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生物化學實驗方法和技術 版權信息
- ISBN:9787030106858
- 條形碼:9787030106858 ; 978-7-03-010685-8
- 裝幀:一般膠版紙
- 冊數:暫無
- 重量:暫無
- 所屬分類:>>
生物化學實驗方法和技術 內容簡介
《生物化學實驗方法和技術》不同于以前傳統的生物化學實驗指導書的編寫模式。全書分為上、中、下三篇。上篇為生物化學實驗方法和技術原理,分為生化分離方法、生化分析方法、生化制備方法、生化代謝研究方法等4章。中篇為生物化學實驗,設計了基礎訓練、基本實驗、重點實驗、綜合實驗、選擇實驗等5個單元,共45個實驗。下篇為附錄,選擇了重點知識、重點數據和重要資料共17項。本書可供生物技術、生物工程、生物科學及農林院校的農學、植保、農化、園藝、林學等專業的學生及與生物科學相關的科技人員使用。
生物化學實驗方法和技術 目錄
目錄
前言
上篇 生物化學實驗方法和技術原理
**章 生物化學分離方法 3
**節 離心技術 3
一、離心沉降速率影響困素 3
二、沉降系數 5
三、離心設備 7
四、制各超離心法 7
第二節 層析技術 10
一、薄層層析 10
二、聚眈膠薄膜層析 11
三、凝膠層析 11
四、離子交換層析 13
五、親和層析 13
六、氣相色譜四
七、高效液相色譜 16
第三節 電泳技術 16
一、影響電泳的主要因素 17
二、常用電泳支持介質 18
三、聚丙烯酷膠凝膠盤狀電泳 19
四、連續密度梯度電泳 20
五、SDS-聚丙烯酷腦凝膠電泳 21
六、等電聚焦電泳 22
七、雙向凝膠電泳 22
八、毛細管電泳 22
九、電泳新技術 23
十、電泳相關技術 24
第四節 膜分離技術 28
一、膜的分類 28
二、膜的性能 29
三、膜的使用壽命 30
四、膜的分離技術 30
第二章 生物化學分析方法 33
**節 重量法 33
第二節 化學法 34
第三節 分光光度法 35
第四節 酶法 36
一、化學方法 37
二、儀器方法 37
第五節 色譜法 37
第六節 主要生物物質分析 38
一、碳水化合物分析 38
二、核酸分析 42
三、蛋白質分析 44
第三章 生物化學制備方法 46
**節 生物化學制備方法的特點 46
第二節 溶劑提取法 46
第三節 沉淀法 48
一、鹽析法 48
二、有機榕劑沉淀法 49
三、非離子多聚物沉淀法 49
第四節 濃縮與干燥 49
第五節 超臨界流體萃取 50
第六節 萃取與相分離 52
第七節 結晶 53
第四章 生物化學代謝研究方法 55
中篇 生物化學實驗
**單元 基礎訓練 61
實驗一 生化實驗要求及基本實驗設備識知 61
實驗二 植物試材水分測定和干樣制備 63
實驗三 高等植物材料丙酣粉的制備 67
實驗四 緩沖溶液的配制和氨基酸兩性性測定 69
實驗五 分光光度計線性分辨范圍測定 73
第二單元 基本實驗 76
實驗六 酶的基本性質 76
實驗七 轉氨酶活性鑒定(薄層層析法) 80
實驗八 淀粉酶活力測定 83
實驗九 腮酶Km值測定 86
實驗十 蛋白質的水解和氨基酸的紙層析法分離 90
實驗十一 蛋白質的兩性性質及等電點的測定 93
實驗十二 蛋白質含量測定(考馬斯亮藍G-250法) 95
實驗十三 還原糖和總糖含量的測定(3,5-二硝基水楊酸比色法) 97
實驗十四 丙酣酸含量的測定 100
實驗十五 抗壞血酸含量測定(2,6-二氯酷能酣法) 102
第三單元 重點實驗 107
實驗十六 脂肪含量的測定及高級脂肪酸組分分析(氣相色譜法) 107
實驗十七 單核苦酸的離子交換柱層析分離 110
實驗十八 RuBP矮化酶加氧酶的純化 114
實驗十九 連續密度梯度電泳法測定蛋白質的分子質量及純度 117
