掃一掃
關(guān)注中圖網(wǎng)
官方微博
>
生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)-(第二版)
本類(lèi)五星書(shū)更多>
-
>
貨幣大歷史:金融霸權(quán)與大國(guó)興衰六百年
-
>
(精)方力鈞作品圖錄
-
>
《藏書(shū)報(bào)》2021合訂本
-
>
(精)中國(guó)當(dāng)代書(shū)畫(huà)名家作品集·范碩:書(shū)法卷+繪畫(huà)卷(全2卷)
-
>
(噴繪樓閣版)女主臨朝:武則天的權(quán)力之路
-
>
書(shū)里掉出來(lái)一只狼+狼的故事-全2冊(cè)
-
>
奇思妙想創(chuàng)意玩具書(shū)(精裝4冊(cè))
中圖價(jià):¥9.3
加入購(gòu)物車(chē)
生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)-(第二版) 版權(quán)信息
- ISBN：9787506735872
- 條形碼：9787506735872 ; 978-7-5067-3587-2
- 裝幀：暫無(wú)
- 冊(cè)數(shù)：暫無(wú)
- 重量：暫無(wú)
- 所屬分類(lèi)：
生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)-(第二版) 節(jié)選
nbsp; 言
1993年，原國(guó)家醫(yī)藥管理局科技教育司鑒于我國(guó)藥學(xué)高等專(zhuān)科教育一直沒(méi)有進(jìn)行
全國(guó)性的教材建設(shè)，根據(jù)國(guó)家教委(1991)25號(hào)文的要求負(fù)責(zé)組織、規(guī)劃高等藥學(xué)專(zhuān)科
教材的編審出版工作。在國(guó)家教委的指導(dǎo)下，在對(duì)全國(guó)高等藥學(xué)專(zhuān)科教育情況調(diào)查的基
礎(chǔ)上，普通高等專(zhuān)科教育藥學(xué)類(lèi)教材建設(shè)委員會(huì)于1993年底正式成立，并立即制訂了
“八五”教材編審出版規(guī)劃。1995年，經(jīng)100多位專(zhuān)家組、編寫(xiě)組教師和中國(guó)醫(yī)藥科技
出版社的團(tuán)結(jié)協(xié)作、共同努力，建國(guó)以來(lái)**套普通高等專(zhuān)科教育藥學(xué)類(lèi)規(guī)劃教材終于
面世了。其后，又根據(jù)高等藥學(xué)專(zhuān)科教育的主要任務(wù)是為醫(yī)藥行業(yè)生產(chǎn)、流通、服務(wù)、
管理**線培養(yǎng)應(yīng)用型技術(shù)人才的需要，立即組織編審、出版了相關(guān)的配套教材(實(shí)驗(yàn)
指導(dǎo)、習(xí)題集)，以加強(qiáng)對(duì)學(xué)生的實(shí)驗(yàn)教學(xué)，培養(yǎng)學(xué)生的實(shí)際操作能力。
該套規(guī)劃教材是國(guó)家教委“八五”教材建設(shè)的一個(gè)組成部分。從當(dāng)時(shí)高等藥學(xué)專(zhuān)科
教育的現(xiàn)實(shí)情況考慮，統(tǒng)籌規(guī)劃、全面組織教材建設(shè)活動(dòng)，為優(yōu)化教材編審隊(duì)伍，確保
教材質(zhì)量，規(guī)范教材規(guī)格，起到了至關(guān)重要的作用。也正因?yàn)槿绱耍@套規(guī)劃教材受到
了藥學(xué)專(zhuān)科教育的大多數(shù)院校的追崇及廣大師生的喜愛(ài)，其使用情況一直作為全國(guó)高等
藥學(xué)專(zhuān)科教育教學(xué)質(zhì)量評(píng)估的基本依據(jù)之一，可見(jiàn)這套教材的影響之大。
由于我國(guó)的高等教育近年進(jìn)行了一系列改革，我國(guó)藥學(xué)高等專(zhuān)科教育變化也較大，
加之教學(xué)大綱的不斷調(diào)整，這套教材已不能滿(mǎn)足現(xiàn)在的教學(xué)需要，亟需進(jìn)行修訂。但
是，因?yàn)樵鞴懿块T(mén)已不再管理我國(guó)藥學(xué)高等專(zhuān)科教育，加之一些高等藥學(xué)專(zhuān)科學(xué)校已
經(jīng)合并到其他院校，原普通高等專(zhuān)科教育藥學(xué)類(lèi)教材建設(shè)委員會(huì)已不能履行修訂計(jì)劃。
因此，全國(guó)高等醫(yī)藥院校藥學(xué)類(lèi)教材編輯委員會(huì)接管了這項(xiàng)工作，組成了新的普通高等
