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醫學細胞生物學實驗 版權信息
- ISBN：9787030491978
- 條形碼：9787030491978 ; 978-7-03-049197-8
- 裝幀：一般膠版紙
- 冊數：暫無
- 重量：暫無
- 所屬分類：>>
醫學細胞生物學實驗 本書特色
醫學高等院校學生，供綜合大學、師范院校及農、林院校細胞生物學實驗教學和參考使用
醫學細胞生物學實驗 內容簡介
驗證性實驗包括各種顯微鏡的構造與使用方法；生物繪圖法；細胞的基本形態與結構；細胞的化學成分；細胞骨架的光學顯微鏡觀察；細胞的超微結構；染色體和人組織區的銀染色法；線粒體的活體染色與觀察；液泡系的活體染色與觀察；細胞核與線粒體的分離；葉綠體的分離與觀察；細胞有絲分裂標本的制備與觀察；簡數分裂壓片標本的制備與觀察；動物細胞的原代培養；動物細胞的傳代培養；動物細胞的凍存、復蘇和運輸；細胞周期同步化實驗；細胞電融合；雞紅細胞的化學融合；膜蛋白質的分離與鑒定
醫學細胞生物學實驗 目錄
目錄
**部分 驗證性實驗 1
實驗1 普通光學顯微鏡的構造與使用 1
實驗2 相差顯微鏡的原理與使用 7
實驗3 熒光顯微鏡的原理與使用 11
實驗4 透射電子顯微鏡的原理與使用 14
實驗5 掃描電子顯微鏡的原理與使用 17
實驗6 生物繪圖法 21
實驗7 細胞的基本形態與結構 22
實驗8 細胞的化學成分 24
實驗9 細胞骨架的光學顯微鏡觀察 28
實驗10 細胞的超微結構 30
實驗11 染色體核仁組織區的顯示 35
實驗12 線粒體的活體染色與觀察 37
實驗13 液泡系的活體染色與觀察 39
實驗14 細胞核與線粒體的分離與觀察 41
實驗15 葉綠體的分離與熒光觀察 44
實驗16 細胞有絲分裂標本的制備與觀察 46
實驗17 減數分裂標本的制備與觀察 49
實驗18 動物細胞的原代培養 55
實驗19 動物細胞的傳代培養 61
實驗20 動物細胞的凍存、復蘇與運輸 65
實驗21 細胞周期的同步化 67
實驗22 細胞電融合 70
實驗23 細胞化學融合 74
實驗24 膜蛋白質的分離與鑒定 77
實驗25 流式細胞儀檢測細胞周期與凋亡 82
第二部分 綜合性實驗 86
實驗26 細胞器分級、分離與鑒定 86
實驗27 動植物染色體標本的制作與觀察 89
實驗28 細胞計數、生長曲線的繪制及細胞增殖活力檢測 94
實驗29 小鼠腮腺干細胞的分離與培養 98
實驗30 細胞衰老的誘導與觀察 101
實驗31 DADS誘導HL-60細胞凋亡的形態特征與生化特征觀察 104
第三部分 設計性實驗 111
實驗32 利用細胞遺傳毒理學方法進行安全毒理評價和環境檢測 111
實驗33 鋅對腫瘤細胞周期的影響 113
實驗34 藥物誘導人白血病HL-60細胞凋亡檢測 120
實驗35 巨噬細胞源性泡沫細胞模型的建立及鑒定 122
參考文獻 127
**部分 驗證性實驗 1
實驗1 普通光學顯微鏡的構造與使用 1
實驗2 相差顯微鏡的原理與使用 7
實驗3 熒光顯微鏡的原理與使用 11
實驗4 透射電子顯微鏡的原理與使用 14
實驗5 掃描電子顯微鏡的原理與使用 17
