包郵醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)

作者：彭翠英，劉俊

出版社：科學(xué)出版社出版時(shí)間：2022-01-01

開本：其他頁數(shù)： 120

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醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn) 版權(quán)信息

ISBN：9787030484864
條形碼：9787030484864 ; 978-7-03-048486-4
裝幀：一般膠版紙
冊數(shù)：暫無
重量：暫無
所屬分類：
醫(yī)學(xué)
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醫(yī)學(xué)/藥學(xué)考試
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醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn) 內(nèi)容簡介

本書分三部分：**篇常用儀器及基本實(shí)驗(yàn)方法：1.顯微鏡的結(jié)構(gòu)和使用2.熒光顯微鏡的結(jié)構(gòu)與使用3.人類基因組DNA的提取與鑒定4.PCR技術(shù)5.DNA的性內(nèi)切酶酶解技術(shù)6.核酸的凝膠電泳技術(shù)7.聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)8.瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)9.DNA分子雜交技術(shù)。第二篇驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)1.人類外周血淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)及染色體標(biāo)本制備技術(shù)2.正常人類非顯帶染色體的核型分析第三篇綜合創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)1.比較基因組雜交檢測流產(chǎn)胚胎2.MPLA技術(shù)檢測基因突變

醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn) 目錄

目錄
**篇常用儀器及基本技術(shù)方法
實(shí)驗(yàn)一普通光學(xué)顯微鏡的結(jié)構(gòu)與使用3
實(shí)驗(yàn)二熒光顯微鏡的結(jié)構(gòu)與使用9
實(shí)驗(yàn)三人類基因組DNA的提取與鑒定技術(shù)13
實(shí)驗(yàn)四瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)16
實(shí)驗(yàn)五聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)18
實(shí)驗(yàn)六DNA限制性內(nèi)切酶酶切技術(shù)21
實(shí)驗(yàn)七DNA分子雜交技術(shù)23
實(shí)驗(yàn)八聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)27
第二篇驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)九人類外周血淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)及染色體標(biāo)本制備30
實(shí)驗(yàn)十人類非顯帶染色體的核型分析33
實(shí)驗(yàn)十一人類G顯帶染色體標(biāo)本的制備與觀察36
實(shí)驗(yàn)十二人類G顯帶染色體核型分析38
實(shí)驗(yàn)十三人類高分辨顯帶染色體（HRB）標(biāo)本的制備與觀察43
實(shí)驗(yàn)十四人類染色體Q顯帶技術(shù)48
實(shí)驗(yàn)十五人類外周血淋巴細(xì)胞姐妹染色單體互換（SCE）技術(shù)50
實(shí)驗(yàn)十六人類性染色質(zhì)標(biāo)本的制作與觀察52
實(shí)驗(yàn)十七減數(shù)分裂標(biāo)本的制備與觀察55
實(shí)驗(yàn)十八微核的制作與觀察57
實(shí)驗(yàn)十九性別的基因診斷59
實(shí)驗(yàn)二十細(xì)菌抑制篩選試驗(yàn)63
實(shí)驗(yàn)二十一血清肌酸激酶活性的測定66
實(shí)驗(yàn)二十二肝豆?fàn)詈俗冃圆〉暮Y查69
實(shí)驗(yàn)二十三ABO血型與PTC嘗味試驗(yàn)71
實(shí)驗(yàn)二十四遺傳病系譜分析73
實(shí)驗(yàn)二十五Bayes法在遺傳咨詢中的應(yīng)用76
第三篇綜合創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)二十六肥胖的判斷標(biāo)準(zhǔn)與等級評定81
實(shí)驗(yàn)二十七人類腸道微生物基因組DNA的提取86
實(shí)驗(yàn)二十八人類腸道微生物多樣性分析88
實(shí)驗(yàn)二十九比較基因組雜交實(shí)驗(yàn)91
實(shí)驗(yàn)三十多重連接依賴的探針擴(kuò)增檢測亞端粒區(qū)拷貝數(shù)變化96
實(shí)驗(yàn)三十一單核苷酸多態(tài)性分析99
實(shí)驗(yàn)三十二遺傳咨詢101
參考文獻(xiàn)104
附錄106
附錄一生物繪圖106
附錄二實(shí)驗(yàn)常用試劑及配制方法107

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醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn) 節(jié)選