實驗二十 過氧化物酶同工酶聚丙烯酷股凝膠圓盤電泳 120
實驗二十一 雙向免疫擴散試驗 124
實驗二十三 質粒DNA的提取、酶切及電泳鑒定 127
實驗二十三 高等植物DNA的提取和純度鑒定 131
實驗二十四 酵母蛋白質和RNA的制備(稀堿法) 133
實驗二十五 酵母RNA的提制(濃鹽法) 136
實驗二十六 多酣氧化酶的制備和化學性質 139
第四單元 綜合實驗 142
實驗三十七 種子蛋白質系統分析 142
實驗二十八 果實菠蘿蛋白酶的動力學測定 150
實驗二十九 苯丙氨酸解氨酶的純化及活性測定 156
第五單元 選擇實驗 162
實驗三十 蛋白質含量測定(雙縮腮法) 162
實驗三十一 蛋白質含量測定(Folin-酣法) 164
實驗三十三 紫外吸收法測定蛋白質含量 166
實驗三十三 還原糖含量的測定(Somogyi-Nelson比色法) 168
實驗三十四 可溶性總糖的測定(惠酣比包法) 171
實驗三十五 可榕性總糖的測定(地衣酚-硫酸法) 174
實驗三十六 直鏈淀粉和支鏈淀粉的測定(雙波長法) 175
實驗三十七 租纖維的測定(酸性洗滌劑法) 179
實驗三十八 果膠質含量測定(重量法) 180
實驗三十九 1398中性蛋白酶活性的測定 183
實驗四十谷 物種子中賴氨酸含量的測定 186
實驗四十一 甲醒滴定法測定氨基氮 188
實驗四十二 醋酸纖維薄膜電泳分離核昔酸 191
實驗四十三 蛋白質脫鹽(透析和凝膠過濾) 193
實驗四十四 葉綠素含量測定(分光光度法) 197
實驗四十五 質膜透性與抗旱性鑒定(連續升溫電導法) 200
下篇 附錄
一、實驗室安全及防護知識 207
二、Union Carbide各種型號透析管的滲透范圍 210
三、Sepctro por再生纖維素膜鍾析袋的鼓據 210
四、纖維素酯膜透析袋的數據 212
五、Amicon圓形超謔膜的規格和有效過濾面積的數據 213
六、Amicon圓形超濾膜的流速 214
七、硫酸鍍飽和度的常用襄 214
1.調整硫酸鍍潛液飽和度計算表(25℃) 214
2.調整硫酸鍍溶液飽和度計算表(0℃) 215
3.調整硫酸鏡溶液飽和度計算表(23℃) 216
八、緩沖溶液的配制方法 217
1.氯化鉀-鹽酸緩沖液(0.05mol/L,pH 10~22.25℃) 217
2.甘氨酸-鹽酸緩沖液(0.05mol/L,pH 22~36.25℃) 217
3.鄰苯二甲酸氫錦-鹽酸緩沖液(0.05mol/L,pH 2.2~4.0,25℃) 217
4.擰攘酸-擰攘酸鈾緩沖液(01mol/L,pH 3.0~62) 218
5.磷酸氫二銷-擰攘酸緩沖液(pH 2.6~7.6) 218
6.乙酸-乙酸餉緩沖液(0.2mol/L,pH 3.7~5.8,18℃) 218
7.二甲基戊二酸-氫氧化鈾緩沖液(0.05mol/L,pH 3.2~7.6) 219
8.丁二酸告氧化納緩沖液(0.05mo 1/L,pH 3.8~6.0,25℃) 219
9.鄰苯二甲酸氫傭-氫氧化鈾緩沖液(pH 4.1~5.9,25℃) 220
10.磷酸氫三鈾-磷酸三氫鈾緩沖液(0.2mol/L,pH 5.8~8.0,25℃) 220
11.磷酸二氫伺-氫氧化鈾緩沖液(pH 5.8~8.0) 220
12.Tris-HCl緩沖液(0.05mol/L,pH 7~9) 221
13.巴比妥-鹽酸緩沖液(pH 6.8~9.6,18℃) 221
14.2,4,6-三甲基唯睫-鹽酸緩沖液(pH 6.4~8.3) 221
15.跚砂-唰酸緩沖液(pH 7.4~9.0) 222
16.跚砂緩沖液(pH 8.1~10.7,25℃) 222
17.甘氨酸-氫氧化鈾緩沖液(pH 86~106,25℃) 222
18.碳酸鈾碳酸氫鈾緩沖液(0.1mol/L,pH 9.2~10.8) 223