專(zhuān)科教育藥學(xué)類(lèi)教材建設(shè)委員會(huì)，組織了這套規(guī)劃教材的修訂，希望修訂后的這套規(guī)劃
教材能夠適應(yīng)當(dāng)前高等藥學(xué)專(zhuān)科教育發(fā)展的需求。在修訂過(guò)程中，考慮到高等專(zhuān)科教育
中全日制教育、函授教育、自學(xué)考試等多種辦學(xué)形式，力求使這套教材能具有通用性，
以適應(yīng)不同辦學(xué)形式的教學(xué)要求。學(xué)術(shù)是有繼承性的，雖然**版的一些作者已經(jīng)退休
或因?yàn)槠渌螂x開(kāi)了藥學(xué)高等專(zhuān)科教育崗位，不能繼續(xù)參加這套教材的修訂工作，但
是他們對(duì)這套教材做出了非常重大的貢獻(xiàn)，在此，我們謹(jǐn)對(duì)他們表示衷心的感謝。
這套規(guī)劃教材修訂出版后，竭誠(chéng)歡迎使用本教材的廣大讀者提出寶貴意見(jiàn)，以便我
們進(jìn)行教材評(píng)優(yōu)工作，不足之處我們將在以后修訂時(shí)改正。
全國(guó)普通高等專(zhuān)科教育
藥學(xué)類(lèi)規(guī)劃教材建設(shè)委員會(huì)
2003年12月
實(shí)驗(yàn)四sDs一聚丙烯酰胺凝膠電泳法
測(cè)宦蛋白質(zhì)分子量
【目的】
1．掌握SDS—PAGE測(cè)定蛋白質(zhì)分子量的基本原理。
2．熟悉垂直板型電泳的基本操作技術(shù)。
3．了解標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作以及測(cè)定蛋白質(zhì)分子量的方法。
【原理】
蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中支持物上的遷移率差異主要取決于樣品中各種分子攜帶的電荷、分
子的大小與形狀的差別。要利用聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)測(cè)定某一物質(zhì)的分子量，
必須排除電荷、分子形狀等因素或使其作用減少到忽略不計(jì)的程度，使該物質(zhì)遷移率的
大小僅僅取決于其分子量的大小。
1967年，Shapiro等人發(fā)現(xiàn)，如果在聚丙烯酰胺凝膠電泳系統(tǒng)中加入陰離子去垢劑
十二烷基硫酸鈉(SDS)后，蛋白質(zhì)的遷移率將主要取決于其分子量的大小。SDS是一
種陰離子去垢劑，在溶液中能與蛋白質(zhì)分子的疏水部分定量結(jié)合，把多亞基蛋白質(zhì)拆成
亞單位，并帶上陰離子。這些陰離子掩蓋了蛋白質(zhì)分子本身所帶的電荷差異，所以
SDS一聚丙烯酰胺電泳(SDS—PAGE)消除了電荷效應(yīng)，只有分子篩效應(yīng)，故蛋白質(zhì)電
泳遷移率完全取決于分子量，遷移率與分子量對(duì)數(shù)呈線性關(guān)系。即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得
蛋白質(zhì)的近似分子量。
【器材】
1．電泳儀
2．垂直板狀電泳槽及膠板裝置
3．細(xì)長(zhǎng)頭滴管
4．微量加樣器和吸頭
5．帶長(zhǎng)針頭微量注射器
6．1．5ml的離心管
7．不銹鋼藥鏟
8．小燒杯和大培養(yǎng)皿
9．濾紙和尺子
【試劑】
1．凝膠貯備液
稱(chēng)取丙烯酰胺(Acr)30g，甲叉丙烯酰胺(Bis)0．8g，加蒸餾水溶至100ml，用三
號(hào)濾紙過(guò)濾，于棕色瓶中413保存，一般可用1個(gè)月。
2．分離膠緩沖液
稱(chēng)取三羥甲基氨基甲烷(Tris)36．3g，lmol／L HCl溶液48ml，加雙蒸餾水
(ddH20)至80ml使其溶解，調(diào)pH至8．9，然后用ddH20稀釋至100ml，置棕色瓶中，
4C貯存。
3．濃縮膠緩沖液 一
取Tris堿5．98g，lmol／L HCl溶液48ml，加ddH20至80mi，調(diào)pH 6．7，用ddH20
稀釋至100ml，置棕色瓶中，4C保存。
4．Tris一甘氨酸電極緩沖液
稱(chēng)取’Dis 6．0g、甘氨酸28．8g，加ddH20 850ml，調(diào)pH至8．3，加ddH20定容至
1000ml，4。C貯存。用時(shí)可作10倍稀釋。
5．10％過(guò)硫酸銨
稱(chēng)取過(guò)硫酸銨0．5g，加ddH20 5mi，貯于4C保存。
6．TEMED【四甲基Z,--胺)
7．10％SDS
稱(chēng)取SDS 1g，加蒸餾水10ml使其溶解。
8．上樣緩沖液
取濃縮膠緩沖液6．25ml、蔗糖10g、SDS 2．0g、溴酚藍(lán)0．1g，甘油20ml，加ddH20
定容至100ml。
9．考馬斯亮藍(lán)染色試劑