實驗6 生物繪圖法 21
實驗7 細胞的基本形態與結構 22
實驗8 細胞的化學成分 24
實驗9 細胞骨架的光學顯微鏡觀察 28
實驗10 細胞的超微結構 30
實驗11 染色體核仁組織區的顯示 35
實驗12 線粒體的活體染色與觀察 37
實驗13 液泡系的活體染色與觀察 39
實驗14 細胞核與線粒體的分離與觀察 41
實驗15 葉綠體的分離與熒光觀察 44
實驗16 細胞有絲分裂標本的制備與觀察 46
實驗17 減數分裂標本的制備與觀察 49
實驗18 動物細胞的原代培養 55
實驗19 動物細胞的傳代培養 61
實驗20 動物細胞的凍存、復蘇與運輸 65
實驗21 細胞周期的同步化 67
實驗22 細胞電融合 70
實驗23 細胞化學融合 74
實驗24 膜蛋白質的分離與鑒定 77
實驗25 流式細胞儀檢測細胞周期與凋亡 82
第二部分 綜合性實驗 86
實驗26 細胞器分級、分離與鑒定 86
實驗27 動植物染色體標本的制作與觀察 89
實驗28 細胞計數、生長曲線的繪制及細胞增殖活力檢測 94
實驗29 小鼠腮腺干細胞的分離與培養 98
實驗30 細胞衰老的誘導與觀察 101
實驗31 DADS誘導HL-60細胞凋亡的形態特征與生化特征觀察 104
第三部分 設計性實驗 111
實驗32 利用細胞遺傳毒理學方法進行安全毒理評價和環境檢測 111
實驗33 鋅對腫瘤細胞周期的影響 113
實驗34 藥物誘導人白血病HL-60細胞凋亡檢測 120
實驗35 巨噬細胞源性泡沫細胞模型的建立及鑒定 122
參考文獻 127
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醫學細胞生物學實驗 節選
**部分 驗證性實驗 實驗1 普通光學顯微鏡的構造與使用 一、實驗目的 （1）了解普通光學顯微鏡的構造及成像原理。 （2）掌握低倍鏡、高倍鏡和油鏡的正確使用方法。 （3）初步了解光學顯微鏡的維護方法。 二、實驗原理 普通光學顯微鏡是*通用的一種光學顯微鏡。利用光線照明，標本中各點依其光吸收的不同而在明亮的背景中成像。它由物鏡、目鏡、聚光鏡、光源、載物臺和支架等部件組成。其基本成像原理是：目鏡、物鏡、聚光器各自相當于一個凸透鏡，被檢標本置于聚光器與物鏡之間，物鏡可使標本在物鏡的上方而形成一個倒立的放大實像（倒像）。目鏡將此倒像進一步放大成像于人眼的視網膜上，形成一個直立的實像（正像）。顯微鏡中放大的倒立的虛像與視網膜上直立的實像是相吻合的，該虛像看起來好像在離眼睛250mm處（圖1-1）。 三、實驗儀器、材料和試劑 1. 器材 普通光學顯微鏡、擦鏡紙。 2. 試劑 鏡頭清洗劑、香柏油或油鏡專用油等。 3. 材料 文字裝片或毛發裝片、血涂片。 四、方法與步驟 （一）普通光學顯微鏡的基本構造 光學顯微鏡主要由三部分組成：機械部分、照明部分和光學部分（圖1-2）。 圖1-2 普通光學顯微鏡的結構示意圖（引自章靜波等，2004） 1. 機械部分 顯微鏡的機械部分是顯微鏡的重要組成部分。其作用是固定與調節光學鏡頭，固定與移動標本等。主要有鏡座、鏡臂、載物臺、鏡筒、物鏡轉換器與調焦裝置等組成。 （1）鏡座：作用是支撐整個顯微鏡，裝有反光鏡，有的還裝有照明光源。 （2）鏡柱：鏡座上面直立的短柱，連接鏡座和鏡臂。 （3）鏡臂：作用是支撐鏡筒和載物臺，分固定、可傾斜兩種。 （4）鏡筒：上端放置目鏡，下端連接物鏡轉換器。分為固定式和可調節式兩種。機械筒長（從目鏡管上緣到物鏡轉換器螺旋口下端的距離稱為鏡筒長度或機械筒長）不能變更的稱作固定式鏡筒，能變更的稱作調節式鏡筒，新式顯微鏡大多采用固定式鏡筒，國產顯微鏡也大多采用固定式鏡筒，國產顯微鏡的機械筒長通常是 160mm。 安裝目鏡的鏡筒，有單筒和雙筒兩種。單筒又可分為直立式和傾斜式兩種，雙筒則都是傾斜式的。其中雙筒顯微鏡，兩眼可同時觀察以減輕眼睛的疲勞。雙筒之間的距離可以調節，而且其中有一個目鏡有屈光度調節（即視力調節）裝置，便于兩眼視力不同的觀察者使用。 （5）載物臺（又稱工作臺、鏡臺）：作用是安放載玻片，形狀有圓形和方形兩種，其中方形的面積為120mm×110mm。中心有一個通光孔，通光孔后方左右兩側各有一個安裝壓片夾用的小孔。分為固定式與移動式兩種。有的載物臺的縱橫坐標上都裝有游標尺，一般讀數為0.1mm，游標尺可用來測定標本的大小，也可用來對被檢部分做標記。 （6）物鏡轉換器：固定在鏡筒下端，有3～4個物鏡螺旋口，物鏡應按放大倍數高低順序排列。旋轉物鏡轉換器時，應用手指捏住旋轉碟旋轉，不要用手指推動物鏡，因時間長容易使光軸歪斜，使成像質量變壞。 （7）調焦裝置：顯微鏡上裝有粗調節器（粗準焦螺旋）和細調節器（細準焦螺旋）。有的顯微鏡粗準焦螺旋與細準焦螺旋裝在同一軸上，大螺旋為粗準焦螺旋，小螺旋為細準焦螺旋；有的則分開安置，位于鏡臂的上端較大的一對螺旋為粗準焦螺旋，其轉動一周，鏡筒上升或下降10mm。位于粗準焦螺旋下方較小的一對螺旋為細準焦螺旋，其轉動一周，鏡筒升降值為0.1mm，細準焦螺旋調焦范圍不小于1.8mm。 2. 照明部分 安裝在載物臺下方，包括反光鏡（或照明光源）、聚光鏡、光圈。 （1）反光鏡（或照明光源）：是一個可以隨意轉動的雙面鏡，一面為平面，一面為凹面，其作用是將從任何方向射來的光線經通光孔反射上來。平面鏡反射光線的能力較弱，是在光線較強時使用，凹面鏡反射光線的能力較強，是在光線較弱時使用。觀察完畢后，應將反光鏡垂直放置。電光源普通顯微鏡沒有反光鏡，一般在鏡座內安裝有照明裝置，光線的強弱由底座上或鏡臂上的光亮調節鈕控制。 （2）聚光器：也稱集光器。位于標本下方的聚光器支架上。它主要由聚光鏡和光圈組成。其中，聚光鏡可分為明視場聚光鏡（普通顯微鏡配置）和暗視場聚光鏡。 數值孔徑（NA）是聚光鏡的主要參數，*大數值孔徑一般是1.2～1.4，數值孔徑有一定的可變范圍，通常刻在上方透鏡邊框上的數字代表*大的數值孔徑，通過調節下部可變光闌的開放程度，可得到此數字以下的各種不同的數值孔徑，以適應不同物鏡的需要。有的聚光鏡由幾組透鏡組成，*上面的一組透鏡可以卸掉或移出光路，使聚光鏡的數值孔徑變小，以適應低倍物鏡觀察時的照明。 聚光鏡的作用相當于凸透鏡，起會聚光線的作用，以增強標本的照明。一般把聚光鏡的聚光焦點設計在它上端透鏡平面上方約1.25mm處（聚光焦點正要觀察的標本上，載玻片的厚度為1.1mm左右）。 光圈也稱可變光闌，位于聚光鏡的下方，由十幾張金屬薄片組成，中心部分形成圓孔。