19.跚酸-氧化餌-氫氧化鈾緩沖液(0.1mol/L,pH 8.O~10.2) 223
20.二乙醇胺-鹽酸緩沖液(0.05mol/L,pH 8.0~10.0,25℃) 223
21.硼砂一氫氧化鈾緩沖液(0.05mol/L,硼酸根,pH 9.3~10.1) 224
22.磷酸氫二鍋告氧化鍋緩沖液(0.025mol/L,pH 11.0~11.9,25℃) 224
23.氯化鉀一氫氧化鈾緩沖液(0.05mol/L,pH 12.0~13.0,25℃) 224
24.廣范圍緩沖液(pH 2.6~12.0,18℃) 225
25.離子強度恒定的緩沖液(pH 2.0~12.0) 225
26.酸度計標準緩沖溶液的配制 226
九、凝膠數據表 227
1.Sephadex G型交聯葡聚糖凝肢的數據 227
2.Sephadex G型交聯葡聚糖凝膠榕脹所需時間 228
3.瓊脂糖凝肢的數據 228
4.Superose的數據 229
5.瓊脂糖凝膠Bio-GelA型的數據 229
6.Bio-Gel P型凝膠的數據 230
7.交聯聚苯乙烯凝膠Bio-BeadsS-X型的數據 230
8.制備級Superdex凝膠過濾介質的數據 231
9.聚乙烯醇型凝膠Toyopearl的數據 232
10.各種凝肢所允許的*大操作壓 232
十、凝肢過溫用標準蛋白 232
1.凝膠過濾用低分子質量標準的組成 232
2.凝肢過濾用高分子質量標準的組成 233
3.凝肢過濾用分子質量標準品 233
十一、薄層層析分離各類物質常用的展層溶劑 233
十二、各類物質常用的薄層顯色 235
十三、腐蝕性萬能薄層顯色劑 235
十四、電豫染色方法 235
(一)核酸染色 235
(二)蛋白質染色 237
(三)糖蛋白染色 238
(四)脂蛋白染色 239
(五)同工酶染色 239
十五、實驗誤差與提高實驗準確度的方法 245
(一)實驗誤差 245
(二)誤差來源 246
十六、常用儀器使用方法 247
(一)恒溫箱 247
(二)電熱恒溫水浴 248
(三)電動離心機 248
(四)722型光柵分光光度計 249
(五)751G型分光光度計 250
(六)自動部分收集器 251
(七)核酸蛋白檢測儀 253
(八)電子頂載天平 253
(九)電子分析天平 254
(十)pHS-3C型數字酸度計 255
(十一)pHS-2型酸度計 255
(十二)移液器的使用 257
圖版
前言
上篇 生物化學實驗方法和技術原理
**章 生物化學分離方法 3
**節 離心技術 3
一、離心沉降速率影響困素 3
二、沉降系數 5
三、離心設備 7
四、制各超離心法 7
第二節 層析技術 10
一、薄層層析 10
二、聚眈膠薄膜層析 11
三、凝膠層析 11
四、離子交換層析 13
五、親和層析 13
六、氣相色譜四
七、高效液相色譜 16
第三節 電泳技術 16
一、影響電泳的主要因素 17
二、常用電泳支持介質 18
三、聚丙烯酷膠凝膠盤狀電泳 19
四、連續密度梯度電泳 20
五、SDS-聚丙烯酷腦凝膠電泳 21
六、等電聚焦電泳 22
七、雙向凝膠電泳 22
八、毛細管電泳 22
九、電泳新技術 23
十、電泳相關技術 24
第四節 膜分離技術 28
一、膜的分類 28
二、膜的性能 29
三、膜的使用壽命 30
四、膜的分離技術 30
第二章 生物化學分析方法 33
**節 重量法 33
第二節 化學法 34
第三節 分光光度法 35
第四節 酶法 36
一、化學方法 37
二、儀器方法 37
第五節 色譜法 37
第六節 主要生物物質分析 38
一、碳水化合物分析 38
二、核酸分析 42
三、蛋白質分析 44
第三章 生物化學制備方法 46
**節 生物化學制備方法的特點 46
第二節 溶劑提取法 46
第三節 沉淀法 48
一、鹽析法 48
二、有機榕劑沉淀法 49
三、非離子多聚物沉淀法 49