緒論一、醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵?《醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)》是遺傳學(xué)與醫(yī)學(xué)相結(jié)合的一門前沿學(xué)科，研究遺傳病發(fā)生機(jī)制、傳遞方式、診斷、治療、預(yù)后、再發(fā)風(fēng)險(xiǎn)和預(yù)防方法，從而控制遺傳病在一個(gè)家庭中的再發(fā)，降低它在人群中的危害。醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)課是醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)課程的重要內(nèi)容。通過實(shí)驗(yàn)，有助于加強(qiáng)和鞏固理論基礎(chǔ)知識，并了解和掌握本學(xué)科的基本實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和操作技能。通過實(shí)驗(yàn)操作，可以鍛煉學(xué)生的動手能力；通過實(shí)驗(yàn)操作，可以使學(xué)生掌握繪圖、書寫實(shí)驗(yàn)記錄和實(shí)驗(yàn)報(bào)告的基本方法與技巧；通過實(shí)驗(yàn)操作，也可以培養(yǎng)學(xué)生分析問題、綜合問題和解決問題等方面的能力。為此，要求學(xué)生做到以下幾點(diǎn)：實(shí)驗(yàn)課前做好預(yù)習(xí)，明確實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?shí)驗(yàn)原理；復(fù)習(xí)有關(guān)理論內(nèi)容；熟悉實(shí)驗(yàn)的主要步驟；初步估計(jì)和判定實(shí)驗(yàn)的可能結(jié)果。二、實(shí)驗(yàn)操作前的注意事項(xiàng) 1.準(zhǔn)備好教材、實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)、實(shí)驗(yàn)報(bào)告本、文具等個(gè)人**工具。 2.穿好白大褂，按規(guī)定座位就座。 3.保持安靜，認(rèn)真聽講，并仔細(xì)觀察帶教老師的示范操作。三、實(shí)驗(yàn)操作過程中的注意事項(xiàng) 1.認(rèn)真、規(guī)范操作，仔細(xì)觀察和綜合分析實(shí)驗(yàn)所出現(xiàn)的現(xiàn)象與結(jié)果并及時(shí)記錄。 2.如果實(shí)驗(yàn)結(jié)果與理論結(jié)果不一致，須及時(shí)進(jìn)行科學(xué)分析，判斷結(jié)果的可靠性，探求出現(xiàn)誤差的原因。 3.各種實(shí)驗(yàn)試劑應(yīng)輕拿輕放，用后放回原處，瓶蓋封嚴(yán)。 4.使用微量加樣器時(shí)，一定調(diào)整好取用量，按使用要求操作。 5.實(shí)驗(yàn)室應(yīng)保持肅靜，注意清潔衛(wèi)生，實(shí)驗(yàn)中用過的廢棄物品要及時(shí)清理、收集到垃圾桶，避免堵塞下水管道。四、實(shí)驗(yàn)后的注意事項(xiàng) 1.實(shí)驗(yàn)后，整理清潔所用儀器、設(shè)備，注意放回原位，以備下次使用。 2.如有儀器損壞，要及時(shí)填寫破損報(bào)告，并報(bào)告老師。 3.值日生要打掃、清潔實(shí)驗(yàn)室。 4.按要求做好實(shí)驗(yàn)記錄，并提交實(shí)驗(yàn)報(bào)告。 5.離開實(shí)驗(yàn)室前，檢查并關(guān)閉門、窗、水、電。五、實(shí)驗(yàn)室的意外處理實(shí)驗(yàn)室如遇著火、燙傷等意外事件發(fā)生，必須鎮(zhèn)靜做緊急處理，并立即報(bào)告老師。 1.著火：如遇酒精燈推倒或其他原因著火，首先將一切易燃品移至遠(yuǎn)處，然后用CO2滅火器滅火或者切斷電源。 