其作用是調節光強度和使聚光鏡的數值孔徑與物鏡的數值孔徑相適應。可變光闌開得越大，數值孔徑越大（觀察完畢后，應將光圈調至*大）。 在可變光闌下面，還有一個圓形的濾光片托架。濾光片安裝在光源和聚光器之間。作用是讓所選擇的某一波段的光線通過，而吸收掉其他的光線，即改變光線的光譜成分或削弱光的強度。 3. 光學部分 （1）物鏡：是決定顯微鏡性能的*重要部件，安裝在物鏡轉換器上，接近被觀察的物體，又稱接物鏡。物鏡根據使用條件的不同可分為干燥物鏡和浸液物鏡；其中浸液物鏡又可分為水浸物鏡和油浸物鏡（常用放大倍數為90～100倍）。根據放大倍數的不同可分為低倍物鏡（10倍以下）、中倍物鏡（20倍左右）和高倍物鏡（40～65倍）。 （2）目鏡：因為它靠近觀察者的眼睛，因此也稱接目鏡，安裝在鏡筒的上端。通常目鏡由上下兩組透鏡組成，上面的透鏡稱作接目透鏡，下面的透鏡稱作會聚透鏡或場鏡。上下透鏡之間或場鏡下面裝有一個光闌（它的大小決定了視場的大小），因為標本正好在光闌面上成像，可在這個光闌上粘一小段毛發作為指針，用來指示某個特點的目標；也可在其上面放置目鏡測微尺，用來測量所觀察標本的大小。目鏡的長度越短，放大倍數越大（因目鏡的放大倍數與目鏡的焦距成反比）。目鏡是將已被物鏡放大的、分辨清晰的實像進一步放大，達到人眼能容易分辨清楚的程度。常用目鏡的放大倍數為5～16倍。 （二）普通光學顯微鏡的性能和質量 1. 目鏡與物鏡的關系 物鏡已經分辨清楚的細微結構，假如沒有經過目鏡的再放大，達不到人眼所能分辨的大小，那就看不清楚；但物鏡所不能分辨的細微結構，雖然經過高倍目鏡的再放大，也還是看不清楚，所以目鏡只能起放大作用，不會提高顯微鏡的分辨率。有時雖然物鏡能分辨開兩個靠得很近的物點，但由于這兩個物點的像的距離小于眼睛的分辨距離，還是無法看清。所以，目鏡和物鏡既相互聯系，又彼此制約。 2. 放大倍數 顯微鏡的總放大倍數等于物鏡和目鏡放大倍數的乘積。 放大倍數是指眼睛看到像的大小與對應標本大小的比值。它指的是長度的比值而不是面積的比值。例如，放大倍數為100×，指的是長度是1μm的標本，放大后像的長度是100μm，要是以面積計算，則放大了10 000倍。 3. 數值孔徑 也稱鏡口率，簡寫為NA或A，是物鏡和聚光器的主要參數，與顯微鏡的分辨力成正比。干燥物鏡的數值孔徑為0.05～0.95，油浸物鏡（香柏油）的數值孔徑為1.25。 4. 工作距離 是指當所觀察的標本*清楚時物鏡的前端透鏡下面到標本的蓋玻片上面的距離。物鏡的工作距離與物鏡的焦距有關，物鏡的焦距越長，放大倍數越低，其工作距離越長。例如，10倍物鏡上標有10/0.25和160/0.17，其中10為物鏡的放大倍數；0.25為數值孔徑；160為鏡筒長度（單位mm）；0.17為蓋玻片的標準厚度（單位mm）。10倍物鏡有效工作距離為6.5mm，40倍物鏡有效工作距離為0.48mm。 5. 分辨力 也稱分辨率或分辨本領。分辨力的大小是用分辨距離（所能分辨開的兩個物點間的*小距離）的數值來表示的。在明視距離（25cm）之處，正常人眼所能看清相距 0.073mm的兩個物點，這個0.073mm的數值，即為正常人眼的分辨距離。顯微鏡的分辨距離越小，即表示它的分辨力越高，也就是表示它的性能越好。 