第四節 濃縮與干燥 49
第五節 超臨界流體萃取 50
第六節 萃取與相分離 52
第七節 結晶 53
第四章 生物化學代謝研究方法 55
中篇 生物化學實驗
**單元 基礎訓練 61
實驗一 生化實驗要求及基本實驗設備識知 61
實驗二 植物試材水分測定和干樣制備 63
實驗三 高等植物材料丙酣粉的制備 67
實驗四 緩沖溶液的配制和氨基酸兩性性測定 69
實驗五 分光光度計線性分辨范圍測定 73
第二單元 基本實驗 76
實驗六 酶的基本性質 76
實驗七 轉氨酶活性鑒定(薄層層析法) 80
實驗八 淀粉酶活力測定 83
實驗九 腮酶Km值測定 86
實驗十 蛋白質的水解和氨基酸的紙層析法分離 90
實驗十一 蛋白質的兩性性質及等電點的測定 93
實驗十二 蛋白質含量測定(考馬斯亮藍G-250法) 95
實驗十三 還原糖和總糖含量的測定(3,5-二硝基水楊酸比色法) 97
實驗十四 丙酣酸含量的測定 100
實驗十五 抗壞血酸含量測定(2,6-二氯酷能酣法) 102
第三單元 重點實驗 107
實驗十六 脂肪含量的測定及高級脂肪酸組分分析(氣相色譜法) 107
實驗十七 單核苦酸的離子交換柱層析分離 110
實驗十八 RuBP矮化酶加氧酶的純化 114
實驗十九 連續密度梯度電泳法測定蛋白質的分子質量及純度 117
實驗二十 過氧化物酶同工酶聚丙烯酷股凝膠圓盤電泳 120
實驗二十一 雙向免疫擴散試驗 124
實驗二十三 質粒DNA的提取、酶切及電泳鑒定 127
實驗二十三 高等植物DNA的提取和純度鑒定 131
實驗二十四 酵母蛋白質和RNA的制備(稀堿法) 133
實驗二十五 酵母RNA的提制(濃鹽法) 136
實驗二十六 多酣氧化酶的制備和化學性質 139
第四單元 綜合實驗 142
實驗三十七 種子蛋白質系統分析 142
實驗二十八 果實菠蘿蛋白酶的動力學測定 150
實驗二十九 苯丙氨酸解氨酶的純化及活性測定 156
第五單元 選擇實驗 162
實驗三十 蛋白質含量測定(雙縮腮法) 162
實驗三十一 蛋白質含量測定(Folin-酣法) 164
實驗三十三 紫外吸收法測定蛋白質含量 166
實驗三十三 還原糖含量的測定(Somogyi-Nelson比色法) 168
實驗三十四 可溶性總糖的測定(惠酣比包法) 171
實驗三十五 可榕性總糖的測定(地衣酚-硫酸法) 174
實驗三十六 直鏈淀粉和支鏈淀粉的測定(雙波長法) 175
實驗三十七 租纖維的測定(酸性洗滌劑法) 179
實驗三十八 果膠質含量測定(重量法) 180
實驗三十九 1398中性蛋白酶活性的測定 183
實驗四十谷 物種子中賴氨酸含量的測定 186
實驗四十一 甲醒滴定法測定氨基氮 188
實驗四十二 醋酸纖維薄膜電泳分離核昔酸 191
實驗四十三 蛋白質脫鹽(透析和凝膠過濾) 193
實驗四十四 葉綠素含量測定(分光光度法) 197
實驗四十五 質膜透性與抗旱性鑒定(連續升溫電導法) 200
下篇 附錄
一、實驗室安全及防護知識 207
二、Union Carbide各種型號透析管的滲透范圍 210
三、Sepctro por再生纖維素膜鍾析袋的鼓據 210
四、纖維素酯膜透析袋的數據 212
五、Amicon圓形超謔膜的規格和有效過濾面積的數據 213
六、Amicon圓形超濾膜的流速 214
七、硫酸鍍飽和度的常用襄 214
1.調整硫酸鍍潛液飽和度計算表(25℃) 214
2.調整硫酸鍍溶液飽和度計算表(0℃) 215
3.調整硫酸鏡溶液飽和度計算表(23℃) 216
八、緩沖溶液的配制方法 217
1.氯化鉀-鹽酸緩沖液(0.05mol/L,pH 10~22.25℃) 217
2.甘氨酸-鹽酸緩沖液(0.05mol/L,pH 22~36.25℃) 217
3.鄰苯二甲酸氫錦-鹽酸緩沖液(0.05mol/L,pH 2.2~4.0,25℃) 217