2.灼傷或燙傷：皮膚被火灼傷或燙傷，用燙傷軟膏涂抹，如傷勢較重，立即送醫(yī)院治療。 3.有毒有害藥品：如有毒藥品潑濺到皮膚上，如EB、同位素等，應(yīng)用大量清水進(jìn)行清洗，必要時(shí)，去醫(yī)院處理。 4.割傷出血：遇玻璃割傷出血，可用碘酒或紅藥水消毒后，用紗布包扎。如有玻璃留在傷口，處理前應(yīng)先取出。 5.被實(shí)驗(yàn)動物咬傷：立即去醫(yī)務(wù)室消毒、包扎傷口，并注射疫苗，以防感染。 **篇常用儀器及基本技術(shù)方法實(shí)驗(yàn)一普通光學(xué)顯微鏡的結(jié)構(gòu)與使用一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1.熟悉普通光學(xué)顯微鏡的主要構(gòu)造及其性能。 2.掌握低倍鏡及高倍鏡的使用方法。 3.初步掌握油鏡的使用方法。 4.了解光學(xué)顯微鏡的維護(hù)方法。二、實(shí)驗(yàn)原理光學(xué)顯微鏡（lightmicroscope）是生物科學(xué)和醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域常用的儀器，是研究人體及其他生物機(jī)體組織和細(xì)胞結(jié)構(gòu)強(qiáng)有力的工具。光學(xué)顯微鏡簡稱光鏡，是利用光線照明使微小物體形成放大影像的儀器。一臺普通光鏡主要由機(jī)械系統(tǒng)和光學(xué)系統(tǒng)兩部分構(gòu)成，而光學(xué)系統(tǒng)則主要包括光源、反光鏡、聚光器、物鏡和目鏡等部件。物鏡和目鏡的結(jié)構(gòu)雖然比較復(fù)雜，但它們的作用都是相當(dāng)于一個(gè)凸透鏡，目鏡將標(biāo)本放大成一個(gè)虛像，通過調(diào)焦可使虛像落在眼睛的明視距離處，在視網(wǎng)膜上形成一個(gè)直立的實(shí)像。分辨力（resolvingpower）也稱為分辨率，是指人眼通過顯微鏡分辨出標(biāo)本上相互接近的兩點(diǎn)間的*小距離的能力。是光鏡的主要性能指示。顯微鏡的分辨力由物鏡的分辨力所決定與目鏡分辨力無關(guān)。光鏡的分辨力（R）（R值越小，分辨力越高）可以下式計(jì)算：這里n為聚光鏡與物鏡之間介質(zhì)的折射率（空氣為1，油為1.5）；θ為標(biāo)本對物鏡鏡口張角的半角，sin的*大值為1；λ為照明光源的波長（白光約為500nm）。放大率或放大倍數(shù)是光鏡性能的另一重要參數(shù)，顯微鏡的放大倍數(shù)等于目鏡放大倍數(shù)與物鏡放大倍數(shù)的乘積。三、實(shí)驗(yàn)用品和材料 1.器材普通光學(xué)顯微鏡、擦鏡紙、香柏油或液體石蠟（石蠟油）、羊毛交叉裝片、英文字母或數(shù)字的裝片。 2.清潔劑（乙醚7份+無水乙醇3份）、二甲苯。四、實(shí)驗(yàn)方法和步驟（一）光學(xué)顯微鏡的基本構(gòu)造及功能 1.機(jī)械部分（1）鏡筒：為光鏡*上方或鏡臂前方的圓筒狀結(jié)構(gòu)，其上端裝有目鏡，下端與物鏡轉(zhuǎn)換器相連。光鏡可分為單筒式或雙筒式兩類。單筒光鏡又分為直立式和傾斜式兩種。而雙筒式光鏡的鏡筒均為傾斜的。（2）物鏡轉(zhuǎn)換器：又稱物鏡轉(zhuǎn)換盤，是安裝在鏡筒下方的一圓盤狀構(gòu)造，可順時(shí)針或反時(shí)針方向自由旋轉(zhuǎn)。其上均勻分布有3～4個(gè)圓孔，用以裝載不同放大倍數(shù)的物鏡。使用時(shí)注意憑手感使所需物鏡準(zhǔn)確到位。（3）鏡臂：為支持鏡筒和鏡臺的彎曲狀構(gòu)造，是取用顯微鏡時(shí)握拿的部位。鏡筒直立式光鏡在鏡臂與其下方的鏡柱之間有一傾斜關(guān)節(jié)，可使鏡筒向后傾斜一定角度以方便觀察，但使用時(shí)傾斜角度不應(yīng)超過45°，否則顯微鏡則由于重心偏移容易翻倒。在使用臨時(shí)裝片時(shí)，千萬不要傾斜鏡臂，以免液體或染液流出，污染顯微鏡（圖1-1-1，圖1-1-2）。