定動物并露出鼠尾，將尾部浸入45～50℃溫水中數分鐘，使尾靜脈充血，擦干，再用酒精棉球消毒。剪掉尾尖（0.2～0.3cm），拭去**滴血。然后用血色素吸管定量吸取尾血。采血完畢用干棉球壓迫止血。亦可不剪尾，用7～8號注射針頭連上注射器直接刺入尾靜脈采血（圖1-1-3）。若反復采血，可由鼠尾遠心端向近心端逐步穿刺（或剪斷尾部）。 （2）眼眶靜脈叢采血法：當需血量中等而又要避免動物死亡時采用。左手拇指及示指緊緊握住大鼠或小鼠頸部，壓迫頸部兩側使眶后靜脈叢充血，但用力要恰當，防止動物窒息死亡。右手持7號針頭（連接1ml的注射器）或者玻璃毛細管，從右（左）眼內眥部以45°角刺入（圖1-1-4）。大鼠刺入深度為4～5mm，小鼠為2～3mm，當刺入后感到有阻力時停止推進，同時退針0.1～0.5mm，邊抽邊退。采完后撥出針頭或毛細管，同時除去加于頸部的壓力，用干棉球壓迫止血。小鼠一次可采血0.2～0.3ml，大鼠一次可采血0.5～1ml。 圖1-1-3 鼠尾靜脈采血 圖1-1-4 鼠眼眶靜脈叢采血 （3）斷頭采血法：當需血量較大而又不需繼續保存動物生命時采用。該法是用利器（術剪或刀片）斷離頭頸部一次性采血，適用于大鼠和小鼠。采血時操作者左手拇、示指握住鼠頸部，頭部朝下，用利剪在鼠頸頭間1/2處剪斷，讓血液自由滴入容器中，小鼠可采血1ml左右，大鼠可采血10ml左右。斷頭采血法所獲血液中混有少量組織液，有時還混有斷毛，極易被污染，故采血時應注意防止污染。 2. 家兔采血方法 （1）耳緣靜脈采血法：為*常用的取血方法之一，可多次反復取血。將家兔固定于兔箱中，選靜脈較粗而清晰處，拔掉擬采血耳緣部細毛，用手指輕彈兔耳或電燈照射兔耳，使耳部血管充分充盈，然后消毒，用5號半針頭沿耳緣靜脈遠端（末梢端）刺入血管（靜脈采血時應逆血流方向進針），取血后酒精棉球壓迫止血，此法一般可采血5～10ml。也可左手壓迫耳根，用針頭刺破靜脈或以刀片在血管上切一小口，讓血液自然流出。采取抗凝血時應在耳緣切口處涂20%枸櫞酸納液，采血完畢用干棉球壓迫止血。 （2）頸動脈采血法：常用的取血方法之一，適用于家兔、綿羊和山羊等。以家兔為例，在家兔頸外側做皮膚切口，分離頸總動脈，插入動脈插管，將血液引入無菌的玻璃器皿。放血不宜過快，否則易致動物死亡，故應在放血總量近一半時，將動脈夾住片刻后再繼續放血，這樣獲得的血量可明顯增多，頸動脈采血一般可獲血50ml，*多可獲70～80ml。 （3）耳動脈采血法：耳部采血也可選耳中央動脈，兔耳中央有一條或兩條較粗、顏色較鮮紅的動脈，刺入方向應朝近心端（圖1-1-5，彩圖3）。由于兔耳中央動脈在受刺激時有痙攣反應，因此刺入血管后稍等片刻或在痙攣前迅速抽血。取血針頭應稍大一些，一般用6號針頭。耳動脈采血部位應從中央動脈末端開始，不要在近耳根部進針，因近耳根部組織較厚，血管不清晰。 （4）心臟穿刺采血法：多用于家兔、豚鼠、大鼠和雞等動物的采血（小動物因心臟搏動很快、心腔小、位置較難固定而較少使用）。將家兔仰臥位固定在兔臺上或由助手捉持，在左胸第2～4肋部剪毛，常規消毒。采血時，先用指尖于第3～4肋胸骨左緣探明心臟搏動*明顯之處進針，針頭宜長些（采用6號針頭）（圖1-1-6，彩圖4）。刺入胸腔后，仔細感覺針尖隨心臟搏動在動，如將注射器抽成負壓，血液可自動流入注射器。采血完畢迅速將針頭拔出，這樣心肌上的穿刺孔較易閉合，針眼處用酒精棉球壓迫止血。1只家兔一次可采血20～30ml。心臟采血時動作應迅速，縮短留針時間以防止血液凝固，若針頭已刺入心腔但又抽不出血時，應將針頭稍微軸向轉動一下或稍后退一點，切不可使針頭在心臟內橫向擺動。 圖1-1-5 耳緣靜脈采血 圖1-1-6 心臟采血 （5）股動脈采血法：將家兔仰臥于實驗臺上，伸展后肢固定，暴露出腹股溝三角動脈搏動部位，剪毛，消毒，使用5號半針頭的注射器，以血管搏動為指標，將針頭直接刺入血管內。若已刺入動脈血管，即有鮮紅色血液流入注射器。抽血完畢迅速拔出針頭，用干棉球壓迫止血幾分鐘。 3. 犬的采血方法 （1）后肢外側小隱靜脈和前肢皮下頭靜脈采血：本法*常用，且方便。抽血前，將犬固定在犬固定臺上或使犬側臥，剪去抽血部位的毛，常規消毒，一人用力壓迫靜脈近心端或用
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