顯微鏡分辨力的大小是由物鏡的分辨力來決定的，而物鏡的分辨力又是由它的數值孔徑和照明光線的波長決定的。 當用普通的中央照明法（使光線均勻地透過標本的明視照明法）時，顯微鏡的分辨距離為 d=0.61λ/NA 式中d——物鏡的分辨距離，單位nm。 λ——照明光線波長，單位nm。 NA——物鏡的數值孔徑。 例如，油浸物鏡的數值孔徑為1.25，可見光波長范圍為400～700nm，取其平均波長550nm，則d=270nm，約等于照明光線波長一半。一般地，用可見光照明的顯微鏡分辨力的極限是0.2μm。 6. 焦點深度 當把焦點對準某一物點時，不僅位于該點平面上的各個點可看得清楚，而且在平面的上下一定厚度內也能看得清楚，這個清晰部分的厚度就是焦點深度。焦深與總放大率和鏡口率成反比，因此高放大率和高鏡口率顯微鏡的焦點深度就淺，不能看到標本的全厚度，必須調節螺旋改變焦距，并仔細地從上到下進行觀察。 7. 視場亮度 是指光學顯微鏡的整個視場的明暗程度。在使用光鏡時，不更換物鏡和目鏡的情況下，視場亮度大，觀察到的圖像也就大。 （三）顯微鏡的使用方法 1. 用前的準備工作 （1）打開鏡箱，右手握住鏡臂，左手托住鏡座，小心地把顯微鏡從鏡箱內取出，輕輕地放在實驗桌上。 （2）檢查顯微鏡的各部件是否完整和正常，如發現有部件損壞或出現故障，應立即停止使用，待排除故障或修復后，才能繼續操作。 2. 低倍鏡的使用 （1）準備：將顯微鏡放于前方略偏左側，必要時使鏡筒傾斜（有的顯微鏡本身已經傾斜）以便觀察。轉動粗調節器，將鏡筒略升高（或將載物臺下降）使物鏡與載物臺距離拉開。以免物鏡與載物臺相碰。然后旋轉物鏡轉換器，將低倍鏡對準載物臺中央的通光孔（可聽到“咔噠”聲）。 （2）對光：打開光圈，上升聚光器，雙眼同時睜開，以左眼向目鏡內觀察，雙手并用，左手調焦，右手移片或繪圖記錄，同時調節反光鏡的方向，使視野內的光線均勻，亮度適中。 （3）放標本片：標本片的蓋片朝上，將標本片放到載物臺前方，然后推到物鏡下面，用壓片夾壓住，如有標本移動器，可用上面的彈簧夾夾住標本片，然后把要觀察的部分移到通光孔的正中央。 （4）調節焦距：從顯微鏡側面注視物鏡鏡頭，同時旋轉粗調節器，使鏡筒緩慢下降（或鏡臺上升），低倍鏡的鏡頭端與玻片間的距離約5mm時，再用左眼從目鏡里觀察視野，左手慢慢轉動粗調節器，使鏡筒緩緩上升，直至視野中出現物像。如物像不太清晰，可轉動細調節器，使物像達到*清晰為止。 如果按上述操作步驟仍看不到物像時，可能由以下原因造成：①轉動調節器太快，超過焦點，應按上述步驟重新調節焦距。②物鏡沒有對正，應對正后再觀察。③標本沒有放到視野內，應移動標本片尋找觀察對象。④光線太強，尤其觀察比較透明的標本或沒有染色的標本時，易出現這種現象，應將光線調暗一些后再觀察。 3. 高倍鏡的使用 （1）依照上述操作步驟，先用低倍鏡找到清晰物像。 （2）將需要觀察的部分移到視野的中央。 （3）眼睛從側面注視物鏡，用手移動轉換器，換高倍鏡。 （4）眼睛向目鏡內觀察，同時微微上下轉動細調節器，直至視野內看到清晰的物像為止。 如按上述操作仍看不到
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