圖1-1-1Olympus顯微鏡（BHS型）圖1-1-2光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造（4）調(diào)節(jié)器：也稱調(diào)焦螺旋，為調(diào)節(jié)焦距的裝置，位于鏡臂的上端（鏡筒直立式光鏡）或下端（鏡筒傾斜式光鏡），分粗調(diào)螺旋和細(xì)調(diào)螺旋兩種。粗調(diào)螺旋使鏡筒或載物臺以較快速度或較大幅度的升降，能迅速調(diào)節(jié)好焦距使物像呈現(xiàn)在視野中，適于低倍鏡觀察時(shí)的調(diào)焦。而細(xì)調(diào)螺旋只能使鏡筒或載物臺緩慢或較小幅度的升降，適用于高倍鏡和油鏡的聚焦或觀察標(biāo)本的不同層次，一般在粗調(diào)螺旋調(diào)焦的基礎(chǔ)上再使用細(xì)調(diào)螺旋，精細(xì)調(diào)節(jié)焦距。（5）載物臺：也稱鏡臺，是位于物鏡轉(zhuǎn)換器下方的方形平臺，是放置被觀察的玻片標(biāo)本的地方。平臺的中央有一圓孔，稱為通光孔，下方光線經(jīng)此孔照射到標(biāo)本上。在載物臺上裝有標(biāo)本移動器（也稱標(biāo)本推進(jìn)器），移動器上安裝的彈簧夾用于固定玻片標(biāo)本，另外，轉(zhuǎn)動與移動器相連的兩個(gè)螺旋可使玻片標(biāo)本前后左右地移動，這樣尋找物像時(shí)較為方便。在標(biāo)本移動器上附有縱橫游標(biāo)尺，可以計(jì)算標(biāo)本移動的距離和確定標(biāo)本的位置。游標(biāo)尺一般由主標(biāo)尺（A）和副標(biāo)尺（B）組成。副標(biāo)尺的分度為主標(biāo)尺的9/10。使用時(shí)先看到標(biāo)尺的0點(diǎn)位置，再看主副標(biāo)尺刻度線的重合點(diǎn)即可讀出準(zhǔn)確的數(shù)值。（6）鏡柱：為鏡臂與鏡座相連的短柱。（7）鏡座：位于顯微鏡*底部的構(gòu)造，為整個(gè)顯微鏡的基座，用于支持和穩(wěn)定鏡體。有的顯微鏡在鏡座內(nèi)裝有照明光源等構(gòu)造。 2.光學(xué)系統(tǒng)部分光鏡的光學(xué)系統(tǒng)主要包括物鏡、目鏡和照明裝置（反光鏡、聚光器和光圈等）。（1）目鏡：又稱接目鏡，安裝在鏡筒的上端，將物鏡所放大的物像進(jìn)一步放大的作用。每個(gè)目鏡一般由兩個(gè)透鏡組成，在上下兩透鏡之間安裝有能決定視野大小的金屬光闌——視場光闌，此光闌的位置即是物鏡所放大實(shí)像的位置，故可將一小段頭發(fā)黏附在光闌上作為指針，用以指示視野中的某一部分供他人觀察。每臺顯微鏡通常配置2～3個(gè)不同放大倍率的目鏡，常見的有5×、10×和15×（×表示放大倍數(shù)）的目鏡，可根據(jù)不同的需要選擇使用，*常使用的是10×目鏡。（2）物鏡：也稱接物鏡，安裝在物鏡轉(zhuǎn)換器上。每臺光鏡一般有3～4個(gè)不同放大倍率的物鏡，是顯微鏡*主要的光學(xué)部件，決定著光鏡分辨力的高低。常用物鏡的放大倍數(shù)有10×、40×和100×等幾種。一般將8×或10×的物鏡稱為低倍鏡；將40×或45×的稱為高倍鏡；將90×或100×的稱為油鏡（這種鏡頭在使用時(shí)需浸在油中）。在每個(gè)物鏡上通常都刻有能反映其主要性能的參數(shù)，主要有放大倍數(shù)和數(shù)值孔徑（如10/0.25、40/0.65和100/1.25），該物鏡所要求的鏡筒長度和標(biāo)本上的蓋玻片厚度（160/0.17，單位：mm）等，另外，油鏡上還常標(biāo)有“油”或“Oil”的字樣。油鏡使用時(shí)需要用香柏油或石蠟油作為介質(zhì)，這是因?yàn)橄惆赜突蚴炗驼凵渎逝c玻璃近似的時(shí)（玻璃、香柏油和石蠟油的折射率分別為1.52、1.51、1.46，空氣為1），可減少光線的折射，增加視野亮度，提高分辨力。物鏡分辨力的大小取決于物鏡的數(shù)值孔徑（numericalaperture，NA），又稱為鏡口力，其數(shù)值越大，則表示分辨力越高。