(1)考馬斯亮藍(lán)R250染色液濃度為2．5g／L，用甲醇：醋酸：蒸餾水=5：l：5的溶
液配制(V／V)。
(2)考馬斯亮藍(lán)脫色液取冰醋酸7．5ml、甲醇5mi，加ddH20至100mlo
10．樣品和分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白
樣品為人血清。分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白可用細(xì)胞色素C、肌紅蛋白、γ一球蛋白、碳酸酐
酶、卵白蛋白、白蛋白(人)和轉(zhuǎn)鐵蛋白(人)等。
【操作】 。
1．玻璃板的準(zhǔn)備
將玻璃板洗滌干凈，固定于電泳槽上，0．8％瓊脂糖密封邊緣。
2．電泳凝膠制備
(1)分離膠的制備取凝膠貯備液4．9ml，分離膠緩沖液2．5ml，蒸餾水12．25ml，
10％SDS 0．2ml，TEMED 0．05ml，10％過(guò)硫酸銨溶液0．1ml，混勻。立即用細(xì)長(zhǎng)頭的滴
管將凝膠溶液加于玻璃板間，上部用ddH20或30％乙醇(約3～4mm)封面，保持膠面
平整，室溫下靜置約30～60min。待分離膠凝固后，可看到清晰的膠水界面。此膠濃度
為2．6％。
(2)濃縮膠的制備用濾紙吸去分離膠上層多余的水，但不要碰破膠面。再用注射
器取濃縮膠緩沖液洗滌膠面數(shù)次，即可制備濃縮膠。
取凝膠貯備液lml，濃縮膠緩沖液1．25ml、ddIH2O120 7．5ml、10％SDS 0．1ml、
TEMED 0．05ml、10％過(guò)硫酸銨0．1ml，混勻后，立即用細(xì)長(zhǎng)頭滴管將凝膠溶液加到分離
膠的上方，直至距玻璃板上緣約0．5cm處，再輕輕插入樣品梳，靜置40min，使其充分
聚合，此膠濃度為2．6％。凝膠聚合后，小心拔去梳子，用去離子水沖洗梳孔以除去未
聚合的丙烯酰胺。在兩電極槽中加入10倍稀釋的電極緩沖液，即可上樣電泳。
3．樣品預(yù)處理和加樣
取血清0．1ml、上樣緩沖液0．9ml，混勻，在沸水中煮沸5min。用微量注射器將樣
品加到梳孔中，上樣量一般5～20μl。用同樣方法處理已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)后用微量
注射器依次將樣品加到各梳孔，對(duì)于未使用的梳孔，*好加上上樣緩沖液。
4．電泳
上槽接負(fù)極，下槽接正極，調(diào)電壓為8V／cm凝膠(30～50V)，開(kāi)始電泳，當(dāng)待測(cè)樣
在濃縮膠部分濃縮成一條線后，將電壓增加到15V／cm凝膠(60～100V)，繼續(xù)電泳直至
染料抵達(dá)距分離膠下端約1cm處，停止電泳，斷開(kāi)電源。
5．考馬斯亮藍(lán)11250染色
電泳結(jié)束后，取出電泳膠模，移去固定框，用不銹鋼藥鏟輕輕將一塊玻璃板撬開(kāi)移
去，在膠板一端切除一角作為標(biāo)記，將膠板移至大培養(yǎng)皿中。精確量取并記錄分離膠膠
長(zhǎng)度和指示染料的遷移距離(分離膠上緣到染料條帶中心距離)。然后將凝膠板浸入考馬
斯亮藍(lán)染色液中染色1h，再用脫色液脫色1～2天，直至背景無(wú)色為止。
6．校正曲線的數(shù)據(jù)處理和分子量測(cè)定
精確量取并記錄染色后凝膠長(zhǎng)度、各已知分子量標(biāo)準(zhǔn)的蛋白質(zhì)和各待測(cè)蛋白質(zhì)區(qū)帶的
遷移距離(分離膠上緣到各蛋白質(zhì)區(qū)帶中心)。按下式計(jì)算各蛋白質(zhì)的相對(duì)遷移率(Rf值)：
蛋白質(zhì)染色區(qū)帶遷移距離×染色前凝膠的長(zhǎng)度
kf一 指示染料的遷移距離×染色后凝膠的長(zhǎng)度
分別求得已知分子量標(biāo)準(zhǔn)的蛋白質(zhì)和樣品蛋白質(zhì)的Rf值后，在半對(duì)數(shù)紙上，以分子
量的對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)、以各標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)的Rf值為橫坐標(biāo)作圖，可得一條分子量標(biāo)準(zhǔn)曲線。
根據(jù)各待測(cè)蛋白質(zhì)的Rf值，查此曲線，可求得各待測(cè)蛋白質(zhì)的相對(duì)分子量(表3—3)。
表3—3標(biāo)準(zhǔn)蛋白分子量及對(duì)數(shù)值
書(shū)友推薦
- >
山海經(jīng)
- >
伊索寓言-世界文學(xué)名著典藏-全譯本
- >
月亮與六便士
- >
朝聞道
- >
苦雨齋序跋文-周作人自編集
- >
小考拉的故事-套裝共3冊(cè)
- >
中國(guó)人在烏蘇里邊疆區(qū):歷史與人類(lèi)學(xué)概述
- >
煙與鏡
本類(lèi)暢銷(xiāo)