4.擰攘酸-擰攘酸鈾緩沖液(01mol/L,pH 3.0~62) 218
5.磷酸氫二銷-擰攘酸緩沖液(pH 2.6~7.6) 218
6.乙酸-乙酸餉緩沖液(0.2mol/L,pH 3.7~5.8,18℃) 218
7.二甲基戊二酸-氫氧化鈾緩沖液(0.05mol/L,pH 3.2~7.6) 219
8.丁二酸告氧化納緩沖液(0.05mo 1/L,pH 3.8~6.0,25℃) 219
9.鄰苯二甲酸氫傭-氫氧化鈾緩沖液(pH 4.1~5.9,25℃) 220
10.磷酸氫三鈾-磷酸三氫鈾緩沖液(0.2mol/L,pH 5.8~8.0,25℃) 220
11.磷酸二氫伺-氫氧化鈾緩沖液(pH 5.8~8.0) 220
12.Tris-HCl緩沖液(0.05mol/L,pH 7~9) 221
13.巴比妥-鹽酸緩沖液(pH 6.8~9.6,18℃) 221
14.2,4,6-三甲基唯睫-鹽酸緩沖液(pH 6.4~8.3) 221
15.跚砂-唰酸緩沖液(pH 7.4~9.0) 222
16.跚砂緩沖液(pH 8.1~10.7,25℃) 222
17.甘氨酸-氫氧化鈾緩沖液(pH 86~106,25℃) 222
18.碳酸鈾碳酸氫鈾緩沖液(0.1mol/L,pH 9.2~10.8) 223
19.跚酸-氧化餌-氫氧化鈾緩沖液(0.1mol/L,pH 8.O~10.2) 223
20.二乙醇胺-鹽酸緩沖液(0.05mol/L,pH 8.0~10.0,25℃) 223
21.硼砂一氫氧化鈾緩沖液(0.05mol/L,硼酸根,pH 9.3~10.1) 224
22.磷酸氫二鍋告氧化鍋緩沖液(0.025mol/L,pH 11.0~11.9,25℃) 224
23.氯化鉀一氫氧化鈾緩沖液(0.05mol/L,pH 12.0~13.0,25℃) 224
24.廣范圍緩沖液(pH 2.6~12.0,18℃) 225
25.離子強度恒定的緩沖液(pH 2.0~12.0) 225
26.酸度計標準緩沖溶液的配制 226
九、凝膠數據表 227
1.Sephadex G型交聯葡聚糖凝肢的數據 227
2.Sephadex G型交聯葡聚糖凝膠榕脹所需時間 228
3.瓊脂糖凝肢的數據 228
4.Superose的數據 229
5.瓊脂糖凝膠Bio-GelA型的數據 229
6.Bio-Gel P型凝膠的數據 230
7.交聯聚苯乙烯凝膠Bio-BeadsS-X型的數據 230
8.制備級Superdex凝膠過濾介質的數據 231
9.聚乙烯醇型凝膠Toyopearl的數據 232
10.各種凝肢所允許的*大操作壓 232
十、凝肢過溫用標準蛋白 232
1.凝膠過濾用低分子質量標準的組成 232
2.凝肢過濾用高分子質量標準的組成 233
3.凝肢過濾用分子質量標準品 233
十一、薄層層析分離各類物質常用的展層溶劑 233
十二、各類物質常用的薄層顯色 235
十三、腐蝕性萬能薄層顯色劑 235
十四、電豫染色方法 235
(一)核酸染色 235
(二)蛋白質染色 237
(三)糖蛋白染色 238
(四)脂蛋白染色 239
(五)同工酶染色 239
十五、實驗誤差與提高實驗準確度的方法 245
(一)實驗誤差 245
(二)誤差來源 246
十六、常用儀器使用方法 247
(一)恒溫箱 247
(二)電熱恒溫水浴 248
(三)電動離心機 248
(四)722型光柵分光光度計 249
(五)751G型分光光度計 250
(六)自動部分收集器 251
(七)核酸蛋白檢測儀 253
(八)電子頂載天平 253
(九)電子分析天平 254
(十)pHS-3C型數字酸度計 255
(十一)pHS-2型酸度計 255
(十二)移液器的使用 257
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