圖1-1-4物鏡的性能參數(shù)及工作距離 C線為蓋玻片的上表面，10×物鏡的工作距離為7.63mm；40×物鏡的工作距離為0.198mm；10/0.25、40/0.65、100/1.25表示鏡頭的放大倍數(shù)和數(shù)字孔徑。160/0.17表示顯微鏡的機(jī)械鏡筒長度（標(biāo)本至目鏡的距離）和蓋玻片的厚度。即鏡筒長度為160mm，蓋玻片厚度為0.17mm 不同的物鏡有不同的工作距離。所謂工作距離是指顯微鏡處于工作狀態(tài)（焦距調(diào)好、物像清晰）時(shí)，物鏡*下端與蓋玻片上表面之間的距離。物鏡的放大倍數(shù)與其工作距離成反比。當(dāng)?shù)捅剁R調(diào)節(jié)到工作距離后，可直接轉(zhuǎn)換高倍鏡或油鏡，細(xì)調(diào)螺旋稍加調(diào)節(jié)焦距便可見到清晰的物像，這種情況稱為同高調(diào)焦。不同放大倍數(shù)的物鏡也可從外形上加以區(qū)別，一般來說，物鏡的長度與放大倍數(shù)成正比，低倍鏡*短，油鏡*長，而高倍鏡的長度介于兩者之間（表1-1-1）。表1-1-1標(biāo)準(zhǔn)物鏡的性質(zhì) （3）聚光器：位于載物臺的通光孔的下方，由聚光鏡和光圈構(gòu)成，其主要功能是光線集中到所要觀察的標(biāo)本上。聚光鏡由2～3個(gè)透鏡組合而成，可將光線匯集成束。在聚光器的左下方有一調(diào)節(jié)螺旋可使其上升或下降調(diào)節(jié)光線的強(qiáng)弱，升高聚光器可使光線增強(qiáng)，反之則光線變?nèi)酢?光圈也稱為彩虹闌或孔徑光闌，位于聚光器的下端，是一種能控制進(jìn)入聚光器的光束大小的可變光闌。它由十幾張金屬薄片組合排列而成，其外側(cè)有一小柄，可使光圈的孔徑開大或縮小，以調(diào)節(jié)光線的強(qiáng)弱。在光圈的下方常裝有濾光片框，可放置不同顏色的濾光片。（4）反光鏡：位于聚光鏡的下方，可向各方向轉(zhuǎn)動，能將來自不同方向的光線反射到聚光器中。反光鏡有兩個(gè)面，一面為平面鏡，另一面為凹面鏡，凹面鏡有聚光作用，適于較弱光和散射光下使用，光線較強(qiáng)時(shí)則選用平面鏡（現(xiàn)在有些新型的光學(xué)顯微鏡都有自帶光源，而沒有反光鏡；有的二者都配置）。（二）光學(xué)顯微鏡的使用方法 1.準(zhǔn)備右手握住鏡臂，左手托住鏡座將顯微鏡小心從鏡箱中取出，放置在實(shí)驗(yàn)臺的偏左側(cè)，以鏡座的后端離實(shí)驗(yàn)臺邊緣6～10cm為宜。檢查顯微鏡的各個(gè)部件是否完整和正常。 2.低倍鏡的使用方法（1）對光：打開顯微鏡上的電源開關(guān)，轉(zhuǎn)動粗調(diào)螺旋，使鏡筒略升高（或使載物臺下降），調(diào)節(jié)物鏡轉(zhuǎn)換器，使低倍鏡轉(zhuǎn)到工作狀態(tài)（即對準(zhǔn)通光孔），當(dāng)鏡頭完全到位時(shí)，可聽到輕微的扣碰聲。打開光圈使聚光器上升到適當(dāng)位置（以聚光鏡上端透鏡平面稍低于載物臺平面的高度為宜）。然后用左眼向著目鏡內(nèi)觀察（注意兩眼應(yīng)同時(shí)睜開），同時(shí)調(diào)節(jié)亮度旋鈕，使視野內(nèi)的光線均勻、亮度適中。（2）放置玻片標(biāo)本：將玻片標(biāo)本放置到載物臺上彈簧夾固定好（注意：使有蓋玻片或有標(biāo)本的一面朝上），然后轉(zhuǎn)動標(biāo)本移動器的螺旋，使觀察的標(biāo)本部位對準(zhǔn)通光孔的中央。（3）調(diào)節(jié)焦距：用眼睛從側(cè)面注視低倍鏡，同時(shí)用粗調(diào)螺旋使載物臺上升，直至低倍鏡頭距玻片標(biāo)本的距離小于0.6cm，注意操作時(shí)必須從側(cè)面注視鏡頭與玻片的距離，以避免鏡頭碰破玻片。然后用左眼在目鏡上觀察，同時(shí)用左手慢慢轉(zhuǎn)動粗調(diào)螺旋使使載物臺下降直至視野中出現(xiàn)物像為

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